زرع جزيرة مغطاة بالدهون باستخدام الأنسجة الدهنية البيضاء البربخ

هذا البروتوكول يجعل من الممكن تقييم آلية engraftment الجزيرة في الأنسجة الدهنية البيضاء. الميزة الرئيسية لطريقة زرع الجزر المغطاة بالدهون هي أنه من السهل تقنيا تكرارها. يمكن تطبيق الطريقة على نماذج الأمراض الأخرى.

على سبيل المثال ، يمكن استخدامه لإنشاء نموذج فأر للسرطان. وسيوضح هذا الإجراء ناواكي ساكاتا، الأستاذ المشارك في جامعة فوكوكا. تحت مجهر التشريح ، استخدم ماصة صغيرة P 200 لإزالة أي مكونات جزيرة إضافية من هضم البنكرياس بما في ذلك الأنسجة العنيبية والليفية.

ثم استخدم مصفاة الخلايا لتصفية الخلايا العنيبية المفردة. انقل الجزر المفلترة إلى طبق استزراع جديد يحتوي على وسط الاستزراع المناسب أو محلول عازلة مكمل بمصل البقر أو الألبومين ، وقم بتدوير الطبق لوضع الجزر في المنتصف. باستخدام ماصة صغيرة P 200 ، اختر الجزر الفردية في أنبوب تجميع مناسب.

ضع مصفاة خلية جديدة 40 ميكرومتر فوق أنبوب بلاستيكي سعة 50 ملليلتر. استخدم ماصة 1000 ميكرولتر لإضافة الجزر إلى المصفاة لفصل الجزر والخلايا العنيبية المفردة. استخدم ملقط لقلب المصفاة على طبق استزراع جديد غير معالج بحجم 60 أو 100 ملليلتر يحتوي على وسط زراعة أو محلول عازل مناسب ، مكمل بمصل بقري أو ألبومين.

استخدم وسطا طازجا ، أو عازلا لطرد الجزر الصغيرة في طبق استزراع جديد ، ثم أضف ما يكفي من الوسط أو المخزن المؤقت إلى طبق الاستزراع للوصول إلى حجم إجمالي يبلغ حوالي 20 ملليلتر. عد الجزر تحت المجهر وقسم عدد الجزر بالتساوي بين أنابيب الطرد المركزي البلاستيكية الفردية سعة 1.5 ملليلتر وفقا لعدد الحيوانات المانحة. الطرد المركزي الجزر في 2 ، 100 غرام لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة وتجاهل طاف .

عادة ما يبقى حوالي 20 إلى 30 ميكرولترا من المحلول المتبقي في الأنبوب. بعد إزالة الشعر من البطن لمنع العدوى ، ضع الماوس في وضع ضعيف. بعد تطهير البطن والمنطقة الأربية شق الجلد في المنطقة المتوسطة السفلى ، وخلق شق الجلد الذي يبلغ طوله حوالي سنتيمترين.

قم بتثبيت جدار البطن الأيسر بالملقط أو المبعدات واسحب الأنسجة إلى الجانب الأيسر من الماوس لتأمين المجال الجراحي. استخدم قطعة قطن لتعبئة الأمعاء الدقيقة والكبيرة إلى الجانب الأيمن من الماوس. يقع النسيج الدهني الأبيض الأيسر للبشرة في تجويف البطن في المنطقة الأربية اليسرى.

تعبئة الأنسجة الدهنية البيضاء للبشرة والخصية اليسرى إلى خارج البطن وتمديد الأنسجة. استخدم ماصة صغيرة P 200 لجمع الحجم الكامل للجزر الصغيرة من أنبوب واحد سعة 1.5 ملليلتر ، مع الحرص على عدم ترك أي جزر صغيرة في الأنبوب عند التجميع. اسمح للجزر التي تم جمعها بالاستقرار في طرف الماصة عن طريق الجاذبية.

ضع طرف الماصة الصغير برفق على الأنسجة الدهنية المنتفخة ، مع الحرص على منع التدفق المفرط للوسط أو المخزن المؤقت في الطرف. زرع بعناية الجزر على الأنسجة. بعد البذر ، تأكد من الموضع الصحيح للجزر تحت مجهر تشريح.

قم بتغطية الجزر بالأنسجة الدهنية البيضاء للبشرة ، ثم ضع الخصية اليسرى تحت الأنسجة الدهنية البيضاء العرضية وأعد الأنسجة إلى التجويف داخل الصفاق. أغلق الجلد في طبقتين باستخدام خياطة 4-o. عند الانتهاء ، ضع الماوس تحت مصباح حراري وراقبه حتى الشفاء التام.

لمقارنة فعالية زرع زرع الجزر المغطاة بالدهون مع ذلك بعد زرع جزيرة داخل الصفاق ، تم زرع نفس العدد من الجزر على الصفاق في الفضاء النظير الأيسر للحيوانات المصابة بالسكري المتلقية للسيطرة. لوحظ انخفاض مستويات الجلوكوز في الدم لدى الفئران المصابة بزراعة الجزر المغطاة بالدهون بشكل تدريجي وملحوظ مقارنة بالفئران المزروعة داخل جزيرة داخل الصفاق. تم إجراء اختبار تحمل الجلوكوز داخل الصفاق بعد شهر واحد من الزرع.

تم الحفاظ على نسبة الجلوكوز في الدم في الفئران مع زرع جزيرة مغطاة بالدهون عند مستويات أقل من تلك التي لوحظت في الفئران المزروعة داخل جزيرة الصفاق. تم استخدام الفحص النسيجي لتقييم نقش الجزيرة في الأنسجة الدهنية البيضاء للبشرة. في الحيوانات المتلقية لزراعة الجزر المغطاة بالدهون ، كشف تلطيخ الهيماتوكسيلين الإيوسين عن وجود جزر داخل الأنسجة الدهنية البيضاء للبشرة.

بالإضافة إلى ذلك ، سهل تلطيخ الأجسام المضادة المترافق الفلوري للجزر الإيجابية للأنسولين الكشف عن الأوعية الدقيقة الإيجابية لعامل فون ويلبراند داخل الأنسجة الدهنية البيضاء للبشرة لجميع الفئران المتلقية. للنجاح في هذا الإجراء ، تأكد من السماح للجزر بالاستقرار عند طرف الماصة تماما ، وزرعها على الأنسجة الدهنية دون انسكاب.