دليل خطوة بخطوة لتخطيط كهربية البعوض

بالنسبة للتخطيط الكهربائي ، يعد استخدام البعوض في حالة فسيولوجية محددة ومتسقة أمرا بالغ الأهمية للحصول على نتائج موثوقة. يسمح البروتوكول خطوة بخطوة بتسجيلات كهربائية دائمة في البعوض. يمكن استخدام هذه الطريقة في العديد من أنواع البعوض ، وفي كل من الذكور والإناث.

يمكن أيضا نقل تقنية electroantennographic إلى نماذج الحشرات الأخرى ، بما في ذلك الخنافس والذباب وبق التقبيل والنمل. للبدء ، قم بإزالة قوارير العنبر سعة 1.5 ملليلتر التي تحتوي على مخاليط الرائحة والتحكم في المذيبات من الفريزر 20 درجة مئوية الذي يتم تخزينها فيه لمنع التدهور. بعد ذلك ، قم بإخراج 10 ميكرولترات من محلول الرائحة على قطعة من ورق الترشيح محملة داخل حقنة زجاجية ملصقة.

عزل البعوض في يوم التجربة. العمل تحت المجهر ، وكسر بلطف طرف اثنين من الشعيرات الدموية البورسليكات مع خيوط باستخدام زوج من ملقط. قبل إجراء التصوير الكهربائي ، أو تجربة EAG ، تأكد من أن حوامل الأقطاب الكهربائية واضحة من الداخل ، مع عدم وجود حطام البورسليكات.

ثم قم بإجراء الكلورة عن طريق نقع الأسلاك الفضية لحاملات الأقطاب الكهربائية في مبيض نقي لمدة خمس دقائق ، حتى تتحول الأسلاك إلى اللون الرمادي الداكن غير اللامع. ثم شطف الأسلاك. قم بفك السدادة المطاطية واستخدم إبرة قياس 20 لملء الجزء الداخلي من الشعيرات الدموية بمحلول ملحي.

شطف الشعيرات الدموية وإدخال الأسلاك في الشعيرات الدموية. أبق طرف السلك أقل من ملليمتر واحد من قمة الشعيرات الدموية. مرر الشعيرات الدموية عبر الحلقة المطاطية داخل حامل القطب دون كسرها وشد السدادة المطاطية برفق ، بعد التحقق من عدم وجود فقاعات هواء.

استخدم الشعيرات الدموية ذات الفتحة الأوسع على حامل القطب المرجعي والفتحة الأصغر على حامل قطب التسجيل. اترك حاملي الأقطاب الكهربائية المثبتين على منديل تنظيف مبلل لمنع الطرف من الجفاف حتى يصبح جاهزا لتركيب الرأس. تأكد من أن طاولة الهواء لأعلى.

لا يوجد انسداد في شركة الطيران والهواء قيد التشغيل. تحقق من امتلاء خزان الهواء الطبي لتجنب تغييره في منتصف التجربة وتأكيد الفقاعات في جهاز الترطيب. قم بتشغيل أجهزة الكمبيوتر والتطبيقات البرمجية ومصدر طاقة الصمام.

بعد التحقق من اتصال الإنترنت ، قم بتوصيل نبضة تحكم للتحقق من أن الصمام الذي يوصل النبضات يعمل. ضع صفيحة من الألومنيوم على الثلج مع قطعة من التنظيف الرطب فوقها وضع القليل من هلام القطب في زاوية. ضع كوبا من البعوض على الثلج للسماح للبعوضة بالتبريد.

قص طرف كل هوائي من البعوض مع مقص صغير. استخدم ملقط لسحب البعوض بجوار هلام القطب الكهربائي واغمس طرف كل هوائي برفق في الجل. باستخدام ملقط ، اسحب هوائيات البعوض للخارج ، مع الحفاظ عليها بجانب بعضها البعض.

يقطع رأس البعوض باستخدام مقص صغير. اغمس طرف القطب المرجعي برفق في الجل وضعه على اتصال بالرقبة ، واترك الرأس يلتصق به. ضع قطب الرأس المرجعي على مناور دقيق.

قم بتوصيل كلا حاملي الأقطاب الكهربائية بمكبر الصوت. استخدم المعالج الدقيق لوضع قطب التسجيل في أقرب مكان ممكن من أطراف الهوائي. ثم أدخل أطراف الهوائي في قطب التسجيل.

ضع أنبوب الطيران بالقرب من مستحضر رأس البعوض ، على بعد سنتيمتر واحد. قم بتشغيل مكبر الصوت ومخفض الضوضاء وتأكد من أن إشارة خط الأساس ليست صاخبة. بمجرد أن يصبح مستوى الضوضاء مرضيا ، أدخل أول حقنة رائحة في فتحة الطيران لإجراء الاختبار وإغلاق قفص فاراداي.

ثم انقر فوق تسجيل على برنامج EAG لتوصيل النبض. قم بقياس استجابات EAG كسعة بالمللي فولت ثم تابع الرائحة أو التركيز التالي. توضح التجربة بنجاح أن أنواع البعوض يمكن أن تظهر استجابات شمية متغيرة للمواد الكيميائية المختلفة.

كان هناك غياب للاستجابة للزيت المعدني ، الذي كان يستخدم كعنصر تحكم سلبي. يمكن تقليل الخطأ في النتائج بسبب الضوضاء الكهربائية عن طريق تأريض العناصر في قفص فاراداي ، باستخدام مقاطع التمساح. يمكن أن تختلف عتبة الاستجابة لنفس الرائحة في الحجم لأنواع مختلفة من البعوض.

على سبيل المثال ، ينتج بعوض Toxorhynchites rutilus septentrionalis EAGs كبيرة جدا ، مقارنة ب Aedes aegypti و Anopheles stephensi و Culex quinquefasciatus. لوحظ انحراف كبير استجابة للتحكم الإيجابي ، البنزالديهايد. في حين كان هناك عدم استجابة للسيطرة السلبية ، والزيوت المعدنية.

يوضح متوسط استجابات الهوائيات هذه في مخطط شريطي. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد عتبة الكشف عن مادة كيميائية معينة لكل نوع من أنواع البعوض من خلال تقديم الهوائي ، والتركيزات المتزايدة للمادة الكيميائية ، ورسم منحنى استجابة الجرعة. من المهم بدء التسجيل في أقرب وقت ممكن بعد تقطيع الرأس وتركيبه ، لضمان استجابة كبيرة للتحضير.

يسمح EAG بتحديد ما إذا كانت هوائيات البعوض تستجيب لمادة كيميائية معينة بتركيز معين. ومع ذلك ، فإنه لا يسمح بتحديد توازن هذه المادة الكيميائية. على سبيل المثال ، سواء كان جاذبا أو توبة.