مجموعة بيانات تسلسلية هدف ثابت في مصدر ضوء الماس

المسلسل البلورات السنكروترون ، أو SSX ، هو مجال جديد نسبيا وسريعة التطور من MX.It مناسبة تماما لجرعة منخفضة وتجارب درجة حرارة الغرفة ، ولكن ربما الأهم من ذلك ، انها حقا مناسبة تماما لديناميات التالية. وهذا يسمح للأفلام وقف الحركة من البروتينات في العمل التي يتعين القيام بها. في I24، تتوفر أوضاع متعددة من SSX.

يركز هذا البروتوكول على SSX ذات الهدف الثابت، والتي تسمح بمجموعة واسعة من التجارب التسلسلية باستخدام كميات محدودة من العينة. يمكن أن تتلف رقائق السيليكون عند تحميلها وتنظيفها ، إذا كنت غير مألوف بها. أيضا ، بروتوكول محاذاة رقاقة جديدة تماما لكثير من crystallographers ، ومعالجة البيانات يختلف قليلا عن البيانات الخاصة بك دوران القياسية.

لإعداد حامل رقاقة، وقطع ورقتين من رقائق البوليستر إلى ما يقرب من 6 في 6 سم مربع، ووضع الأوراق على لوحات قاعدة اثنين. باستخدام حلقات ختم معدنية، وإصلاح الأوراق في مكان، ثم سحب بعناية على احباط الزائدة لإزالة أي التجاعيد. بعد ذلك ، حدد رقاقة السيليكون ذات الفتحات المناسبة الحجم بالنسبة لحجم البلورات التي سيتم تحليلها.

توهج تفريغ رقاقة لمدة 25 ثانية في 0.39 ملليبار، مع تيار 15 مللي أمبير. استخدام ملاقط لوضع رقاقة السيليكون على مرحلة تحميل رقاقة، مع القضبان التي أثيرت تواجه أسفل. ثم، وذلك باستخدام ماصة، وتطبيق 200 ميكرولتر من الطين microcrystal إلى الجانب المسطح من رقاقة، ونشر الطين لتغطية جميع كتل المدينة من رقاقة.

إذا تضررت رقاقة، وتغطية أي ثقوب مع قطعة صغيرة من رقائق البوليستر، لضمان أن فراغ حتى يمكن تطبيقها. ثم تطبيق فراغ لطيف لتنشق كل من السائل الزائد من خلال رقاقة. قم بإزالة الشريحة من مرحلة تحميل الشريحة، ولطخ بعناية الجانب السفلي من الشريحة بورق تصفية لإزالة السائل الزائد.

ضع الشريحة المحملة على النصف الأكبر من حامل الشريحة بين علامات الدليل ، الجانب المسطح لأسفل. ضع النصف الصغير من حامل الشريحة على الشريحة لختمها. يجب أن ينفجر نصفي حامل الشريحة في مكانه.

ثم، وذلك باستخدام مسامير هيكس، إصلاح رقاقة بأمان في مكان. لمحاذاة الشريحة، أمسك حامل الشريحة بزاوية 30 درجة أثناء الاقتراب من الحامل. ثم استخدم يتصاعد الحركية لوضع رقاقة محملة على المرحلة XYZ في خط شعاع.

عندما المغناطيس إجراء اتصال، والسماح لحامل رقاقة لتدوير موازية لتدفق، وانقر في مكانه. بمجرد وضع الشريحة ، استخدم نظام عرض الحزمة على المحور وواجهة المستخدم الرسومية لمحاذاة الشريحة لتحديد موقع أعلى fiducial الأيسر للشريحة. للتوسيط على fiducial 0 في X و Y و Z ، انتقل إلى داخل وخارج التركيز لمحاذاة Z ، صعودا وهبوطا لمحاذاة Y ، واليسار واليمين لمحاذاة X.Then انقر فوق Set Fiducial 0 "بعد محاذاة fiducial 1 و 2 مع شعاع الأشعة السينية بنفس الطريقة ، انقر فوق إنشاء نظام تنسيق" لتوليد مصفوفة تنسيق.

ثم انقر فوق "فحص كتلة" لنقل المرحلة XYZ إلى البئر الأول من كل كتلة المدينة. إذا كانت خطوط مرمى الأشعة السينية مع الفتحات، يتم محاذاة الشريحة. في هذا التمثيل الرسومي لنتائج البحث الفوري من DIALS يمكن ملاحظة مؤامرة معدل ضرب تحديث.

إذا تم النقر فوق ضربة، سيتم عرض صورة الحيود المقابلة في عارض الصور DIALS. في هذا الجدول، يمكن تصور معدلات الفهرسة والتكامل الحالية التي يتم تحديثها في الوقت الفعلي أثناء جمع البيانات أثناء الزيارة. يمكن أن يكشف التصور لمعلمات خلية الوحدة عن تعدد الأشكال.

ويمكن أيضا إنتاج مؤامرات ثنائية الأبعاد من المعلمات المفيدة للكشف عن الاختلافات التي تنشأ بسبب تحميل أو آثار الجفاف. يمكن أن تكشف الإسقاطات المجسمة عن وجود أو عدم وجود التوجهات المفضلة التي يمكن تغذيتها مرة أخرى في بروتوكول التحميل. على سبيل المثال، في هذا الإسقاط، يمكن ملاحظة آثار إثقال رقاقة مع بلورات lysozyme.

عند تحميل رقاقة، ماصة ببطء واستخدام إصبعك للراحة ماصة فوق رقاقة. هذا يمنعك من لمس رقاقة وطعن بطريق الخطأ ثقوب في السيليكون. عند معالجة البيانات، استخدم خطوط الأنابيب المؤتمتة المتاحة.

هذا وسوف تعطيك فكرة جيدة عن كيفية تقدم تجربتك، وإذا كنت بحاجة إلى تغيير شيء. يمكن تطبيق هذه الطريقة على أي نظام البروتين التي يمكن بلورتها بكميات كبيرة. ويمكن أن يحدث رد الفعل عن طريق الأشعة السينية الخفيفة أو الاختلاط السريع.

يمكن للدراسات الديناميكية على سلسلة من الهياكل أن توفر نظرة ثاقبة حول كيفية عمل البروتينات.