استخدام جنين الدجاج كأداة قوية في تقييم السموم القلبية التنموية

مرحبا بالجميع. أنا كسيشياو جيانغ، أستاذ مشارك في قسم علم السموم، كلية الصحة العامة في جامعة تشينغداو. نيابة عن مجموعتي البحثية، سأعرض أصول استخدام جنين الدجاج في تطوير تقييمنا لسمية القلب.

جنين الدجاج هو نموذج النمو الكلاسيكي الذي له مزايا متعددة مثل التلاعب السهل، وسهولة الوصول العالية، ونظام مستقل مغلق، وهلم جرا. العمل مع الملوثات البيئية المتعددة، مثل حمض التانيك الفينولية. عادم الديزل، ولا سيما المسألة على أنابيب نانو الكربون.

لدينا طرق التعرض متعددة المنشأة في المختبر، ولكن لسبب أكبر، كما يتم إجراء التقييمات الوظيفية بشكل روتيني. في هذا الفيديو، سأريك التفاصيل، وطرق التعرض وطرق التقييم الوظيفي المورفولوجية لك. لا تتردد في الاتصال بنا إذا كنت مهتما.

شكرًا لك. هنا طرق التعرض لدينا أن أتمكن من تقديم لك. الآن الطريقة الأولى التي سأقدمها هي حقن خلايا الهواء، حيث ستقوم بحقن مباشرة في خلية الهواء.

تنظيف سطح البيض مع محلول بولي يوديد. هذا هو محلول متعدد يوديد المتاحة تجاريا، المخفف مع الماء deionized، 1/5. وبعد ذلك، أجفف قشر البيض بورق الأنسجة، دون تنقية.

من المهم لأن تنقية سوف كسر طلاء طبقة واقية على السطح الخارجي للقشرة. تنظيف جميع البيض في الغرفة المظلمة ووضع علامة على خلية الهواء مع قلم رصاص. استبعاد البيض مع الشقوق على قذيفة.

أيضا استبعاد البيض مع خلايا الهواء على الجانب. إذا كان ذلك لديه طرف حاد، تلك من غير المرجح جدا أن يفقس بشكل طبيعي. تعقيم منطقة الخلية الهوائية، فضلا عن التحقيق المعدني، مع الكحول 75٪.

مسحها الجافة، ومن ثم حفر حفرة صغيرة في وسط منطقة الخلية الهوائية مع التحقيق. لا تلصق المسبار في عمق الخلية الهوائية. بدلا من ذلك، فقط كسر قذيفة مع غيض من التحقيق.

إذا كان الثقب لا يزال غير كبير بما فيه الكفاية، كسر قذيفة مرة أخرى في محيط الحفرة الموجودة، حتى انها كبيرة بما يكفي للسماح لك إدراج طرف. أدخل طرف ماصة في الحفرة مع طرف لمس الغشاء الداخلي. ببطء، حقن الخليط وعقد هناك لمدة 10 ثانية على الأقل.

هذا هو السماح للصرف عن النفط الاستغناء عنها بالكامل. ثم قم بإزالة الطرف. الآن، ختم الحفرة مع فرشاة وقطة من البارافين الذائب.

يجب الحرص على عدم بالتنقيط البارافين الذائب على الذاكرة الداخلية. بمجرد ختمها، ضع البيض في الحاضنة حتى تصل إلى المرحلة الجنينية المطلوبة. والثانية، الطريقة التي سأقدمها هي حقنة مايكرو.

أولا وقبل كل شيء، يحتاج البيض لتنظيف والتعامل معها على النحو المبين في قسم حقن الهواء. هذا الإجراء يحتاج إلى أن يتم في غطاء محرك السيارة المعقمة. تعقيم منطقة الخلية الهوائية، والأدوات مع الأسيتون.

حفر حفرة صغيرة في وسط منطقة الخلية الهوائية مع التحقيق المعدني. لا تلصق المسبار بعمق في خلية الهواء، أو قد تتلف الذاكرة الداخلية. ثم استخدم نفس العملية لتكبير الثقب بعناية حتى يبلغ قطره حوالي ملليمترين.

وهذا يمكن أن يسمح تأكيد نسبة الذاكرة الداخلية. ثم تحميل الحل في حاقن الصغرى وإدراج الإبرة بعناية من خلال ثقب في الغشاء الداخلي لما مجموعه ثلاثة ملليمترات تقريبا. الاستغناء بلطف الحل ومن ثم إزالة الإبرة.

الحفاظ على الإبرة عمودي قدر الإمكان. ختم رقيقة الحفرة مع قطعة صغيرة من الشريط. تغطية الثقب بالكامل لمنع جفاف الجنين والموت أثناء الحضانة اللاحقة.

الطريقة الثالثة التي سأقدمها هي ضخ خلايا الهواء حيث تغرس ملوث غاز في خلية الهواء. تنظيف البيض والتعامل معه كما هو موضح في قسم حقن خلايا الهواء.

وبعد ذلك يمكنك قراءة البيض حتى اليوم الجنيني 17. التعامل مع البويضات في اليوم الجنيني 17 للاحتفال منطقة الخلية الهوائية. في اليوم الجنيني 18، أخرج البيض من الحاضنة، وعقم منطقة خلايا الهواء والأدوات، مع الأسيتون.

ومن ثم حفر بعناية اثنين من الثقوب الصغيرة على جانبي الخلية الهوائية. واحد هو لحقن الغاز أو الهباء الجوي. والآخر هو لتوسيع الهواء لدينا.

تحكم بعناية في حجم الثقوب ، بحيث يكون جانب ثقب الحقن كافيا فقط لإدراج إبرة القسطرة ، في حين يجب أن يكون قطر الثقب المتوسع أكبر قليلا. قطرها حوالي ملليمتر واحد. الآن هذه هي حقيبة العينة التي نستخدمها للاحتفاظ بالغاز المستهدف أو الهباء الجوي.

يمكنك استبدال أي جهاز تستخدمه. صب بلطف 10 مل من الغاز أو الهباء الجوي في حقنة. وبعد ذلك، قم بإرفاق الحقنة بعناية بإبرة القسطرة لدينا مع الإبرة الداخلية البعيدة بحيث تكون ناعمة.

أدخل بلطف هذه الإبرة القسطرة في ثقب التسريب. بمجرد أن يكون هناك، وتطبيق الضغط ضد إبرة القسطرة. هذا هو للحد من التسرب من موقع الحقن.

يمكن وضع إصبع آخر حولها مع ثقب طرد لتأكيد التسريب الخاص بك. إذا قمت بالتسريب بلطف ، فيجب الشعور بسهولة بتدفق الهواء من ثقب الطرد. هذا هو الهواء الأصلي في الخلية الجوية التي يتم طردها.

عند الانتهاء من التسريب، ختم كلا الثقبين على الفور. هذه الأشرطة وإعادة البيض إلى حاضنتك. يمكنني تقديم عملية تقييم نقطة النهاية.

تخدير الحيوانات بالكامل مع بنتوباربيتال 33 ملغم/كغ. حقن الملكية الفكرية اختبارها من قبل يفتح. ثم ضع الدجاج على طاولة العملية.

تعقيم منطقة البطن والأقطاب الكهربائية مع الإيثانول. ثم أدخل قطبين إبرة من جانبين من البطن الفرعية بشكل مستمر. تأكد من أن الإبر لا تدخل تجويف البطن عن طريق رفع الجلد قليلا.

وأدخل الإبرة من هناك. بمجرد إدخالها، ادفع الإبرة بعناية إلى الأمام حتى تصل إلى جانب تجويف الصدر. تأكد من أن الإبرة لا تذهب عميقا في الجسم أو التمسك بها من الجلد.

ثم إجراء القياسات مع أداة تخطيط القلب. ويمكن أيضا استخدام أدوات أخرى للمعهد قادرة على تخطيط القلب. هذه هي طريقة تقييم نقطة النهاية الثانية هي الخريطة لموترين.

هذا هو المقطع العرضي من القلب في طريق HME. هذا هو البطين الأيمن الذي سنقيس به للقيام بذلك، نستخدم اثنين من الحكام.

المسطرة 1، والحاكم 2. الآن نحن مجرد نسخ مسطرة واحدة إلى الشاشة ونحجمها إلى الحجم المناسب ومن ثم تدوير ذلك. ونحركه بحيث يقع طرفي الخط الأفقي على طرفي 3 جدران البطين الأيمن.

والآن لدينا سبعة خطوط قياس تمر عبر جدار البطين الأيمن الثلاثة. الآن نسخ المسطرة الثانوية إلى الصورة أيضا. نحن أيضا تغيير حجمها قليلا وتدوير واستبدال ذلك بحيث سيتم وضعها على حد سواء.

هذا الخط الأفقي يذهب بالتوازي مع الجدار الخارجي للبطين الأيمن. والعامدة واحدة تذهب عبر نقطة إلى حيث خطوط المادة البيضاء الحاكم تلبية الجدار الداخلي أو البطين الأيمن. ومن ثم نصنع نقاط قياس بحيث يمكن قياسها لاحقا بالصورة J.We نكرر هذه العملية 7 مرات لكل عينة، بحيث يكون قياسنا التمثيلي للبطين الأيمن.

سأريك ملخصا للنتائج الحالية هذا هو حقن PFOA في البيض قبل الحضانة، ويمكنك أن ترى أنه مع زيادة تلك الحقن تركيز المصل LPF في المصل زيادة فعالة. في مظاهرة، وفعالية، من الحقن الجزئي.

يمكنك أن ترى أن A هو السيطرة، وB، هو المكان الذي تم حقن مكافحة الفيروسات اكسبرس في البروتين Q مضان كبيرة. يمكنك أن ترى مضان قوي. وهذا هو العرض لفعالية ضخ الظهارة.

يمكنك أن ترى أنه مع التسريب ، لوحظت تغيرات مثيرة في الألياف البصرية في أنسجة عضلة القلب. حسنًا. ويمكنك أيضا أن ترى أن فترات R-R من الدجاج الفقس 0, 1, و 2 أسابيع. كما أنها تغيرت بشكل كبير بعد التسريب مع عوادم الديزل.

تشير إلى أن عامل في هذا، هذا الأسلوب. هنا ، يمكنك أيضا أن ترى أن فعالية ضخ الظهارة في هذا المثال. يمكنك أن ترى أن البطينين الأيمنين للقلب زادت بشكل فعال بعد أن الهباء الجوي غرست مع عادم الديزل.

وبالطبع، هنا نستخدم الطرق الهستومورمومترية. نحن فقط نريك. هذا فعال جدا. حسنًا.

هذه كل الطرق التي سأقدمها لك آمل أن يسهل هذا عمل الآخرين مع جنين الدجاج كأداة بحثية قوية في علم السموم التنموية. أسعد الله يومك.