التقييم الوظيفي نفاذية الأمعاء والهجرة العدلية عبر الإبط في الفئران باستخدام نموذج حلقة معوية موحدة

النموذج المعوي هو وسيلة قابلة للتكيف على نطاق واسع وعلم وظائف الأعضاء لقياس مدى تسرب الأمعاء وكيف تهاجر الكريات البيض في الأمعاء في الفئران ، في الجسم الحي. تساعد هذه الطريقة على فهم أفضل للآليات الكامنة وراء زيادة نفاذية الأمعاء والتهاب الأمعاء المرضي. يمكن استخدام هذه التقنية للمساعدة في آليات فهمنا الكامنة وراء وظيفة حاجز الأمعاء ، والالتهاب المرضي ، كما رأينا في التهاب القولون التقرحي ومرض كرون.

يستخدم هذا النموذج شريحة الأمعاء الخارجية الوعائية بشكل جيد ، إما من الايليوم أو القولون القريب ، لفحص وظيفة حاجز الأمعاء أو تجنيد الخلايا المناعية في الماوس. مع هذا التطبيق الواسع ، يمكن لنموذج الحلقة المعوية توفير نظرة ثاقبة في الأمراض الناتجة إما عن حاجز الأمعاء المتسرب وكذلك الاستجابة الالتهابية. يمكن التغلب على الصراعات من خلال ممارسة الخطوات الجراحية.

من المهم للغاية أن تضفي مظهرا خارجيا على جزء معوي كامل الأوعية الدموية وأن تختار المواقع المناسبة للربط لتجنب النزيف. نموذج حلقة الأمعاء هو تقنية جراحية دقيقة ، وبالتالي ، كما هو الحال مع العمليات الجراحية الأخرى ، فإنه يستفيد بشكل كبير من العرض البصري وعرض خطوة بخطوة للطريقة. بعد تحقيق مستوى جراحي من التخدير ، ابدأ بتنظيف فرو خط منتصف البطن بمسحات كحولية أو إسفنجة شاش غارقة في الإيثانول بنسبة 70٪.

لا تبلل مساحة واسعة من الفراء مع الكحول لمنع انخفاض حرارة الجسم. باستخدام مقص، إجراء استئصال البطن خط الوسط. إجراء شق أفقي في منتصف البطن، وفضح الصفاق، مع الحرص على عدم إصابة الأعضاء داخل البطن.

ضع شاش القطن الرطب قبل القطع فوق تجويف البطن المكشوف. استخدام مسحات القطن الرطب لتعبئة وخارج الكوم ووضعه بعناية على شاش القطن الرطب. ثم، تعبئة وخارجي بلطف الايليوم.

نشر ما لا يقل عن ستة سنتيمترات من الايليوم المحطة على شاش القطن الرطب دون تعطيل الأوعية المتوسطة وإمدادات الدم. الحفاظ على الأنسجة المكشوفة رطبة في جميع الأوقات مع HBSS الدافئة. تحديد الشريان الرئيسي توريد الايليوم في mesentery، على مقربة من cecum.

ثم حدد موقعين ربط في mesentery خالية من الأوعية الدموية الحرجة. الاستيلاء بحزم على الايليوم المحطة الطرفية مع ملقط الأنسجة الحادة واستخدام ملقط تلميح غرامة لfenestrate mesentery، وتجنب الأوعية الدموية. ضع خياطة الحرير عبر الثقب ، وربط عقدة جراحية لإنشاء الربط الأول.

استخدم المسطرة لقياس أربعة سنتيمترات بعيدا عن الرباط الأول، وإنشاء الرباط الثاني. قطع بعناية بجانب كل ربط مع مقص غرامة لعزل حلقة إيلال أربعة سنتيمترات، والحفاظ على إمدادات الدم والغشاء المساريقي سليمة. قم بتدفق محتوى الجزء الحلقي بلطف باستخدام HBSS الدافئ باستخدام أنبوب تغذية أصفر مرن متصل بحقنة 10 ملليلتر.

تأكد من إخراج المحتويات الإنارة من تجويف البطن للحفاظ على نظافة الموقع الجراحي. Ligate طرفي قطع حلقة إيلال مسح مع خياطة الحرير. استخدم حقنة ملليلتر واحدة مع إبرة قياس 30 لحقن 250 ميكرولتر ببطء من الكاشف ، مثل FITC-dextrans أو chemokine ، في التجويف المعوي.

سوف تضخم حلقة إيلال، مما تسبب في انتفاخ معتدل من الغشاء المخاطي. أغلق جدار البطن باستخدام حامل إبرة، ملقط تشريحي، و3.0 خياطة حرير غير قابلة للامتصاص بإبرة قطع عكسية. بعد تجفيف الحيوان لمنع انخفاض حرارة الجسم ، ضعه في غرفة تخدير منظمة لدرجة الحرارة لفترة الحضانة.

إعداد الماوس لعملية جراحية وخارج cecum كما هو موضح سابقا. باستخدام مسحات القطن الرطب، وخارج الايليوم بأكمله ووضعه على رأس شاش القطن الرطب. تحديد القولون القريبة وإمدادات الدم الموجودة في mesocolon.

تعبئة القولون القريبة وخلق الرباط الأول في منطقة خالية من السفن في mesocolon في حوالي 0.5 سنتيمتر من الجانح. قياس سنتيمترين من الرباط الأول وإنشاء رباط الثاني في منطقة خالية من إمدادات الدم في الميوكولون. باستخدام مقص غرامة، وقطع بعناية بجانب كل ربط لعزل pcLoop سنتيمترين طويلة.

تدفق بلطف pcLoop مع HBSS الحارة لإزالة البراز باستخدام أنبوب تغذية صفراء مرنة تعلق على حقنة 10 ملليلتر. تأكد من إخراج المحتويات الإنارة من تجويف البطن للحفاظ على نظافة الموقع الجراحي. ثم، ligate طرفي قطع من pcLoop مسح باستخدام خياطة الحرير.

استخدم حقنة ملليلتر واحدة مع إبرة قياس 30 لحقن 200 ميكرولتر من الكاشف ببطء، مثل FITC-dextran أو chemokine، في التجويف المعوي. فإن pcLoop تضخيم ، مما تسبب في انتفاخ معتدل من الغشاء المخاطي. استخدام مسحات القطن الرطب لوضع بلطف مرة أخرى pcLoop liga، الييوم، وceum.

أغلق جدار البطن باستخدام حامل إبرة، ملقط تشريحي، و3.0 خياطة حرير غير قابلة للامتصاص بإبرة قطع عكسية. بعد فترة الحضانة، قتل الفأر المخدر وجمع الأنسجة للتحليل. من أجل التحقق من دقة نموذج حلقة I لتقييم نفاذية الأمعاء ، تم إجراء فحص PCLoop FITC-dextran لتقييم دور البروتين المرتبط بتقاطع ضيق Jam-a في تنظيم وظيفة الحاجز المعوي في الجسم الحي.

مع نموذج pcLoop ، تم قياس زيادة 2.5 أضعاف في مستويات مصل FITC-dextran في الفئران الخالية جام -a مقارنة بالضوابط. تم الحصول على نتائج مماثلة مع الفئران التي تؤوي فقدان انتقائي للجام-أ على الخلايا الظهارية المعوية. تم استخدام نموذج pcLoop لدراسة العدلات متعددة الأشكال ، أو PMN ، والتجنيد في الغشاء المخاطي المعوي والهجرة عبر الظهارية اللاحقة في الجسم الحي.

تم قياس عدد PMN في المحتوى الإنارة من pcLoop كميا عن طريق تحليل قياس التدفق الخلوي. كان عدد PMN الموجود في الجزء من القولون القريب منخفضا في ظل الظروف الفسيولوجية. أدى العلاج المسبق مع السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، TNF ألفا وIFN غاما ، قبل الجراحة ، إلى زيادة أعداد PMN المعينين في تجويف pcLoop.

إدارة PMN الكيميائية الجذاب LTB4 أدى إلى زيادة كبيرة في عدد PMN. تلطيخ المناعي الكيميائية من PMN في الغشاء المخاطي القولوني تؤكد تجنيد مرتفعة من PMN بعد التحفيز مع السيتوكينات وLTB4. تمت دراسة مساهمة Jam-a في الهجرة عبر الظهارية PMN باستخدام نموذج pcLoop على الفئران التي تؤوي فقدانا انتقائيا للجام-أ على الخلايا الظهارية المعوية.

أدى فقدان جام الظهارية إلى انخفاض عدد PMN المتحولة في التجويف القولوني مقارنة بعناصر التحكم في القمامة. الجانب الحاسم لهذه التقنية هو أن نتذكر للحفاظ على إمدادات الدم إلى الجزء المعوي الخارجي عند إجراء الجراحة. بعد هذا البروتوكول، يمكن إجراء طرق أخرى مثل فحص نفاذية الأمعاء ويقايس الهجرة عبر الإبط العدلية للتحقيق في فقدان سلامة الحاجز والتهاب الأمعاء في الجسم الحي.