Name: تطبيق الماوس البارثينوجينيك Haploid الخلايا الجذعية الجنينية كبديل للحيوانات المنوية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: اكتشف استخدام الخلايا الجذعية الجنينية الماوسية الهابلويدية البارثينوجينية كبديل للحيوانات المنوية في إنشاء الأجنة شبه المستنسخة. تتيح هذه الطريقة دراسة الطبع الجينومي وتعديل المورثات الأبوية في الأجنة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر الدكتور جوليو دي مينين على اشتقاق خطوط الكتائب والدكتور ريمو فريمان على عملية قياس التدفق الخلوي. ونعترف أيضا بالسيدة ميشيل شافنر والسيد توماس م. هينيك للدعم التقني في نقل الأجنة. ودعمت هذا العمل المؤسسة الوطنية السويسرية للعلوم (المنحة 31003A_152814/1).

<ol><li>Ellegren, H., Galtier, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+genetic+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Genetics%22%5BJournal%5D)">Determinants of genetic diversity.</a> Nature Reviews: Genetics. 17 (7), 422-433 (2016).</li>
<li>Huijbers, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+genetically+modified+mice%3A+A+decision+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Generating genetically modified mice: A decision guide.</a> Methods in Molecular Biology. 1642, 1-19 (2017).</li>
<li>Aizawa, E., Dumeau, C. E., Freimann, R., Di Minin, G., Wutz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyploidy+of+semi-cloned+embryos+generated+from+parthenogenetic+haploid+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Polyploidy of semi-cloned embryos generated from parthenogenetic haploid embryonic stem cells.</a> PloS One. 15 (9), 0233072(2020).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgenetic+haploid+embryonic+stem+cells+produce+live+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Androgenetic haploid embryonic stem cells produce live transgenic mice.</a> Nature. 490 (7420), 407-411 (2012).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+fertile+bimaternal+offspring+following+intracytoplasmic+injection+of+parthenogenetic+haploid+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Birth of fertile bimaternal offspring following intracytoplasmic injection of parthenogenetic haploid embryonic stem cells.</a> Cell Research. 26 (1), 135-138 (2016).</li>
<li>Wan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parthenogenetic+haploid+embryonic+stem+cells+produce+fertile+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Parthenogenetic haploid embryonic stem cells produce fertile mice.</a> Cell Research. 23 (11), 1330-1333 (2013).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+genetically+modified+mice+by+oocyte+injection+of+androgenetic+haploid+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of genetically modified mice by oocyte injection of androgenetic haploid embryonic stem cells.</a> Cell. 149 (3), 605-617 (2012).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parthenogenetic+haploid+embryonic+stem+cells+efficiently+support+mouse+generation+by+oocyte+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Parthenogenetic haploid embryonic stem cells efficiently support mouse generation by oocyte injection.</a> Cell Research. 26 (1), 131-134 (2016).</li>
<li>Elling, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forward+and+reverse+genetics+through+derivation+of+haploid+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Forward and reverse genetics through derivation of haploid mouse embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 9 (6), 563-574 (2011).</li>
<li>Leeb, M., Wutz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+haploid+embryonic+stem+cells+from+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Derivation of haploid embryonic stem cells from mouse embryos.</a> Nature. 479 (7371), 131-134 (2011).</li>
<li>Surani, M. A., Barton, S. C., Norris, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+reconstituted+mouse+eggs+suggests+imprinting+of+the+genome+during+gametogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Development of reconstituted mouse eggs suggests imprinting of the genome during gametogenesis.</a> Nature. 308 (5959), 548-550 (1984).</li>
<li>Li, Z. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+bimaternal+and+bipaternal+mice+from+hypomethylated+haploid+ESCs+with+imprinting+region+deletions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of bimaternal and bipaternal mice from hypomethylated haploid ESCs with imprinting region deletions.</a> Cell Stem Cell. 23 (5), 665-676 (2018).</li>
<li>Elling, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+maintenance+of+mouse+haploid+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Derivation and maintenance of mouse haploid embryonic stem cells.</a> Nature Protocols. 14 (7), 1991-2014 (2019).</li>
<li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+engineering+using+the+CRISPR-Cas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nature Protocols. 8 (11), 2281-2308 (2013).</li>
<li>Shuai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+mammalian+offspring+by+haploid+embryonic+stem+cells+microinjection%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Stem+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Generation of mammalian offspring by haploid embryonic stem cells microinjection.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. 31, 1-15 (2014).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> Journal of Visualized Experiments. (62), e3923(2012).</li>
<li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBehringer%2C+R+%22Manipulating+the+Mouse+Embryo%3A+A+Laboratory+Manual%22">Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2014).</li>
<li>O'Neill, G. T., Rolfe, L. R., Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+potential+and+chromosome+constitution+of+strontium-induced+mouse+parthenogenones%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Reproduction+and+Development%22%5BJournal%5D)">Developmental potential and chromosome constitution of strontium-induced mouse parthenogenones.</a> Molecular Reproduction and Development. 30 (3), 214-219 (1991).</li>
<li>Campbell, K. H., McWhir, J., Ritchie, W. A., Wilmut, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sheep+cloned+by+nuclear+transfer+from+a+cultured+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line.</a> Nature. 380 (6569), 64-66 (1996).</li>
<li>Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Full-term+development+of+mice+from+enucleated+oocytes+injected+with+cumulus+cell+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei.</a> Nature. 394 (6691), 369-374 (1998).</li>
<li>Wilmut, I., Schnieke, A. E., McWhir, J., Kind, A. J., Campbell, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+offspring+derived+from+fetal+and+adult+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells.</a> Nature. 385 (6619), 810-813 (1997).</li>
<li>Gurdon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+frogs+derived+from+the+nuclei+of+single+somatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Adult frogs derived from the nuclei of single somatic cells.</a> Developmental Biology. 4, 256-273 (1962).</li>
<li>Campbell, K. H., Alberio, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+the+genome%3A+role+of+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction+Supplement%22%5BJournal%5D)">Reprogramming the genome: role of the cell cycle.</a> Reproduction Supplement. 61, 477-494 (2003).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9-mediated+genetic+screening+in+mice+with+haploid+embryonic+stem+cells+carrying+a+guide+RNA+library%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9-mediated genetic screening in mice with haploid embryonic stem cells carrying a guide RNA library.</a> Cell Stem Cell. 17 (2), 221-232 (2015).</li>
<li>Bai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+genetic+screening+in+mice+through+haploid+embryonic+stem+cells+identifies+critical+genes+in+bone+development%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Targeted genetic screening in mice through haploid embryonic stem cells identifies critical genes in bone development.</a> PLoS Biology. 17 (7), 3000350(2019).</li>
<li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9-mediated+base-editing+screening+in+mice+identifies+DND1+amino+acids+that+are+critical+for+primordial+germ+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9-mediated base-editing screening in mice identifies DND1 amino acids that are critical for primordial germ cell development.</a> Nature Cell Biology. 20 (11), 1315-1325 (2018).</li>
</ol>

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

استنساخ الثدييات عن طريق نقل الخلايا الجسدية النووية (SCNT) كانت رائدة في 1990s19،20،21. وجاءت هذه التطورات في أعقاب دراسات الاستنساخ التي أجريت قبل 30 عاما فيالبرمائيات 22. ويعكس التأخير الكبير صعوبة علم الأجنة وبصمات الجينوم في الثدييات. تطوير الثدييات SCNT هو الأساس لتطبيق haESC لاستبدال الحيوانات المنوية ، وهو مفصل في هذا البروتوكول.
مزامنة دورة الخلية هو عامل مهم لنجاح SCNT23. وهذا هو الحال أيضا لحقن haESC في هذا البروتوكول. يتطلب إدخال جينوم المتبرع إلى المتلقي مطابقة مراحل دورة الخلية لتجنب الكسر الكروموسومي أو الأنوبلويدات التي من شأنها إلغاء نمو الجنين. شبه الاستنساخ لديه تعقيد إضافي أن اثنين من الجينوم وstoplast تحتاج إلى أن تكون متوافقة. وقد أثبت تقرير سابق أن حقن ال haESCs الاندروجينية المعتقلين في مرحلة M أسفر عن معدلات نمو أفضل للأجنة شبه المستنسخة من حقن haESCs من مرحلة G1 في البويضات7. ويقترح هذا التقرير المرحلة M كنقطة تزامن مناسبة للاستنساخ شبه. وبناء على ذلك، ألقي القبض على الكتائب ميتوتيتشيلي في مرحلة ميتافيزي مع demecolcine وحقنها في ooplasm من البويضات MII، والتي تم القبض عليها بشكل طبيعي في ميتافاز الثاني من الميوسيس. والأهم من ذلك، يمكن تحقيق الاعتقال في المرحلة M في ESCs الماوس بكفاءة عالية، وتوفير تزامن ممتاز بين دورات الخلية المانحة والمتلقية.
أثناء الانقسام ، ينهار الغشاء النووي وأشكال المغزل التي ترتبط بها الكروموسومات المكررة. بعد حقن M-المرحلة DKO-phaESCs، يتم فصل الكروماتيدات الشقيقة إلى جسم قطبي زائف وzygote7 (الشكل 3E). وبالتالي، تساهم مجموعة واحدة من الكروموسومات من DKO-phaESC في الجنين شبه المستنسخ. ومن الأهمية بمكان أن الكروماتيدات الشقيقة للكروموسومات DKO-phaESC يمكن فصلها بشكل صحيح بعد الحقن. غشاء البلازما من DKO-phaESC سليمة يمنع الفصل في الجسم القطبي الزائف. لقد لاحظنا بالفعل حالات نادرة لم يتم فيها تمزق غشاء البلازما في DKO-phaESCs ، وأظهرت الأجنة DKO-phaESCs سليمة في ooplasm بعد الحقن(الشكل 3D). لذلك ، يجب توخي الحذر لإزالة غشاء البلازما من DKO-phaESCs عن طريق الأنابيب. أثناء الحقن ، من المهم بنفس القدر تجنب تعطيل المغزل الميوتيكي للبويضة ، مما قد يؤدي إلى عيوب فصل الكروموسومات والحث على الانسداد أيضا.
في الثدييات ، يحد البصمة الجينومية من تطبيق الكتائب كبديل للحيوانات المنوية. تمتلك haESCs البارثينوجينية تكوينا أموميا من البصمات الجينومية ، في حين تمتلك الحيوانات المنوية تكوينا أبويا. لذلك ، لم يحدث جيل من الجراء على المدى الكامل بعد حقن الكتائب البرية كبديل للحيوانات المنوية. للتغلب على هذا القيد، يتم تصميم عمليات حذف IG- و H19-DMRs في phaESCs. تعديل التعبير المطبوع في Igf2-H19 الأم وGl2-Dlk1 loci كافية لتغيير تكوين بصمات الجينوم للسماح لتوليد الفئران شبه المستنسخة مع وتيرة أكثر من 5.1٪، على أساس الأجنة المنقولة 2 خلية. تشير هذه الملاحظات إلى أن استهداف جينين مطبوعين يحول جينوم الكتائب إلى تكوين أبوي وظيفي يمكن أن يحل محل الحيوانات المنوية في الفئران. ومع ذلك، يلزم إدخال تعديل وراثي دائم على الكتائب من أجل هذه الاستراتيجية. كاستراتيجية بديلة، يمكن النظر في haESC الاندروجينية. وتستمد haESCs الاندروجينية من جينوم الحيوانات المنوية وتمتلك بصمات الأب. كانت هناك تقارير تفيد بأن haESCs الذكورية البرية ساهمت كبديل للحيوانات المنوية لتوليد الجراء على المدى الكامل على تردد يتراوح بين 1.3٪ و 1.9٪ من الأجنة المنقولة4و7و24. كما تم الحصول على الجراء كاملة المدة عن طريق حقن haESCs الاندروجينية مع حذف IG- وH19-DMRs على تردد 20.2٪ من الأجنة المنقولة من 2 خلايا24. ومن المرجح أن تكون زيادة كفاءة شبه الاستنساخ باستخدام مركبات هايسك الاندروجينية المعدلة بسبب عدم استقرار البصمات في الثقافة. يتم تصحيح عيوب الطباعة عن طريق الحذف الوراثي ل DMRs الحرجة.
وبالنظر إلى صعوبة إدخال تعديلات جينية مباشرة على جينوم البويضات أو الحيوانات المنوية، فإن ال haESCs هي أداة قيمة للتلاعب بالجينوم الأبوي بشكل منفصل. استخدام haESCs كبديل للحيوانات المنوية يوفر ميزة ملحوظة لتحرير الجينوم في الجرثومة الماوس. وقد جمعت دراسة حديثة بين تحرير الجينوم القائم على CRISPR/Cas9 وتطبيق haESCs لتوصيف المناطق المطبوعة التي تعتبر حاسمة للتنمية الجنينية12. حللت هذه الدراسة دور Rasgrf1- DMR بالاشتراك مع H19- و IG- DMRs في تطوير الفئران ثنائية اللون ، ووظيفة 7 DMRs مختلفة في تطوير الفئران ثنائية الترنيخ. شكلت طريقة استبدال haESCs للحيوانات المنوية الأساس لنهج الفحص الجيني لتحديد الأحماض الأمينية الرئيسية داخل بروتين DND1 في تطوير الخلايا الجرثومية البدائية وتحديد الجينات في نمو العظام24و25و26. الدراسات على البصمة الجينومية والفحص الجيني لتحديد العوامل الرئيسية في النمو الجنيني هي نهج كبيرة لتطبيق haESCs كجينوم لعبة.

في الثدييات، الأمشاج هي الخلايا الوحيدة التي تنقل المعلومات الوراثية إلى الجيل القادم. الانصهار من البويضات والحيوانات المنوية يشكل الزيغوت diploid التي تتطور إلى بالغ. الطفرات في الجينوم gametic وبالتالي ورثت من قبل النسل ودفع الاختلاف الجيني في الأنواع1. وقد تم تطبيق إدخال الطفرات في الجرثومة لإنتاج الحيوانات المعدلة وراثيا لدراسات بيولوجية متنوعة بما في ذلك توصيف وظيفة الجينات ونمذجة الأمراض. كل من البويضات والحيوانات المنوية هي خلايا متمايزة بشكل ميؤوس منه ومتخصصة للغاية توقفت عن الانتشار. ولذلك ، فإن التعديل المباشر ل gametes صعب من الناحية الفنية ، وتم تطوير نهج متخصصة. ويمكن إدخال تعديلات جينية في الجرثومة الماوس عن طريق حقن ESCs المعدلة وراثيا في الكيسات الأريمية، حيث أنها تندمج في الجنين النامية واستعمار الجرثومة. بالإضافة إلى ذلك ، أصبح التعديل الوراثي للzygotes باستخدام نهج تحرير الجينوم ، بما في ذلك نظام CRISPR / Cas9 ، معتمدا على نطاق واسع2.
في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن نهج متميز ، والذي يطبق haESCs كبديل لجينوم gametic3،4،5،6،7،8. HaESCs هي خطوط الخلايا الجذعية المستمدة من كتلة الخلية الداخلية من الكيسات الأريمية الهابلويدية البارثينوجينية أو الاندروجينية وتمتلك مجموعة واحدة من الكروموسومات4و7و9و10. وقد ثبت أن كلا من haESCs البارثينوجينية والدروجينية يمكن أن تسهم في جينوم الفئران شبه المستنسخة بعد الحقن داخل السيتوبلازمي في البويضات. وعلى النقيض من النهج الأخرى، يمكن تعديل جينوم الهايسك مباشرة في الثقافة بسبب قدرتها على التجديد الذاتي. إدخال التعديلات الوراثية في الجرثومة عن طريق استبدال الحيوانات المنوية مع haESCs هو وسيلة هامة للدراسات البيولوجية. وهو ينص على إمكانية زراعة الجينوم الأمومي أو الأبوي والتعامل معه بشكل منفصل، وهو مستمد من ال haESCs البارثينوجينية أو الاندروجينية، على التوالي. ويمكن بعد ذلك استخدام HaESCs كبديل الجينوم gametic ، وهو أمر مفيد بشكل خاص لدراسات الطباعة الجينومية ، والتعبير عن أليل محددة ، والعمليات الخاصة الأبوية.
في الفئران ، مطلوب كل من المعلومات الجينومية الأمومية والأبية لنمو الجنين الطبيعي11. لذلك ، لم يكن من الممكن الحصول على الجراء كاملة الأجل عندما تم حقن ال haESCs البارثينوجينية البرية (phaESCs) لتحل محل جينوم الحيوانات المنوية5،8. للتغلب على كتلة النمو، يجب تصحيح البصمة الجينومية لجينوم الأم من ال haESCs البارثينوجينية إلى تكوين أبوي. ويمكن تحقيق ذلك عن طريق التلاعب بالمناطق المثيلية المتمايزة. حتى الآن ، تم دراسة عمليات الحذف المستهدفة من H19- DMR ، Gtl2 - Dlk1 IG- DMR ، وRasgrf1- DMR لقمع الجينات المعبر عنها الأمهات في phaESCs3،5،8،12. أثبتت هذه الدراسات أن حذف كل من H19-DMR و IG-DMR كافية لتحويل الأم إلى تكوين بصمة أبوية يمكن أن تحل محل كروموسومات الحيوانات المنوية. الحقن داخل السيتوبلازمي من الكتائب التي تحمل حذف DMR اثنين في البويضات أسفرت عن الجراء شبه المستنسخة مع تردد بين 5.1٪ و 15.5٪ من الأجنة المنقولة من 2 خلية.
ويستند هذا البروتوكول على تطبيق phaESCs مع حذف كل من H19-DMR و IG-DMR، والتي نقوم بعبارة phaESCs بالضربة القاضية المزدوجة (DKO-phaESCs). نحن نقدم تعليمات مفصلة لتعديل البصمة الجينومية في الكتائب لإنشاء خطوط DKO-phaESC ، لحقن DKO-phaESCs في البويضات كبديل لجينوم الحيوانات المنوية ، لثقافة الأجنة شبه المستنسخة إلى الكيسات الأريمية ، والحصول على الفئران شبه المستنسخة. هذا البروتوكول هو مرجع للباحثين الذين يحتاجون إلى تلاعب دقيق ومباشر في الجينوم الأبوي وتوليد الأجنة والفئران شبه المستنسخة.

<table><tbody><tr><td>1.5 ملوتر</td><td>إيبندورف</td><td>0030 125.150</td><td>هكتار ثقافة ESC</td></tr><tr><td>15 مل أنبوب</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188271</td><td>haثقافة ESC</td></tr><tr><td>12 بئر صفيحة</td><td>حرارية علمية</td><td>150628</td><td>haثقافة ESC</td></tr><tr><td>24 بئر صفيحة</td><td>علمية حرارية</td><td>142475</td><td>haثقافة ESC</td></tr> 6 <tr><td>آبار صحيحة</td><td>علمية حرارية</td><td>140675</td><td>ثقافة haESC</td></tr><tr><td>96 بئر لوحة</td><td>حرارية</td><td>علمية 167008</td><td>haESC ثقافة</td></tr> <tr><td>بيتا - Mercaptoethanol</td><td>Merck</td><td>M6250</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>BSA جزء</td><td>جيبكو</td><td>15260-037</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>CHIR 99021</td><td>Axon</td><td>1386</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>محلول Demecolcine</td><td>Merck</td><td>D1925</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>41965-039</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>DMEM / F-12</td><td>Gibco</td><td>11320-033</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>DR4</td><td>فأر مختبر جاكسون</td><td>3208</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>FBS</td><td>biowest</td><td>S1810-500</td><td>haESC Agriculture</td></tr><tr><td>وسط التجميد</td><td>amsbio</td><td>11897</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>الجيلاتين</td><td>Merck</td><td>G1890</td><td>haESC</td></tr><tr><td>ثقافة Hepes حل Hepes</td><td>Gibco</td><td>15630-056</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>MEF</td><td>Gibco</td><td>A34966</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>LIF (عامل مثبط لسرطان الدم)</td> <td>(محلي الصنع)</td> <td>-</td><td>haESC ثقافة</td></tr> شف <tr><td>الدهون</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>NDiff 227</td><td>Takara</td><td>Y40002</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>PD 0325901</td><td>Axon</td><td>1408</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>piggyBac البلازميد الذي يحمل CAG-EGFP الجينات المعدلة</td><td>Addgene</td> <td># 40973</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>piggyBac transposase</td><td>plasmid System Biosciences</td><td>PB210PA-1</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>pX330 البلازميد</td><td>Addgene</td> <td># 42230</td><td>haESC culture</td></tr><tr><td>pX458 البلازميد</td><td>Addgene</td> <td># 48138</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>التربسين</td><td>جيبكو</td><td>15090-046</td><td>haESC ثقافة</td></tr><tr><td>الحمض النووي بوليميراز</td><td>Thermo Scientific</td><td>F549S</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>dNTP Mix</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0192</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>الإيثانول</td><td>ميرك</td><td>100983</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>حمض الهيدروكلوريك</td><td>Merck</td><td>100317</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>الأيزوبروبانول</td><td>Merck</td><td>التنميط الجيني</td><td>109634</td></tr><tr><td>البروتيناز K</td><td>Axon</td><td>A3830</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>SDS</td><td>Merck</td><td>71729</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم</td><td>Merck</td><td>106404</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>ThermoMixer</td><td>Epeendorf</td><td>5384000012</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Merck</td><td>T1503</td><td>التنميط الجيني</td></tr><tr><td>5 مل أنبوب</td><td>Falcon</td><td>352063</td> قياس <td>التدفق الخلوي</td></tr><tr><td>5 مل أنبوب مع غطاء مصفاة الخلية</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td>قياس التدفق الخلوي</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td> قياس <td>التدفق</td></tr><tr><td>الخلوي MoFlo Astrios EQ</td><td>Beckman Coulter</td><td>B25982</td><td>قياس التدفق الخلوي</td></tr><tr><td>1 مل حقنة</td><td>Codan</td><td>62.1640</td><td>Superovulation</td></tr><tr><td>30-gauge 1/2 بوصة إبرة</td><td>Merck</td><td>Z192362-100EA</td><td>Superovulation</td></tr><tr><td>B6D2F1 ماوس</td><td>مختبر جاكسون</td><td>100006</td><td>الإباضة</td></tr><tr><td>الفائقة hCG</td><td>MSD صحة</td><td>49451</td><td>الإباضة</td></tr><tr><td>الفائقة PBS</td><td>Gibco</td><td>10010015</td><td>Superovulation</td></tr><tr><td>PMSG</td><td>Avivasysbio</td><td>OPPA1037 5000 وحدة دولية</td><td>طبق الإباضة الفائقة</td></tr><tr><td>10 سم</td><td>Thermo Scientific</td><td>150350</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>4 آبار صفيحة</td><td>Thermo Scientific</td><td>179830</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>أنبوب 50 مل</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>طبق 6 سم</td><td>Thermo Scientific</td><td>150288</td><td>التلاعب</td></tr> <tr>بالجنين<td>طبق مركزي</td><td>بئر Corning</td><td>3260</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>الروك الرقمي</td><td>88880020 التلاعب</td><td></td><td>بالأجنة</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>AppliChem</td><td>A0878</td><td>التلاعب بالأجنة</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Merck</td><td>H4272</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>KSOM</td><td>Merck</td><td>MR-020P-5F</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>M16 متوسط</td><td>Merck</td><td>M7292</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>M2 متوسط</td><td>Merck</td><td>M7167</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>الزيوت المعدنية</td><td>Merck</td><td>M8410</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>الشعيرات الدموية الزجاجية</td><td>Merck</td><td>P1049-1PAK</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>مجهر مجسم</td><td>نيكون</td><td>SMZ745</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>كلوريد السترونتيوم</td><td>Merck</td><td>13909</td><td>التلاعب بالجنين</td></tr><tr><td>حقنة 5 مل</td><td>Codan</td><td>62.5607</td><td>الحقن</td></tr><tr><td>الدقيق زجاج البورسليكات cappilary</td><td>المنتج العلمي</td><td>GB100T-8P</td><td>الحقن الدقيق</td></tr><tr><td>CellTram 4r زيت</td><td>Eppendorf</td><td>5196000030</td><td>الحقن الدقيق</td></tr><tr><td>فلورينرت FC-770</td><td>Merck</td><td>F3556</td><td></td></tr><tr><td>ماصة الحقن الدقيق</td><td>الأدوات الطبية الحيوية</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>مجهر مقلوب</td><td>بالحقن الدقيق نيكون</td><td>كسوف Ti-U</td><td>الحقن</td></tr><tr><td>الدقيق Microforge</td><td>Narishige</td><td>MF-900</td><td>الحقن</td></tr> الدقيق <tr><td>ماصة الحقن الدقيق</td><td>الأدوات الطبية الحيوية</td> <td>-</td> <td>نصائح Microlaoder الحقن</td></tr><tr><td></td><td>الدقيق Eppendorf</td><td>5252 956.003</td><td>الحقن المجهري</td></tr><tr><td>أذرع Micromanipulaor</td><td>Narishige</td><td>NT-88-V3</td><td></td></tr><tr><td>مجتذب ماصة دقيقة</td> الحقن الدقيق <td>أداة Sutter</td><td>P-1000</td><td>الحقن الدقيق</td></tr><tr><td>PiezoXpert</td><td>Eppendorf</td><td>5194000016</td><td>الحقن</td></tr><tr><td>الدقيق PVP (Polyvinylpyrrolidine)</td><td>Merck</td><td>PVP360</td> مرشح حقنة <td>الحقن</td></tr><tr><td></td><td>الدقيق SARSTEDT</td><td>83.1826.001</td><td>الحقن المجهري</td></tr></tbody></table>

تطبيق الماوس البارثينوجينيك haploid الخلايا الجذعية الجنينية كبديل للحيوانات المنوية

Application of Mouse Parthenogenetic Haploid Embryonic Stem Cells as a Substitute of Sperm

في الكائنات الحية مع التكاثر الجنسي، والخلايا الجرثومية هي مصدر الخلايا totipotent التي تتطور إلى أفراد جدد. في الفئران ، وتخصيب البويضات من قبل spermatozoon يخلق zygote totipotent. في الآونة الأخيرة، ذكرت العديد من المنشورات أن الخلايا الجذعية الجنينية haploid (haESCs) يمكن أن تكون بديلا عن الجينوم الجامدي وتسهم في الأجنة، التي تتطور إلى فئران. هنا، نقدم بروتوكولا لتطبيق haESCs البارثينوجينية كبديل للحيوانات المنوية لبناء الأجنة عن طريق الحقن داخل السيتوبلازمي في البويضات. يتكون هذا البروتوكول من خطوات لإعداد haESCs كبديل للحيوانات المنوية ، وحقن كروموسومات haESC في البويضات ، وزراعة الأجنة شبه المستنسخة. يمكن للأجنة أن تنتج فئرانا شبه مستنسخة خصبة بعد نقل الأجنة. استخدام haESCs كبديل للحيوانات المنوية يسهل تحرير الجينوم في الجرثومة ، ودراسات التطور الجنيني ، والتحقيق في البصمة الجينومية.

تهدف هذه المقالة إلى إظهار استخدام الخلايا الجذعية الجنينية الهيمونوجينية كبديل للحيوانات المنوية لبناء أجنة شبه مستنسخة.

تطبيق الماوس البارثينوجينيك Haploid الخلايا الجذعية الجنينية كبديل للحيوانات المنوية

In organisms with sexual reproduction, germ cells are the source of totipotent cells that develop into new individuals. In mice, fertilization of an ...

يؤرخ هذا البروتوكول بشكل خاطئ تعديل البصمة الجينومية في الخلايا الجذعية الجنينية للفأر أحادي الصيغة الصبغية ، حيث يرجع موضوعنا إلى المنوية الكاذبة ، مما يتيح توليد أجنة محلية في الفئران. يتطلب التعديل الجيني للأمشاج عموما تقنيات صعبة. باستخدام هذه المنهجية ، يمكن التلاعب بالأمشاج الأبوية في خلايا جذعية جنينية هجينة لإدخالها لاحقا في الفئران كخيار بديل للحيوانات المنوية.نظرا لأن هذه الطريقة تمكن من تعديلنا المصطنع المحدد للأمشاج الأبوية في الأجنة ، فهي قابلة للتطبيق بشكل خاص على دراسة البصمة الجينومية والكي. سيوضح هذا الإجراء تشارلز إتيان دومو ، عالم أجنة الفئران من مختبري. لتحضير ماصات التثبيت والحقن المجهري للتجربة، استخدم أولا مجتذب ماصة دقيقة لسحب الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات ذات الشكل الممدود وتفتق تدريجي.لتحضير ماصات ثابتة، ضع شعيرات دموية مسحوبة بقطر خارجي يتراوح من 60 إلى 100 ميكرومتر في تشكيل دقيق فوق الخرزة الزجاجية على الفتيل. قم بتشغيل الفتيل وخفض الشعيرات الدموية حتى تلامس الخرزة. عندما تلتصق الشعيرات الدموية بالخرزة ، قم بإيقاف تشغيل الفتيل وسحب الشعيرات الدموية ، مما يتسبب في كسر الشعيرات الدموية بنهاية مستقيمة.بعد ذلك ، ضع الطرف الشعري المكسور أفقيا بجوار الخرزة الزجاجية على الفتيل وقم بتسخين الفتيل لإذابة النهاية حتى يصل قطر القطر الداخلي للطرف الشعري إلى 10 إلى 20 ميكرومتر. ثم ضع الشعيرات الدموية فوق الخرزة الزجاجية على بعد ملليمتر واحد تقريبا من الحافة وقم بتسخين الفتيل للسماح بثني الشعيرات الدموية بزاوية 20 درجة. لتحضير ماصة حقن دقيقة ، ضع شعيرات دموية مسحوبة بقطر خارجي يبلغ حوالي ستة ميكرومتر فوق الخرزة الزجاجية على الفتيل الساخن وقم بخفض الشعيرات الدموية حتى تلامس الخرزة.بمجرد أن يتم ربط الشعيرات الدموية ، قم بإيقاف تشغيل الفتيل وسحب الشعيرات الدموية. سوف تنكسر الشعيرات الدموية بنهاية مستقيمة. ثم حرك الشعيرات الدموية فوق الخرزة الزجاجية حوالي ملليمتر واحد من الطرف الشعري وقم بتسخين الفتيل للسماح بانحناء الشعيرات الدموية بزاوية 20 درجة.لإجراء حقن داخل الهيولى ، ضع خمس قطرات ميكرولتر من محلول PVP و 20 قطرة ميكرولتر من وسط M2 على الغطاء المقلوب لطبق 10 سم وقم بتغطية القطرات بالزيت المعدني. ضع الطبق على المسرح وقم بتثبيت ماصة على جهاز المعالجة الدقيقة. استخدم طرف اللودر الدقيق لملء ماصة الحقن الدقيق بزيت الفلوروكربون وتركيب الماصة على مشغل بيزو.عند المراقبة من خلال المجهر، قم بخفض ماصة الحقن المجهري في قطرة من محلول PVP. عندما يتم غمر الماصة، قم بتحريك الماصة لأعلى ولأسفل عدة مرات لتغطية الزجاج باستخدام PVP. قم بتحميل كمية صغيرة من محلول PVP في ماصة الحقن المجهر.اغمر الماصات بالحقن الدقيق وتثبيت الماصات في وسط M2 وركز على الماصة الموجودة أسفل القطرة. انقل ما يقرب من ميكرولترين من معلق الخلية الجذعية المزدوجة بالضربة القاضية إلى القطرة المتوسطة M2 واستخدم ماصة الفم لنقل 10 بويضات M2 إلى نفس القطرة. قم بتدوير بويضة واحدة وقم بالضغط السلبي من خلال الماصة المثبتة لتثبيت البويضة بحيث تواجه مساحة perivitelline ماصة الحقن المجهر، مع الحرص على عدم وضع اللوحة الطورية الثانية في مسار ماصة الحقن المجهر.ارسم خلية ES مزدوجة الضربة القاضية في طرف ماصة الحقن المجهري وتأكد من تمزق غشاء الخلية. قم بتطبيق ضغط سلبي خفيف على ماصة الحقن المجهري وقم بتوصيل أربع نبضات بيزو أثناء دفع طرف ماصة الحقن المجهري باتجاه مساحة المحيط لاختراق المنطقة الشفافة. اخترق البويضة باستخدام ماصة الحقن المجهري بحيث تمتد الأوليما إلى الجانب الآخر وقم بتطبيق نبضة بيزو واحدة لاختراق الأوليما ، مع التأكد من أن الأوليما يرتاح على طول عمود ماصة الحقن المجهري.قم بحقن خلية ES المنشأة بالضربة القاضية المزدوجة بحجم بسيط من الوسط في الأوبلازم واسحب ماصة الحقن المجهري بسلاسة من البويضة. حرر البويضة المحقونة من الماصة المثبتة وانقلها إلى جانب القطرة الدقيقة لجمعها لاحقا. عندما يتم حقن جميع البويضات ، انقل البويضات إلى طبق بئر مركزي مسخن مسبقا يحتوي على وسط KSOM واحتضان الطبق عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ساعة واحدة قبل التنشيط.يوضح تحليل محتوى الحمض النووي لخط خلايا ES المزدوج التمثيلي ، الذي يحمل الجين المعدل CAG / EGFP عن طريق قياس التدفق الخلوي ، توزيع الخلايا أحادية الصيغة الصبغية وثنائية الصبغيات في مراحل G0 و G1 و S و G2 M. يمكن إجراء التنميط الجيني لتأكيد عدم وجود أليلات من النوع البري في H19 والمناطق الميثيلية التفاضلية بين الجينات. يمكن إدخال الجين المعدل CAG / EGFP في الخلايا الجذعية الجنينية المسببة للأمراض المزدوجة لدراسة مساهمتها في الأجنة شبه المستنسخة من خلال تصور التألق الأخضر تحت المجهر.يظهر تحليل قياس التدفق الخلوي مجموعتين تتوافق مع المرحلة G2 M تم إيقاف الخلايا أحادية الصيغة الصبغية وثنائية الصبغيات بعد علاج demuculcene. يشير عدم وجود ذروة أحادية الصيغة الصبغية 1N إلى أن دورة راحة الخلية كانت كاملة إلى حد كبير. بعد الحقن ، نادرا ما يتم اكتشاف تعبير EGFP في الأجنة شبه المستنسخة المبنية.حيث يتشتت سيتوبلازم الخلايا الجذعية القاتلة المزدوجة في السيتوبلازم الكبير للبويضة. بعد ست ساعات من التنشيط ، يمكن ملاحظة ما يصل إلى ثلاثة أجسام قطبية تحت المجهر. الأجسام القطبية الأولى والثانية للبويضة وجسم قطبي زائف واحد من ESC أحادي الصيغة الصبغية.لإثبات كفاءتها التنموية ، يمكن زراعة الأجنة شبه المستنسخة إلى مرحلة الخلايا الأريمية. علاوة على ذلك ، يمكن الحصول على إناث الفئران كاملة المدة من أجنة شبه مستنسخة من مرحلتي الخلية المنقولة إلى قنوات البيض للإناث المتلقية. أثناء الحقن المجهري ، من المهم تمزيق غشاء البلازما للخلايا الجذعية الجنينية أحادية الصيغة الصبغية كما يظهر لمنع فصل الكروموسوم عند تنشيط البويضة.بدلا من الخلايا الفردية أحادية الصيغة الصبغية ، يمكن أيضا استخدام خلايا ES أحادية الصيغة الصبغية الأندروجينية. السماح باختيار الأم أو الأم أو الأم كبديل للحيوانات المنوية اعتمادا على الغرض من الدراسة.

application-mouse-parthenogenetic-haploid-embryonic-stem-cells-as

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

قدرة الخلايا الجنينية جرثومي على التمايز إلى خلايا جرثومي البدائية خلال مراحل النمو المبكر هو نموذج مثالي لمعالجة فرضيتنا حول السرطان والعقم. هذا البروتوكول يوضح كيفية عزل خلايا جرثومي البدائية من المناسل النامية في الأجنة 10،5-11،5 أيام آخر coitum الماوس.

العزلة واشتقاق خلايا الفأر الجنينية بيرشوت

ويرد وصف بروتوكولات لجرثومة خلية زرع أنسجة الخصية وxenografting. نتائج زرع الخلايا الجرثومية في الحيوانات المنوية من المانحين المشتقة في الخصيتين المستفيدة وتمثل إعادة فحص وظيفي لتحديد الخلايا الجذعية spermatogonial (SSCs). خصية الانسجة xenografting يستنسخ تطوير خصية وتكوين الحيوانات المنوية من نوع مختلف الجهات المانحة في الفئران المتلقي.

جرثومة زرع الخلايا والأنسجة الخصية Xenografting في الفئران

نحن هنا لشرح أنني وضعت حديثا مجموعة كرو • لحفظ بالبرودة الحيوانات المنوية الماوس. وتحسن اثنين من الخلية في مرحلة تطور الجنين مع مجمدة إذابة الحيوانات المنوية باستمرار في سلالات الفأر 5 مع استخدام هذا الطقم. على مدى فترة 1.5 سنة ، وأرشفة 49 خطوط الماوس المعدلة وراثيا عن طريق الحفظ بالتبريد الحيوانات المنوية مع عدة كرو • أنا في وقت لاحق واستعاد بنجاح من خلال التلقيح الاصطناعي.

الماوس حفظ بالبرودة والانتعاش الحيوانات المنوية باستخدام · لقد كرو كيت

توليد الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها (اللجنة التوجيهية) تنتج خطوط خطوط مختلفة المحتملة التنموية حتى عندما تمر الاختبارات القياسية لتعدد القدرات. نحن هنا وصف بروتوكول لإنتاج الفئران المستمدة كليا من iPSCs، الذي يحدد الخطوط التوجيهية وتعدد القدرات الكاملة...

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

توضح هذه المقالة بروتوكول لاشتقاق بكفاءة وثقافة pluripotent خطوط الخلايا الجذعية من الأجنة الماوس في مرحلة الكيسة.

اشتقاق خطوط الخلايا الجذعية من الأجنة الجيني الماوس

نقدم هنا بروتوكولا لزيادة إنتاج الوهم دون الاستخدام المعدات الجديدة. يمكن تغيير اتجاه بسيط للجنين لحقن زيادة عدد الأجنة المنتجة، ويساعد على تقليل الفترة الزمنية لنقل الخط.

حقن الخلية الداخلية عبر كتلة من الخلايا الجذعية الجنينية يؤدي إلى ارتفاع في أسعار تشيميريسم

هنا، نقدم طريقة معدلة للحفظ بالتبريد للأجنة ذات الخلية الواحدة، فضلا عن بروتوكول يُشبه استخدام الأجنة المذابة بالتجميد والكهربية من أجل الجيل الفعال من الفئران المعدلة وراثيا.

استخدام الأجنة المذابة بالتجميد لإنتاج الفئران المعدلة وراثياً بكفاءة عالية

نقدم هنا بروتوكولا لتطوير نماذج الفئران المعدلة وراثيا باستخدام الخلايا الجذعية الجنينية ، خاصة بالنسبة لضربات الحمض النووي الكبيرة (KI). تم ضبط هذا البروتوكول باستخدام تحرير جينوم CRISPR / Cas9 ، مما أدى إلى تحسين كفاءة KI بشكل كبير مقارنة بطريقة استهداف الحمض النووي الخطي التقليدية بوساطة إعادة التركيب المتماثل.

كريسبر / كاس 9 بوساطة استهداف الجينات عالية الكفاءة في الخلايا الجذعية الجنينية لتطوير نماذج الفئران التلاعب بالجينات

يمكن لطريقة التلاعب بعنق الرحم المقدمة أن تحفز الحمل الكاذب في الفئران دون الحاجة إلى تربية الإناث مع الذكور الذين تم استئصال الأسهر. مطلوب تحريض الحمل الكاذب لنجاح نقل الأجنة غير الجراحي والتلقيح الاصطناعي غير الجراحي ، وكلاهما مقدم أيضا.

تحفيز الحمل الكاذب في إناث الفئران دون الحاجة إلى قطع الأسهر قبل نقل الأجنة غير الجراحي أو التلقيح الاصطناعي

هنا ، نقدم طريقة لإجراء حقن المنوية المستديرة (ROSI) في الفئران ، وهي تقنية ذات تطبيقات سريرية واعدة وفائدة للتحقيق في الآليات الكامنة وراء التطور الجنيني.

حقن الفأر المستدير Spermatid

تؤسس هذه الورقة خط أنابيب لمعلقات عالية الجودة للخلية المفردة والنوى لأجنة الفئران المعدة لتسلسل الخلايا المفردة والنوى.

تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية لأجنة الفئران الكاملة الطافرة: من الأرومة إلى نهاية المعدة

اكتشف استخدام الخلايا الجذعية الجنينية الماوسية الهابلويدية البارثينوجينية كبديل للحيوانات المنوية في إنشاء الأجنة شبه المستنسخة. تتيح هذه الطريقة دراسة الطبع الجينومي وتعديل المورثات الأبوية في الأجنة.

تطبيق الماوس البارثينوجينيك Haploid الخلايا الجذعية الجنينية كبديل للحيوانات المنوية

استكشف المزيد من الفيديوهات