أخذ عينات الأنف بالفرشاة ومعالجتها باستخدام المجهر الرقمي عالي السرعة بالفيديو الهدبي - التكيف مع جائحة COVID-19

يمنع الافتقار إلى إجراءات التشغيل الرسمية المنشورة والتوحيد القياسي اعتبار الفحص المجهري الرقمي عالي السرعة اختبارا تشخيصيا تأكيديا لخلل الحركة الهدبي الأولي. علاوة على ذلك ، لمواصلة تقديم خدمة التشخيص خلال أزمة COVID-19 هذه ، تم تكييف بروتوكول الفحص المجهري بالفيديو الهدبي ليشمل تدابير كافية لمكافحة العدوى. التقييم الوظيفي الهدبي باستخدام الفحص المجهري الرقمي عالي السرعة بالفيديو حساس للغاية ومحددا لتشخيص خلل الحركة الهدبي الأولي.

بالمقارنة مع الاختبارات التشخيصية الأولية الأخرى لخلل الحركة الهدبي ، فإن الفحص المجهري الرقمي عالي السرعة سهل نسبيا ، وغير مكلف ، وقد تكون النتائج متاحة خلال اليوم. يتميز الفحص المجهري الرقمي عالي السرعة بالفيديو بحساسية وخصوصية أعلى لتشخيص خلل الحركة الهدبي الأولي. حاليا ، يتم التعرف على المجهر الإلكتروني والاختبارات الجينية فقط كاختبارات تأكيدية لخلل الحركة الهدبي الأولي ، لكن هذه الاختبارات ستفقد تشخيص خلل الحركة الهدبي الأولي في 15 إلى 30٪ من المرضى.

سيوضح إجراء تنظيف الأنف بالفرشاة ليونيل بينشيمول ، مقيم في الأنف والأذن والحنجرة من مختبري. قبل جمع عينة الأنف ، اطلب من المريض نفخ أنفه. بعد تنظيف الممرات الأنفية ، اجعل المريض يستلقي أو يجلس بشكل مريح مع وضع الرأس للخلف.

رج الفرشاة في المتوسط المكمل 199 لترطيبها ، وضع منظار داخلي عند مدخل الأنف لتصور القشقة الأنفية السفلية. أدخل فرشاة علم الخلايا في الأنف ، وحرك الفرشاة للخلف وللأمام عدة مرات فوق الجزء الخلفي من المحارة الأنفية السفلية قبل الانسحاب. ضع الفرشاة في أنبوب M199.

اقطع السلك بحيث يمكن وضعه تماما داخل الأنبوب ، وأغلق الأنبوب على الفور. ثم ضع العينة في كيس مزدوج محكم الإغلاق. في غضون تسع ساعات من جمع العينة ، افتح أنابيب العينة في خزانة أمان ميكروبيولوجية ، واستخدم ملقط الأنف Weil-Blakesley لتحريك الفرشاة لإخراج الشرائط الظهارية المجمعة.

قم بلصق فاصل على الوجهين على شريحة زجاجية ، وقم بإزالة الحماية من المباعد. هز الأنبوب برفق للسماح للأهداب بالانتشار في جميع أنحاء الأنبوب، واستخدم ماصة لنقل ما يقرب من 60 ميكرولترا من الظهارة المهدبة من منتصف الأنبوب إلى الفاصل. ضع غطاء مستطيل مقاس 22 × 4 ملم على الفاصل لإغلاق الغرفة ، وقم بتطهير الشريحة بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل إزالتها من خزانة السلامة الميكروبيولوجية.

بعد تغيير القفازات ، ضع هذه الشريحة على لوحة صندوق ساخن ، وأغلق الغطاء. أضف الزيت إلى هدف الغمر بالزيت ، وضع الصندوق على مسرح مجهر ضوئي عمودي أو مقلوب. قم بتشغيل الصندوق ومسخن العدسة، واضبط إعدادات درجة الحرارة على وحدات التحكم في الصندوق وسخان العدسة.

بعد خمس دقائق ، ضع الهدف حتى يلمس زلة الغطاء بطرف العدسة. لتصور الحواف المهدبة التنفسية للعينة ، افتح برنامج الكاميرا ، ثم استخدم هدف المجهر لتحديد موقع الخلايا يدويا داخل العينة وعرض الخلايا على الشاشة. تحقق من أن الصورة مرئية على الشاشة، واضبط تركيز المكثف والعدسة حسب الضرورة لتحسين جودة الصورة.

عندما يتم تحديد موقع شرائط الظهارة المهدبة ، حدد فقط الحواف الظهارية المهدبة السليمة وغير المنقطعة التي يبلغ طولها 50 ميكرون على الأقل. تأكد من استخدام الحواف أو الحواف العادية فقط مع الإسقاطات الثانوية للتحليل الوظيفي الهدبي واستبعاد الحواف المهدبة ذات الإسقاطات الرئيسية والخلايا المهدبة المعزولة أو الخلايا المفردة التي لا يوجد بها اتصال بينها وبين أي نوع آخر من الخلايا. عند تحديد حافة جيدة، استخدم معدل إطارات الكاميرا يبلغ 500 إطار في الثانية لتسجيل حافة الأهداب النابضة لمدة ثانيتين تقريبا.

بعد تسجيل ما لا يقل عن ستة حواف جيدة في المنظر الجانبي ، قم بإزالة الشريحة من الصندوق المدفأ ، ثم ضع الشريحة ، وزلة الغطاء ، والفاصل في كيس محكم الإغلاق. ثم ضع القفازات والقناع في الكيس ، وضع الكيس في حاوية النفايات الطبية الخطرة المناسبة. لتحليل تردد النبض الهدبي ، افتح التسجيل في برنامج مناسب لتحليل الفيديو ، وقسم الحواف المهدبة إلى ما يقرب من خمس مناطق متجاورة تبلغ مساحتها حوالي 10 ميكرون.

تحديد وتصور الأهداب أو مجموعات الأهداب بمعدل إطارات منخفض وبحد أقصى قياسين لتردد النبض الهدبي لكل منطقة للحصول على 10 قياسات لتردد النبض الهدبي كحد أقصى لكل حافة. سجل عدد الإطارات المطلوبة لمجموعة من الأهداب لإكمال خمس دورات نبض، واستخدم الصيغة لحساب تردد النبض الهدبي. لتحديد النسبة المئوية لكل نمط نبض هدبي مميز داخل عينة ، لكل أهداب أو مجموعة من الأهداب ، قارن المسار الدقيق الذي تسلكه الأهداب خلال دورة النبض الكامل مع نمط النبض الهدبي العادي الذي لوحظ في تحليل الفحص المجهري الرقمي عالي السرعة.

قم بإسناد نمط نبض هدبي مميز ، مثل العادي ، أو الصلب ، أو غير المتحرك ، أو غير المتزامن أو خلل الحركة ، والدائري ، إلى كل أهداب أو مجموعة من الأهداب التي تم تحليلها. ثم احسب النسبة المئوية لكل نمط نبض هدبي مميز داخل كل عينة. نمط النبض الهدبي المنسوب إلى العينة هو نمط النبض الهدبي السائد الذي لوحظ.

هنا ، نلاحظ نتائج التحليل الوظيفي الهدبي التفصيلية من عينات تنظيف الأنف بالفرشاة ل 14 متطوعا بالغا. من هذه العينات ال 14 لتنظيف الأنف بالفرشاة ، تم تسجيل 242 حوافا مهدبة ، و 212 استوفت معايير التضمين المحددة للتحليل. تم الحصول على ما مجموعه 807 قياسا لتردد النبض الهدبي وتقييمات نمط النبض الهدبي من الأهداب أو مجموعات الأهداب التي تم تحليلها.

كان متوسط مؤشر الحركة مشابها للقيم المبلغ عنها سابقا والتي لوحظت في المتطوعين الأصحاء. كانت درجة خلل الحركة وتردد النبض الهدبي مشابهة للقيم التي تم الإبلاغ عنها سابقا عند اختيار الحواف أو الحواف الطبيعية فقط ذات الإسقاط الطفيف. عند استخدام حواف منخفضة الجودة ، يتم الإبلاغ عن ترددات أقل للنبض الهدبي ودرجات أعلى لخلل الحركة.

يمكن لخلايا الدم والمخاط المكتسب من تنظيف قوي جدا أن يمنع ضرب الأهداب الحرة أو يخفي الأهداب عن المراقب. على العكس من ذلك ، إذا لم تضغط الفرشاة بقوة على قشقة الأنف السفلية ، فقد لا تحتوي العينة على ما يكفي من الشرائط الظهارية المهدبة عالية الجودة. بالإضافة إلى ذلك ، إذا تم إجراء تنظيف الأنف بالفرشاة على الجزء الأمامي من تجويف الأنف ، الحصول فقط على الخلايا الظهارية الانتقالية غير المهدبة.

جانبين في البروتوكول هما جودة تنظيف الأنف بالفرشاة واختيار شظايا ظهارية عالية الجودة لتجنب النتيجة الإيجابية الكاملة أو فشل التقنية.