Name: إنشاء كيميرا الدماغ الأمامي للطيور لتقييم نمو الوجه (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: اكتشف تقنية زرع الأنسجة لدراسة تفاعلات الدماغ الأمامي القاعدي مع الوجه أثناء تطور الوجه والجمجمة في أجنة الدجاج. تمنع هذه الطريقة تلوث الخلايا العصبية القحفية لضمان دقة التحليل.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم الأبحاث الواردة في هذا المنشور من قبل المعهد الوطني لأبحاث الأسنان والقحف الوجهي التابع للمعاهد الوطنية للصحة تحت أرقام الجوائز R01DE019648 و R01DE018234 و R01DE019638.

يتم تحضين بط بيكين الأبيض (Anas platyrhynchos) ودجاج Leghorn الأبيض (Gallus gallus) والسمان الياباني (Cortunix coturnix japonica) عند 37 درجة مئوية في غرفة مرطبة حتى يتم مطابقتها في HH7 / 817.
1. تحضير أنسجة المتبرع
ملاحظة: تم وصف تحضير الكواشف والأدوات وكيفية فتح البيض للتلاعب التجريبي6.
<ol><li>قم بإعداد وسائط DMEM باللون الأحمر المحايد ، وماصة نقل الزجاج ، وإبر التنغستن الحادة.</li>
	<li>كشف الأجنة (كما هو موضح في6).</li>
	<li>حصاد ترقيع الأنسجة من الجانب الأيسر من الدماغ الأمامي القاعدي للمرحلة 7/8 من الأجنة. استخدم إبر التنغستن الحادة المنحنية 6 لشق قطعة من الدماغ الأمامي برفق بطول ~ 0.3 مم وعرض 0.2 مم ، مع التأكد من عدم تضمين الأديم الباطن الأساسي عن طريق تحريك الإبرة أسفل الدماغ الأمامي بحيث تكون الإبرة موازية لمحور الأنبوبالعصبي .</li>
	<li>باستخدام ماصة نقل الزجاج ، التقط الكسب غير المشروع من الجنين المانح.</li>
	<li>انقل الكسب غير المشروع إلى DMEM الذي يحتوي على أحمر محايد (0.01٪ في PBS ، 23 درجة مئوية) لمدة دقيقتين لتلطيخه ، ثم ضع الكسب غير المشروع الملون في DMEM الذي لا يحتوي على أحمر محايد حتى يصبح جاهزا للنقش.</li>
</ol>2. إعداد المضيف
<ol><li>احتضان البيض المخصب من دجاج ليغورن الأبيض (جالوس جالوس) على حرارة 37 درجة مئوية في غرفة مرطبة حتى HH7 / 8 17.</li>
	<li>كشف الأجنة (كما هو موضح في6).</li>
	<li>باستخدام إبر التنغستن الحادة ، قم بإعداد موقع الكسب غير المشروع عن طريق القطع برفق ، ثم إزالة قطعة 0.3 مم × 0.2 مم من الدماغ الأمامي القاعدي من الجانب الأيسر لاستيعاب الكسب غير المشروع كما حدث لعزل أنسجة المتبرع.</li>
	<li>احرص على تجنب الاضطراب المفرط للأديم الباطن الأساسي ، والذي سيكون واضحا حيث ستبدأ حبيبات صفار البيض في التسرب من خلال أي تمزق يتم إجراؤه. هذا يتطلب ممارسة ولن تنجح كل المحاولات.</li>
	<li>بعد الانتقال إلى المضيف6 ، ضع الكسب غير المشروع ليحل محل الدماغ الأمامي القاعدي المستأصل للمضيف.</li>
	<li>ضع الشريط بإحكام فوق الفتحة وأعد الجنين إلى حاضنة 37 درجة مئوية للمدة الزمنية المناسبة للتحليل.</li>
</ol>

<ol><li>Waddington, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+Mechanics+of+Chicken+and+Duck+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Developmental Mechanics of Chicken and Duck Embryos.</a> Nature. 125, 924-925 (1930).</li>
<li>Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+neural+crest+in+patterning+of+avian+cranial+skeletal%2C+connective%2C+and+muscle+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The role of the neural crest in patterning of avian cranial skeletal, connective, and muscle tissues.</a> Developmental Biology. 96 (1), 144-165 (1983).</li>
<li>Borue, X., Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+and+aberrant+craniofacial+myogenesis+by+grafted+trunk+somitic+and+segmental+plate+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Normal and aberrant craniofacial myogenesis by grafted trunk somitic and segmental plate mesoderm.</a> Development. 131 (16), 3967-3980 (2004).</li>
<li>Teillet, M. A., Ziller, C., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quail-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Quail-chick chimeras.</a> Methods in Molecular Biology. 461, 337-350 (2008).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zone+of+frontonasal+ectoderm+regulates+patterning+and+growth+in+the+face%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face.</a> Development. 130 (9), 1749-1758 (2003).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+signaling+properties+of+ectodermal+epithelia+during+craniofacial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessing signaling properties of ectodermal epithelia during craniofacial development.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), (2011).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+organization+of+the+frontonasal+ectodermal+zone+in+birds+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Unique organization of the frontonasal ectodermal zone in birds and mammals.</a> Developmental Biology. 325 (1), 200-210 (2009).</li>
<li>Griffin, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf8+dosage+determines+midfacial+integration+and+polarity+within+the+nasal+and+optic+capsules%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Fgf8 dosage determines midfacial integration and polarity within the nasal and optic capsules.</a> Developmental Biology. 374 (1), 185-197 (2013).</li>
<li>Schneider, R. A., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+and+molecular+origins+of+beak+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The cellular and molecular origins of beak morphology.</a> Science. 299 (5606), 565-568 (2003).</li>
<li>Tucker, A. S., Lumsden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cells+provide+species-specific+patterning+information+in+the+developing+branchial+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Neural crest cells provide species-specific patterning information in the developing branchial skeleton.</a> Evolution & Development. 6 (1), 32-40 (2004).</li>
<li>Fish, J. L., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+species-specific+contributions+to+craniofacial+development+using+quail-duck+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessing species-specific contributions to craniofacial development using quail-duck chimeras.</a> Journal of Visualized Experiments. (87), (2014).</li>
<li>Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+and+the+origin+of+species-specific+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Neural crest and the origin of species-specific pattern.</a> Genesis. 56 (6-7), 23219(2018).</li>
<li>Sohal, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reciprocal+forebrain+transplantation+on+motility+and+hatching+in+chick+and+duck+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of reciprocal forebrain transplantation on motility and hatching in chick and duck embryos.</a> Brain Research. 113 (1), 35-43 (1976).</li>
<li>Chen, C. C., Balaban, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecies+avian+brain+chimeras+reveal+that+large+brain+size+differences+are+influenced+by+cell-interdependent+processes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Interspecies avian brain chimeras reveal that large brain size differences are influenced by cell-interdependent processes.</a> PLoS One. 7 (7), 42477(2012).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cells+pattern+the+surface+cephalic+ectoderm+during+FEZ+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Neural crest cells pattern the surface cephalic ectoderm during FEZ formation.</a> Developmental Dynamics. 241 (4), 732-740 (2012).</li>
<li>Hu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signals+from+the+brain+induce+variation+in+avian+facial+shape%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Signals from the brain induce variation in avian facial shape.</a> Developmental Dynamics. 244 (9), 1133-1143 (2015).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlations+Between+the+Morphology+of+Sonic+Hedgehog+Expression+Domains+and+Embryonic+Craniofacial+Shape%5BTitle%5D)+AND+%22Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Correlations Between the Morphology of Sonic Hedgehog Expression Domains and Embryonic Craniofacial Shape.</a> Evolutionary Biology. 42 (3), 379-386 (2015).</li>
<li>Eames, B. F., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genesis+of+cartilage+size+and+shape+during+development+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The genesis of cartilage size and shape during development and evolution.</a> Development. 135 (23), 3947-3958 (2008).</li>
<li>Merrill, A. E., Eames, B. F., Weston, S. J., Heath, T., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchyme-dependent+BMP+signaling+directs+the+timing+of+mandibular+osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mesenchyme-dependent BMP signaling directs the timing of mandibular osteogenesis.</a> Development. 135 (7), 1223-1234 (2008).</li>
</ol>

جميع المؤلفين ليس لديهم ما يكشفون عنه.

تسمح الطريقة الموصوفة بفحص تفاعلات الأنسجة بين الدماغ الأمامي القاعدي والأديم الظاهر المجاور. يختلف هذا النهج عن طرق زراعة الدماغ الأمامي السابقة ، لأن أنسجة المتبرع كانت مقصورة على الدماغ الأمامي البطني. هذا يلغي زرع خلايا القمة العصبية ، والتي ثبت أنها تشارك في تشكيل مورفولوجيا الوجه 9,10. ومن ثم ، كان قصر الكسب غير المشروع على الدماغ الأمامي القاعدي ضروريا لتقييم النتائج التجريبية المخطط لها.
في البحث السابق الذي استخدم عمليات زرع ا...

تركز الكثير من الأبحاث المعاصرة في علم الأحياء التنموي على دور الجينات في تشكيل الأجنة. هناك أدوات جيدة لفحص آليات النمو من منظور وراثي. ومع ذلك ، يتم تجميع الأجنة وتخضع للتشكل استجابة لتفاعلات الأنسجة. نظام الطيور هو أداة كلاسيكية تستخدم لتقييم مجموعة متنوعة من تفاعلات الأنسجة التي تنظم التطور للأسباب التالية: علم الأجنة مفهوم جيدا ، ويمكن الوصول إلى الأجنة بسهولة ، وأدوات تحليل أنظمة الطيور متطورة بشكل جيد ، والأجنة غير مكلفة.
تم استخدام نظام زرع الطيور على نطاق واسع لتتبع النسب وتقييم تفاعلات الأنسجة أثناء التطور لما يقرب منقرن من الزمان 1،2،3،4. تم استخدام هذا النظام للتحقيق في مركز الإشارات ، منطقة الأديم الظاهر الجبهي الأنفي (FEZ) ، الذي ينظم تشكل الفك العلوي5 ، وتم نشر مقطع فيديو يصف هذه التقنية سابقا6. بالإضافة إلى كتكوت السمان ، تم استخدام أنواع أخرى لإنتاج الكيميرا لتحليل تفاعلات الأنسجة. على سبيل المثال ، تم زرع الفأر FEZ من النوعالبري 7 والفئرانالطافرة 8 ، واستخدم آخرون أنظمة البط والسمان والكتاكيت لتقييم دور القمة العصبية في تشكيل الهيكل العظمي للوجه9،10،11،12.
في هذا العمل ، تم تقييم دور الدماغ الأمامي في تنظيم نمط التعبير الجيني في المنطقة الاقتصادية الحرة عن طريق زرع الدماغ الأمامي البطني بشكل متبادل بين أجنة السمان والبط والكتاكيت ، لأن إشارة من الدماغ الأمامي مطلوبة للحث على تعبير القنفذ الصوتي في المنطقة الاقتصادية الحرة. عمليات زرع الدماغ الأمامي ليست فريدة من نوعها في هذا المجال. تم استخدام عمليات الزرع هذه لتقييم تطور الحركة في أجنة السمان والبط13 ، على الرغم من أنه في هذه التجارب تم أيضا زرع الأنسجة التي ساهمت في المشتقات غير العصبية. في أعمال أخرى ، تم تقييم الدوائر السمعية في الطيور عن طريق زرع الدماغ الأمامي 14 ، لكن عمليات الزرع هذه احتوت على خلايا قمة عصبية مفترضة ، والتي تساهم في تشكيل الوجه9،10 وتشارك في تنظيم تعبير SHH في FEZ15. ومن ثم ، تم ابتكار نظام لزرع الدماغ الأمامي البطني فقط من نوع واحد من الطيور إلى آخر قبل إغلاق الأنبوب العصبي لتقييم دور الدماغ في شكل الوجه16 (الشكل 1 أ ، ب). كانت هذه الطريقة خالية من تلوث القمة العصبية للكسب غير المشروع. في هذه المقالة ، يتم توضيح الطريقة ووصف النتائج المتوقعة ، ومناقشة التحديات التي تواجهها.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>TEK</td><td>TEKZR114</td><td></td></tr><tr><td>35 × 10 مم طبق بتري</td><td>فالكون</td><td>1008</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermofisher</td><td>11965084</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبرة</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>أحمر محايد</td><td>سيجما</td><td>553-24-2</td><td></td></tr><tr><td>رقم 5 ملقط دومون</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>باستور بيبيتس</td><td>ثيرموفيشر</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>QCPN الأجسام المضادة</td><td>دراسات النمو بنك الورم الهجين ، جامعة أيوا ، أيوا ، الولايات المتحدة الأمريكية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>أدوات العلوم الدقيقة لمقص</td><td></td><td>14058-11</td><td></td></tr> أدوات <tr><td>العلوم الدقيقة لإبرة التنغستن</td><td></td><td>26000</td><td></td></tr></tbody></table>

إنشاء كيميرا الدماغ الأمامي للطيور لتقييم نمو الوجه

Creating Avian Forebrain Chimeras to Assess Facial Development

تم استخدام جنين الطيور كنظام نموذجي لأكثر من قرن وأدى إلى فهم أساسي لتطور الفقاريات. تتمثل إحدى نقاط القوة في هذا النظام النموذجي في أنه يمكن تقييم تأثير الأنسجة والتفاعل بينها مباشرة في الأجنة الوهمية. لقد أظهرنا سابقا أن الإشارات من الدماغ الأمامي تساهم في تشكل الوجه من خلال تنظيم شكل مجال التعبير للقنفذ الصوتي (SHH) في منطقة الأديم الظاهر الجبهي الأنفي (FEZ). في هذه المقالة ، يتم وصف طريقة توليد الوهم الأمامي وتقديم الرسوم التوضيحية لنتائج هذه التجارب.

تقييم الخيمرية وتلوث الزرع من أجل تقييم الوهم ، يجب معالجة مدى الوهم وتلوث الكسب غير المشروع بأنواع الخلايا الأخرى. يسمح إنشاء الوهم عن طريق زرع أنسجة السمان في أجنة الفرخ بهذا النوع من التحليل. باستخدام خلايا السمان للأجسام المضادة QCPN يمكن تصورها وتمييزها عن الأنسجة المضيفة (الشكل 1 C ، D). في هذه الحالة ، تم تلطيخ الأنسجة المشتقة من الدماغ الأمامي البطني فقط بالجسم المضاد مما يشير إلى أن الكسب غير المشروع لم يكن ملوثا بأنواع الخلايا الأخرى بما في ذلك ...

توضح هذه المقالة تقنية زرع الأنسجة التي تم تصميمها لاختبار خصائص الإشارات والأنماط للدماغ الأمامي القاعدي أثناء النمو القحفي الوجهي.

The avian embryo has been used as a model system for more than a century and has led to fundamental understanding of vertebrate development. One of the ...

تسمح هذه الطريقة للباحثين بتقييم تفاعلات الأنسجة بين الدماغ الأمامي القاعدي والوجه. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تعزل الدماغ الأمامي القاعدي للتقييم وتمنع التلوث بخلايا القمة العصبية ، مما قد يربك التحليل. الجزء الصعب من هذه التقنية هو إزالة الدماغ الأمامي من المضيف واستبداله بأنسجة المتبرع.وستقوم ديان هو، عالمة أبحاث من مختبر الدكتور رالف ماركوسيو، بإثبات هذا الإجراء. للبدء ، قم بإعداد وسائط DMEM باللون الأحمر المحايد ، وماصة نقل الزجاج ، والتنغستن الحاد. باستخدام حقنة 10 ملليلتر وإبرة قياس 18 ، قم بإزالة 0.5 ملليلتر من الألبومين من الطرف المدبب لقشر البيض.اصنع ثقبا صغيرا فوق القشرة باستخدام نقطة المقص. ثم ضع قطعة من الشريط فوق الفتحة واقطع فتحة دائرية لفضح الجنين. وصمة عار الجنين باللون الأحمر المحايد.حصاد ترقيع الأنسجة من الجانب الأيسر من الدماغ الأمامي القاعدي للمرحلة السابعة أو الثامنة من الأجنة. استخدم إبر التنغستن الحادة المنحنية لشق قطعة من الدماغ الأمامي برفق. من أجل عدم تضمين الأديم الباطن الأساسي ، حرك الإبرة أسفل الدماغ الأمامي وبالتوازي مع محور الأنبوب العصبي.التقط الطعم من الجنين المتبرع باستخدام ماصة نقل الزجاج ، وانقله إلى DMEM الذي يحتوي على أحمر محايد لمدة دقيقتين لتلطيخه. ثم ضع الكسب غير المشروع الملون في DMEM الذي لا يحتوي على أحمر محايد حتى يصبح جاهزا للنقش. احتضان البيض المخصب من دجاج ليغورن الأبيض عند 37 درجة مئوية في غرفة مرطبة حتى مرحلة هامبرغر هاميلتون من السابعة إلى الثامنة.كشف الأجنة كما هو موضح سابقا. باستخدام إبر التنغستن الحادة ، قم بإعداد موقع الكسب غير المشروع عن طريق قطع ثم إزالة قطعة 0.3 × 0.2 ملم من الدماغ الأمامي القاعدي لاستيعاب الكسب غير المشروع. تجنب الاضطراب المفرط للأديم الباطن الأساسي ، والذي سيكون واضحا حيث ستبدأ حبيبات صفار البيض في التسرب من خلال أي تمزق يتم إجراؤه.بعد نقل الكسب غير المشروع إلى المضيف ، ضع الكسب غير المشروع ليحل محل الدماغ الأمامي القاعدي المستأصل للمضيف. ضع الشريط بإحكام فوق الفتحة ، وأعد الأجنة إلى حاضنة 37 درجة مئوية حتى تصبح جاهزة للتحليل. في البداية ، تم إنشاء الوهم عن طريق زرع أنسجة السمان في أجنة الفرخ.باستخدام الجسم المضاد QCPN ، تم تصور خلايا السمان وتمييزها عن الأنسجة المضيفة. أكد نظام كتكوت السمان أن كل الكسب غير المشروع كان يتألف فقط من الأنسجة العصبية ولم يكن ملوثا بأنواع الخلايا الأخرى. أدى زرع أنسجة السمان في أجنة البط إلى تشويه شديد الوهم بسبب نمو دماغ السمان بشكل أسرع.لذلك ، تم إجراء زرع أنسجة البط في أجنة الدجاج. تشير الوهم الناتجة عن كتكوت البط إلى أن الدماغ يشارك في تنظيم التشكل. تم استخدام تهجين C2 الجبلي الكامل لتقييم تعبير القنفذ الصوتي في الوهم.على غرار التشكل ، بدا تعبير القنفذ الصوتي على جانب البطة من الوهم أكثر شبها بالبط. إعداد الموقع المضيف يأخذ الممارسة. لا ينجو عدد كبير من الأجنة ، لذا فإن إنشاء عدد كبير من الوهم يمكن أن يساعد في ضمان عينات مناسبة للتحليل.جعلت هذه الطريقة من الممكن تقييم كيفية تشكيل الإشارات من الدماغ لمجال تعبير القنفذ الصوتي في منطقة الأديم الظاهر الجبهي الأنفي.

creating-avian-forebrain-chimeras-to-assess-facial-development

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

توضح هذه المقالة تقنية زرع الانسجة التي تم تصميمها لاختبار الإشارات وخصائص الزخرفة من الأديم الظاهر سطح الرأس أثناء تطوير القحفي.

تقييم خصائص اشارة من الظهارة الأدمة خلال التنمية الجمجمة

يوصف هذا النهج لتحليل الهجرة والمصير النهائي من الطيور الخلايا العصبية في قمة السمان، فرخ أجنة خيالية. هذا الأسلوب هو أسلوب بسيط ومباشر لتعقب الخلايا العصبية خلال قمة للهجرة والتمايز التي يصعب على خلاف ذلك للتمييز في جنين الفرخ unmanipulated.

تحليل للهجرة كريست العصبية والتمايز بواسطة الصليب الأنواع زرع

يوصف بروتوكول للفصل الجنين الأديم الظاهر الوجه واللحمة المتوسطة. نستخدم Dispase II لعلاج الأجنة كلها أولا، تشريح الوجه كله من البروز، ومن ثم فصل الأديم الظاهر الوجه واللحمة المتوسطة.

فصل الأدمة الجنينية الماوس الوجه واللحمة المتوسطة

تقنية لزرع "المتطرفة الأمامي المجال" بين أنسجة الوجه القيطم المورق وقد تم تطوير الأجنة. يمكن نقل الأنسجة من احد خلفية التعبير الجيني إلى أخرى، والسماح للدراسة المتطلبات المحلية للتنمية والقحفي للانزعاج التفاعلات بين مناطق الوجه.

زرع الوجه في<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأجنة

الوقت الفاصل بين التصوير متحد البؤر هي تقنية قوية مفيدة لوصف التطور الجنيني. هنا، نحن تصف منهجية وتميز التشكل القحفي في البرية من نوع، وكذلك pdgfra، smad5، وSMO الأجنة متحولة.

تحليل الجمجمة التشكل في الزرد عن طريق 4D متحد البؤر المجهري

توضح هذه المقالة طريقة لتوليد أجنة خيالية التي تم تصميمها لاختبار المساهمات أنواع محددة من قمة العصبية و / أو الأنسجة الأخرى في التنمية القحفي.

تقييم مساهمات أنواع محددة لتنمية الجمجمة عن طريق الوهم السمان بطة

هنا نحن تقرير وضع العلامات المزدوجة من الخلايا قمة العصبية والأوعية الدموية باستخدام الفرخGFP أنبوب العصبية تطعيم داخل الأنواع جنبا إلى جنب مع حقن DiI داخل الأوعية الدموية. هذه التقنية التجريبية تسمح لنا في وقت واحد تصور ودراسة تطوير الجهاز العصبي (المعوي) المستمدة من NCC والجهاز الوعائي، أثناء تكوين الجهاز العضوي.

وضع العلامات المزدوجة من خلايا كريست العصبية والأوعية الدموية داخل أجنة الدجاج باستخدام الفرخGFP تطعيم الأنبوب العصبي وكاروتشيانين صبغ DiI حقن

منذ فترة طويلة افترض تنظيم خلية من خلايا العظام القحفي ولكن لم تصور مباشرة. وضع العلامات خلية متعددة الأطياف والحية على الهواء مباشرة   التصوير يسمح التصور من سلوك الخلية الحيوي في الفك السفلي الزرد. هنا، ونحن بالتفصيل بروتوكول للتلاعب Zebrabow الأسماك المعدلة وراثيا ومراقبة مباشرة إقحام خلية والتغيرات المورفولوجية للغضروفية في غضروف ميكل.

التصور من خلية غضروفية بيوم إضافي والاتجاه انتشار عبر Zebrabow تحليل الخلية نسيلي في الغضروف والجنينية ميكل

توفر هذه المقالة طريقة لعزل نقية الأنسجة الجنينية من أجنة السمان والدجاج التي يمكن دمجها إلى النموذج السابقين فيفو تشيميريك الأجهزة.

عزل الأنسجة الجنينية وتشكيل أجهزة تشيميريك السمان-الدجاج باستخدام المثال الغدة الصعترية

هنا نصف بروتوكولات لثلاثة أنواع من مزارع زرع الجلد الجنيني للطيور التي يمكن استخدامها لفحص تفاعلات الأنسجة ، وفيلم التصوير الفاصل الزمني 4D (3D plus time) ، والاضطراب العالمي أو المحلي للوظيفة الجزيئية ، وتوصيف بيولوجيا الأنظمة.

استخدام نباتات جلد الطيور لدراسة أنماط الأنسجة وتكوين الأعضاء

اكتشف تقنية زرع الأنسجة لدراسة تفاعلات الدماغ الأمامي القاعدي مع الوجه أثناء تطور الوجه والجمجمة في أجنة الدجاج. تمنع هذه الطريقة تلوث الخلايا العصبية القحفية لضمان دقة التحليل.

إنشاء كيميرا الدماغ الأمامي للطيور لتقييم نمو الوجه

استكشف المزيد من الفيديوهات