Name: تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: اكتشف تقنيات جراحية محسّنة لزراعة جزر لانغرهانس داخل الوريد البابي في الفئران. تمنع هذه الطرق النزيف الناتج عن الزراعة وتقلل الوفيات، مما يعزز أبحاث أمراض الكبد والسرطان.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذه الدراسة من قبل وزارة شؤون المحاربين القدامى (VA-ORD BLR & D MERITIT I01BX004536) ، ومنح المعهد الوطني للصحة # 1R01DK105183 ، DK120394 ، DK118529 ، إلى HW. نود أن نشكركم السيد مايكل لي والسيدة ليندسي سوابي على تحرير اللغة

تم إجراء جميع الإجراءات بموافقة اللجان المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات في جامعة ساوث كارولينا الطبية ومركز رالف إتش جونسون الطبي في تشارلستون.
1. تحريض مرض السكري باستخدام الستربتوزوتوسين (STZ)
<ol><li>إعداد الفئران المتلقية:<ol>
<li>وزن جميع الفئران بشكل فردي.</li>
		<li>تحقق من مستويات الجلوكوز في الدم من عينة دم الوريد الذيل باستخدام مقياس السكر.</li>
	</ol>
</li>
	<li>تحديد جرعة STZ لثلاثة سيناريوهات مختلفة:<ol>
<li>بالنسبة للفئران المصابة بمرض الكبد الدهني ، قم بحقن جرعة واحدة من STZ [40 مجم / كجم / يوم ، حقن داخل الصفاق (i.p)] لمدة 5 أيام متتالية.</li>
		<li>بالنسبة للفئران NOD-SCID ، قم بحقن 125 مجم / كجم من STZ ، حقنة واحدة ، أي بعد الصيام طوال الليل.</li>
		<li>بالنسبة للفئران C57BL/6 ، تحقن 225 مجم / كجم من STZ ، حقنة واحدة ، i.p.</li>
	</ol>
</li>
	<li>حسابات STZ (13.5 ملغم / مل): ملاحظة: هذا الحساب مخصص لخمسة فئران C57BL/6 بأوزان جسم تبلغ 30 جم:<ol>
<li>إجمالي أوزان الجسم: 5 فئران × 30 جم / ماوس = 150 جم</li>
		<li>STZ المطلوبة: 150 جم × 225 مجم / 1000 جم STZ = 33.75 مجم</li>
	</ol>
</li>
	<li>إعداد STZ:<ol>
<li>وزن STZ بعد الجرعة المحسوبة مسبقا.</li>
		<li>انقل مسحوق STZ الموزون إلى كوب سعة 10 مل على الجليد.</li>
		<li>أضف 3 مل من محلول سترات الصوديوم إلى الكأس لإذابة STZ.</li>
		<li>اخلطي جيدا ، وقم بتصفية التعقيم من خلال مسام 0.22 ميكرومتر ، واستخدمي محلول STZ في غضون 10 دقائق من التحضير.</li>
	</ol>
</li>
	<li>حقن STZ:<ol>
<li>قم بتحميل الكمية المطلوبة من محلول STZ (يكفي لماوس واحد) في حقنة 1 مل.</li>
		<li>إجراء الحقن داخل الصفاق في الربع الأيمن السفلي من بطن الماوس.</li>
		<li>راقب الفئران لمدة 5 دقائق بعد الحقن وتحقق من وجود أي علامات على عدم الراحة خلال هذه الفترة الزمنية قبل إعادتها إلى الأقفاص.</li>
		<li>راقب مستوى الجلوكوز في الدم من عينة دم الوريد الخلفي باستخدام مقياس السكر يوميا بعد حقن STZ. ملاحظة: في هذه التجربة ، تعتبر الفئران مصابة بمرض السكري عندما يكون مستوى الجلوكوز في الدم غير الصائم > 350 مجم / ديسيلتر لمدة يومين متتاليين.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. إعداد الجزيرة
ملاحظة: تم استزراع الجزر البشرية في وسائط CMRL-1066 مع استكمال 10٪ من مصل البقر الجنيني (FBS) ، و 1٪ من البنسلين / الستربتومايسين (P / S) بكثافة 10000 رقم مكافئ للجزيرة (IEQ) لكل طبق زراعة خلايا 100 مم 9. تم استزراع جزر الماوس في DMEM بنسبة 10٪ FBS و 1٪ P / S بنفس الكثافة13. تم الحصول على ذكور NOD-SCID و C57BL/7 الفئران بين 6-10 أسابيع من العمر من مصادر تجارية.
<ol><li>افصل الجزر المستزرعة عن طبق زراعة الخلايا عن طريق الخدش اللطيف.</li>
	<li>اختر يدويا الأعداد المطلوبة من الجزر (على سبيل المثال ، 300-350 جزيرة) باستخدام حقنة 1cc وضعها في أنابيب طرد مركزي دقيقة معقمة 1.5 مل على الجليد.</li>
	<li>قم بتدوير الأنبوب لمدة 10 ثوان باستخدام جهاز الطرد المركزي الدقيق.</li>
	<li>قم بإزالة السوبرناتانت ، مع ترك بعض السائل لتجنب فقدان الكريات.</li>
	<li>أعد تعليق الكريات في 200 ميكرولتر من HBSS مع ألبومين مصل البقر بنسبة 0.5٪ (BSA).</li>
	<li>استنشاق الجزر المعاد تعليقها في حقنة أنسولين سعة 0.5 مل.</li>
	<li>ضع المحقنة في وضع مستقيم. دع الجزر تغرق لمدة 1 دقيقة.</li>
	<li>ادفع المحقنة لإزالة جميع الفقاعات ، تاركا حوالي 100-150 ميكرولتر من الجزر التي تحتوي على سائل.</li>
	<li>ضع المحقنة رأسا لأسفل واضغط برفق على جانب المحقنة للسماح للجزر بالتوزيع بالتساوي في جميع أنحاء السائل. الجزر جاهزة الآن للحقن.</li>
</ol>3. زرع الجزر
<ol><li>حث والحفاظ على الماوس تحت التخدير العام مع 2 ٪ isoflurane. تحقق من عدم وجود ردود فعل دواسة لضمان التخدير السليم للحيوان.</li>
	<li>حلق وإزالة الفراء في منطقة البطن من الماوس.</li>
	<li>إعطاء جرعة واحدة قبل الجراحة من البوبرينورفين (0.1 مغ / كغ i.p.).</li>
	<li>تطهير المنطقة الجراحية بثلاثة مناديل متناوبة من 2٪ من اليود و 75٪ من الكحول.</li>
	<li>قم بإجراء بضع البطن باستخدام مقص صغير لتوليد شق 1-1.5 سم.</li>
	<li>افتح التجويف البريتوني باستخدام متراجع. اتبع إما الطريقة A أو الطريقة B كما هو مفصل أدناه.</li>
</ol>4. الطريقة أ: (وقف النزيف مع رغوة هلام ، الشكل 1 أ) 14،15،16
<ol><li>إعداد الماوس<ol>
<li>ضع شاشا معقما حول الشق.</li>
		<li>اسحب الأمعاء بلطف باستخدام ملقط واحتفظ بها على الشاش.</li>
		<li>التعرف على الوريد البابي حسب موقعه وكشفه جيدا.</li>
		<li>قم بتغطية الأمعاء بشاش ملحي دافئ رطب أثناء الجراحة بأكملها.</li>
	</ol>
</li>
	<li>أدخل إبرة حقنة الأنسولين المحملة مسبقا بالجزيرة عبر الوريد البابي بالقرب من الاثني عشر (الشكل 1B). للقيام بذلك ، أمسك الإبرة مع توجيه الثقب (الشطب) لأسفل ووضع زاوية سطح الفتحة موازية لجدار الوريد البابي قبل اختراق الجدار.<ol>
<li>اسحب المكبس لسحب بعض الدم (20-50 ميكرولتر) إلى المحقنة لخلط الجزر أولا.</li>
		<li>غرس الجزر في الوريد البابي ببطء أثناء سحب ودفع الغطس بشكل متكرر.</li>
		<li>ضع قطعة من رغوة الجل (حوالي 0.5 سم × 0.5 سم في الحجم) لتغطية موقع الحقن.</li>
		<li>اضغط على رغوة الجل لأسفل بطرف قطني أثناء سحب الإبرة من الوريد البابي.</li>
		<li>استمر في الضغط على الجل لمدة 2 دقيقة للتأكد من عدم وجود نزيف نشط.</li>
		<li>قم بلف طرف القطن فوق رغوة الجل وبعيدا عنها للتأكد من أن رغوة الجل تغطي الوريد البابي جيدا.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. الطريقة ب: (وقف النزيف مع وسادة الدهون ، الشكل 1C) 17
<ol><li>كشف الوريد البوابة بدقة.<ol>
<li>استخدم طرفين قطنيين لتثبيت الوريد البابي المكشوف من الجانبين الأيسر والأيمن.</li>
		<li>تحديد وسادة الأنسجة الدهنية بين الاثني عشر والوريد البابي.</li>
		<li>اخترق وسادة الدهون قبل إدخال الإبرة في الوريد البابي (الشكل 1D).</li>
		<li>غرس الجزر ، باتباع الإجراء المماثل الموصوف أعلاه في الجزء 4.2.1 و 4.2.2 من الطريقة A.</li>
		<li>اسحب الإبرة للخارج أثناء الضغط على الدهون بطرف قطني.</li>
		<li>استمر في الضغط على وسادة الدهون لمدة 1 دقيقة بعد إزالة الإبرة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>بعد التأكد من عدم وجود نزيف من الوريد البابي ، أعد الأمعاء بلطف إلى التجويف البريتوني في موضعه الأصلي.</li>
	<li>اترك 0.5 مل من المياه المالحة الدافئة (36-37 درجة مئوية) في تجويف البطن قبل الإغلاق. ملاحظة: المياه المالحة الدافئة تسهل حركة الأمعاء بعد الجراحة والتعافي منها وتمنع نخر الأمعاء.</li>
	<li>أغلق طبقة العضلات بخياطة 5-0.</li>
	<li>أغلق طبقة الجلد بخياطة 4-0.</li>
	<li>ضع الماوس في قفص نظيف على وسادة تدفئة حتى يتعافى تماما من التخدير.</li>
	<li>استمر في تقديم مسكن (على سبيل المثال ، البوبرينورفين 0.1 مجم / كجم i.p) كل 12 ساعة وحرارة تكميلية لمدة 48 ساعة بعد الجراحة. ملاحظة: تستغرق عملية زرع الجزر حوالي 15-20 دقيقة لإكمالها.</li>
</ol>6. H & E تلطيخ وصورة لقسم الكبد كله
<ol><li>تروية الكبد<ol>
<li>ضع الماوس تحت التخدير كما هو موضح أعلاه في الجزء 3.1.</li>
		<li>كشف بعناية الوريد البابي وقطع الوريد الأجوف السفلي.</li>
		<li>قم بتحريك الكبد يدويا باستخدام 20 مل من 10٪ paraformaldehyde عبر الوريد البابي لمدة 5 دقائق تقريبا ، باستخدام حقنة 20 مل مع إبرة 25G 18. ملاحظة: يمكن لتروية الكبد إزالة الدم من أنسجة الكبد وتحسين تثبيت الكبد دون إزعاج ترقيع الجزيرة.</li>
		<li>تشريح الكبد كله perfed من الأعضاء الأخرى.</li>
		<li>إصلاح أنسجة الكبد pervoled في 10 ٪ paraformaldehyde لمدة 24 ساعة.</li>
		<li>تضمين الأنسجة في البارافين.</li>
		<li>قطع أقسام الأنسجة بسماكة 5 ميكرومتر لكل منها ووضعها على شريحة زجاجية للتلطيخ.</li>
		<li>قم بإجراء تلطيخ H&E والأنسولين والفيبرين والعدلات النووية متعددة الأشكال (PMN) باستخدام الطرق القياسية15,16.</li>
		<li>مسح قسم الكبد بالكامل تحت المجهر.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+state+of+the+art+of+islet+transplantation+and+cell+therapy+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Diabetology%22%5BJournal%5D)">The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes.</a> Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).</li>
<li>Ballinger, W. F., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+intact+pancreatic+islets+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of intact pancreatic islets in rats.</a> Surgery. 72 (2), 175-186 (1972).</li>
<li>Wright, J. R., Hauptfeld, V., Lacy, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Ia+antigen+expression+on+murine+islet+parenchymal+cells+does+not+diminish+islet+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Induction of Ia antigen expression on murine islet parenchymal cells does not diminish islet allograft survival.</a> American Journal of Pathology. 134 (2), 237-242 (1989).</li>
<li>Toyofuku, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+T-cells+participate+in+rejection+of+islet+allografts+in+the+liver+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Natural killer T-cells participate in rejection of islet allografts in the liver of mice.</a> Diabetes. 55 (1), 34-39 (2006).</li>
<li>Goss, J. A., Nakafusa, Y., Finke, E. H., Flye, M. W., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+islet+xenografts+in+a+concordant+rat-to-mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to islet xenografts in a concordant rat-to-mouse model.</a> Diabetes. 43 (1), 16-23 (1994).</li>
<li>Hara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+studying+intrahepatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A mouse model for studying intrahepatic islet transplantation.</a> Transplantation. 78 (4), 615-618 (2004).</li>
<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-1+antitrypsin+enhances+islet+engraftment+by+suppression+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Alpha-1 antitrypsin enhances islet engraftment by suppression of instant blood-mediated inflammatory reaction.</a> Diabetes. 66 (4), 970-980 (2017).</li>
<li>Gou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-1+antitrypsin+suppresses+macrophage+activation+and+promotes+islet+graft+survival+after+intrahepatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Alpha-1 antitrypsin suppresses macrophage activation and promotes islet graft survival after intrahepatic islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. , (2020).</li>
<li>Contreras, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+preserves+functional+islet+mass+after+intraportal+transplantation%3A+A+novel+link+between+endothelial+cell+activation%2C+thrombosis%2C+inflammation%2C+and+islet+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Activated protein C preserves functional islet mass after intraportal transplantation: A novel link between endothelial cell activation, thrombosis, inflammation, and islet cell death.</a> Diabetes. 53 (11), 2804-2814 (2004).</li>
<li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> Lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li>
<li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrahepatic+islet+transplant+in+the+mouse%3A+functional+and+morphological+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Intrahepatic islet transplant in the mouse: functional and morphological characterization.</a> Cell Transplantation. 17 (12), 1361-1370 (2008).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor+treatment+with+carbon+monoxide+can+yield+islet+allograft+survival+and+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Donor treatment with carbon monoxide can yield islet allograft survival and tolerance.</a> Diabetes. 54 (5), 1400-1406 (2005).</li>
<li>Desai, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+liver+histopathology+on+islet+cell+engraftment+in+the+model+mimicking+autologous+islet+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Effect of liver histopathology on islet cell engraftment in the model mimicking autologous islet cell transplantation.</a> Islets. 9 (6), 140-149 (2017).</li>
<li>Cui, W., Angsana, J., Wen, J., Chaikof, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomal+formulations+of+thrombomodulin+increase+engraftment+after+intraportal+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Liposomal formulations of thrombomodulin increase engraftment after intraportal islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 19 (11), 1359-1367 (2010).</li>
<li>Cui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombomodulin+improves+early+outcomes+after+intraportal+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Thrombomodulin improves early outcomes after intraportal islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 9 (6), 1308-1316 (2009).</li>
<li>Proto, C., Grasso, G., Fassio, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatoparenchymal+clearance+of+indocyanine+green+in+infectious+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Giornale+di+Malattie+Infettive+e+Parassitarie%22%5BJournal%5D)">Hepatoparenchymal clearance of indocyanine green in infectious hepatitis.</a> Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. 20 (9), 845-851 (1968).</li>
<li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+hepatocytes+and+sinusoidal+endothelial+cells+from+mouse+liver+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Purification of hepatocytes and sinusoidal endothelial cells from mouse liver perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56993(2018).</li>
<li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraportal+transplantation+of+pancreatic+islets+in+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559(2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+mesenchymal+stem+cell+and+islet+cotransplantation%3A+Safety+and+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Autologous mesenchymal stem cell and islet cotransplantation: Safety and efficacy.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (1), 11-19 (2018).</li>
</ol>

يعلن جميع المؤلفين أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.

في هذه الدراسة ، تم إثبات اثنين من الإجراءات المحسنة التي يمكن أن تمنع النزيف وقد تقلل من وفيات الفئران أثناء IIT الفأر. تمكن هذه الدراسة الباحثين من تصور نموذج زرع الجزر الفريد من نوعه في دراسة الاستجابة الالتهابية الفورية بوساطة الدم بعد الزرع. نموذج IIT هو نموذج مميز لدراسة بقاء الخلايا الجزرية والإصابات الإقفارية الكبدية استجابة لزرع الجزر19. هنا ، قمنا بتنقيح الإجراء بناء على دراسات سابقة وقللنا من وفيات الفئران المبكرة الناجمة عن المضاعفات. تم استخدام كل من الطريقة A14,15,16 <sup class="xref...

زرع الجزر داخل البوابة (IIT) عبر الوريد البابي هو الطريقة الأكثر استخداما لزرع الجزر البشرية في الإعدادات السريرية. يوفر نموذج IIT للفأر فرصة رائعة لدراسة زراعة الجزر واختبار الأساليب التداخلية الواعدة التي يمكن أن تعزز فعالية زراعة الجزر1. تم وصف IIT لأول مرة في 1970s واستخدامها من قبل عدة مجموعات1،2،3،4،5. استعادت شعبيتها بعد الاختراق في زرع الجزر البشرية في عام 20006،7. ومع ذلك ، استخدمت معظم دراسات زراعة الجزر كبسولة الكلى كموقع مفضل لزرع الجزر التجريبي بسبب نجاحها السهل. على العكس من ذلك ، فإن IIT أكثر تحديا من الناحية الفنية وأقل استخداما لدراسات زرع الجزر8,9. على عكس IIT ، ومع ذلك ، فإن الجزر المزروعة تحت كبسولة الكلى لا تعاني من التفاعل الالتهابي الفوري بوساطة الدم الذي يتميز بالجلطة والالتهاب ونقص تروية الأنسجة الكبدية ، وبالتالي يكون لها وظيفة أفضل من الجزر المزروعة في الكبد. لذلك ، قد لا يحاكي نموذج كبسولة الكلى تماما الضغوط التي تواجهها الجزر في زراعة الجزر البشرية 10،11،12.
واحدة من المضاعفات الرئيسية ل IIT في الفئران هي النزيف من موقع الحقن بعد الزرع ، مما قد يسبب 10-30 ٪ من الوفيات بين سلالات الفئران المختلفة 12. في هذه الورقة ، تم تطوير نهجين مكررين لوقف النزيف بسرعة أكبر وأمان وللحد من وفيات الفئران بعد IIT. سيساعد العرض المرئي لهذه التفاصيل الدقيقة الباحثين على تحديد الخطوات الرئيسية لهذا الإجراء الصعب تقنيا. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد موقع الطعوم الجزرية في كبد المتلقي من خلال الفحص النسيجي لأنسجة الكبد الملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) (القسم بأكمله) التي تحمل الجزر المزروعة.

<table><tbody><tr><td>10٪ فورمالين محايد مخزن v / v</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>1 مل حقنة مع إبرة</td><td>AHS</td><td>AH01T</td><td></td></tr><tr><td>20 مل حقنة</td><td>BD</td><td>301031</td><td></td></tr><tr><td>25G × 5/8 "إبر تحت الجلد</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>وسادات تحضير الكحول ، معقمة</td><td>فيشر Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>التخدير الحيواني نظام</td><td>VetEquip، Inc.</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>بوبرينورفين هيدروكلوريد ، حقن</td><td>Par Sterile Products ، LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب الطرد المركزي ، 15 مل</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>CMRL-1066</td><td>Corning</td><td>15110CV</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>10013CV</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول ، المطلق (200 دليل) ، درجة البيولوجيا الجزيئية</td><td>فيشر العلمي</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>مقص تشريح دقيق فائق الدقة 4 "شركة</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني (FBS)</td><td>Corning</td><td>35011CV</td><td></td></tr><tr><td>FreeStyle&nbsp; شرائط اختبار الجلوكوز</td> في الدم <td>Abbott</td><td>Lite</td><td></td></tr><tr><td>FreeStyle</td><td>Abbott</td><td>Lite</td><td></td></tr><tr><td>Gelfoam (إسفنجة جيلاتين قابلة للامتصاص ، USP)</td> <td>Pharmacia & amp شركة Upjohn</td><td>34201</td><td></td></tr><tr><td>ملقط Graefe 4 "طرف حساس للغاية</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>وسادة ساخنة</td><td>من أمازون</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبرة هيجار-بومغارتنر 5.25 بوصة</td><td>شركة روبوز للأدوات الجراحية</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>حقنة الأنسولين بإبرة قياس 27</td><td>BD</td><td>879588</td><td></td></tr><tr><td>وسادات إعداد اليود</td><td>فيشر Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal للرعاية الحرجة</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>البنسلين / الستربتومايسين (P / S) خياطة</td> <td>HyClone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>البولي بروبيلين 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>خياطة البولي بروبلين 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم ، محلول وريدي 0.9٪</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>Streptozocin (STZ)</td> <td>Sigma</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>الستارة الجراحية ، كاسيت</td><td>الأنسجة المعقم Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>كاسيت الأنسجة</td><td>فيشر Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr></tbody></table>

تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

على الرغم من أن الكبد مقبول حاليا كموقع زرع أساسي للجزر البشرية في الإعدادات السريرية ، إلا أن الجزر يتم زرعها تحت كبسولة الكلى في معظم دراسات زراعة الجزر قبل السريرية للقوارض. يستخدم هذا النموذج بشكل شائع لأن زرع جزيرة الفئران داخل الكبد يمثل تحديا تقنيا ، ويمكن أن تموت نسبة عالية من الفئران من المضاعفات الجراحية ، وخاصة النزيف من موقع الحقن بعد الزرع. في هذه الدراسة ، تم عرض إجراءين يمكنهما تقليل حدوث نزيف الوريد البابي بعد التسريب. تطبق الطريقة الأولى إسفنجة جيلاتين مرقئ قابلة للامتصاص على موقع الحقن ، وتتضمن الطريقة الثانية اختراق إبرة حقن الجزيرة من خلال الأنسجة الدهنية أولا ثم في الوريد البابي باستخدام الأنسجة الدهنية كحاجز مادي لوقف النزيف. كلتا الطريقتين يمكن أن تمنع بشكل فعال موت الفئران الناجم عن النزيف. تم تقديم قسم الكبد بأكمله الذي يوضح توزيع الجزر وأدلة على تجلط الدم في الجزيرة بعد الزرع ، وهي ميزة نموذجية لزرع الجزر داخل الكبد. تعمل هذه البروتوكولات المحسنة على تحسين إجراءات زرع الجزر داخل الكبد وقد تساعد المختبرات على إعداد الإجراء لدراسة بقاء الجزيرة ووظيفتها في إعدادات ما قبل السريرية.

أجرينا عمليات زرع جزر متجانسة وجينية أجنبية عبر الوريد البابي. لوحظت وظيفة الكسب غير المشروع في الجزيرة بطريقة تعتمد على الجرعة في كل من نماذج زرع الجزر. في نموذج زرع الجزر المتلازمية باستخدام الفئران C57BL/6 ، أدى زرع 250 جزيرة إلى ارتفاع السكر في الدم المعياري العابر قبل أن تعود الفئران إلى ارتفاع السكر في الدم. وصلت الفئران التي تتلقى 500 جزيرة إلى مستوى السكر في الدم المعياري وحافظت عليه بعد 30 يوما من الزرع (الشكل 2 أ). أظهرت الفئران في كلتا المجموعتين زيادة في أوزان الجسم (<strong clas...

نقدم هنا إجراءات جراحية محسنة حول إجراء عملية زرع الجزر داخل البوابة بنجاح ، وهو إجراء جراحي ذي صلة سريريا ولكنه صعب تقنيا ، في الفئران.

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

الكبد هو موقع أساسي للزرع في البيئة السريرية للجزيرة البشرية. تعتبر عملية زرع الجزر داخل الكبد تحديا تقنيا ، ويمكن أن تموت نسبة عالية من الفئران بسبب المضاعفات الجراحية ، وخاصة النزيف. في هذه الدراسة ، يمكن للطريقتين اللتين أظهرناهما أن تمنعا بشكل فعال موت الفئران الناجم عن النزيف.يمكن تطبيق طريقتنا على الأبحاث في سرطان الكبد وأمراض الكبد الأخرى عن طريق السماح بحقن الخلايا السرطانية والخلايا الجذعية الوسيطة وخلايا الكبد مباشرة إلى الكبد. للبدء ، افصل ثقافة جزيرة بشرية مع خدش لطيف. استخدم حقنة 1 سنتيمتر مكعب لاختيار 300 إلى 350 جزيرة في أنابيب طرد مركزي دقيقة معقمة 1.5 ملليلتر على الجليد.عندما يتم اختيار جميع الجزر ، قم بطرد الأنابيب لمدة 10 ثوان لترسيب الخلايا. تخلص من جميع المواد الفائقة باستثناء حجم صغير منها لمنع فقدان الكريات وإعادة تعليق الجزر في 200 ميكرولتر HBSS تحتوي على 5٪ BSA. قم بتحميل الجزر المعاد تعليقها في حقنة أنسولين سعة 5 ملليلتر وقم بتحويل إبرة المحقنة لمدة 1 دقيقة للسماح للجزر بالاستقرار في المكبس.اخفض المكبس لإزالة أي فقاعات ، مع الاحتفاظ بحوالي 100 إلى 150 ميكرولتر من المحلول في المحقنة وعكس المحقنة بنقر لطيف لتوزيع الجزر بالتساوي. بعد التأكد من عدم الاستجابة لمنعكس الدواسة ، ضع مرهما على العينين لمنع التجفيف. حلق بطن الفأر المخدر لإزالة الفراء وتطهير المنطقة الجراحية بثلاثة مناديل متناوبة من 2٪ من اليود و 75٪ من الكحول.بعد ذلك ، قم بعمل شق من 1 إلى 1.5 سم في البطن وافتح التجويف البريتوني. ضع قطعة معقمة من الشاش حول الشق واستخدم الملقط أو أطراف القطن لنقل الأمعاء بلطف إلى الشاش. ثم قم بتغطية الأمعاء بقطعة من الشاش المنقوع بمحلول ملحي وكشف الوريد البابي.لوقف النزيف الناجم عن نقل الجزيرة باستخدام رغوة الجل ، أمسك الإبرة مع توجيه الشطبة لأسفل ووضع طرف الإبرة مع الفتحة الموازية لجدار الوريد البابي قبل إدخال الإبرة في الوريد البابي. اسحب المكبس لسحب 20 إلى 50 ميكرولتر من الدم إلى المحقنة لخلطها مع الجزر قبل غرس الجزر في الوريد البابي مع الضغط وسحب المكبس بشكل متكرر. عندما يتم تسليم جميع الجزر ، ضع قطعة من رغوة الجل بطول 5 × 5 سنتيمترات تقريبا فوق موقع الحقن.استخدم طرف قطني للضغط على رغوة الجل لأسفل أثناء إزالة الإبرة من الوريد البابي. امسك الجل في مكانه لمدة 2 دقيقة تقريبا ، مع لف رغوة الجل للتأكد من أنه يغطي الوريد البابي. بمجرد إيقاف النزيف ، أعد الأمعاء بلطف إلى التجويف البريتوني في الموضع الأصلي وحقن 500 ميكرولتر من المياه المالحة الدافئة في تجويف البطن.استخدم الغرز لإغلاق طبقات العضلات والجلد. ثم ضع الماوس في قفص نظيف على وسادة تدفئة مع المراقبة حتى الشفاء التام من التخدير ، وإدارة التسكين كل 12 ساعة والحرارة لمدة 48 ساعة. لوقف النزيف الناجم عن نقل الجزيرة باستخدام وسادة دهنية ، بعد تعريض الوريد البابي كما هو موضح ، استخدم طرفين قطنيين لتثبيت الوريد المكشوف على الجانبين الأيسر والأيمن وتحديد موقع وسادة الأنسجة الدهنية بين الاثني عشر والوريد البابي.اخترق وسادة الدهون بطرف الإبرة قبل إدخالها في الوريد البابي. غرس الجزر في الوريد البابي كما هو موضح. عندما يتم تسليم جميع الجزر ، اضغط على الأنسجة الدهنية بطرف قطني لمدة 1 دقيقة تقريبا أثناء إزالة الإبرة من الوريد.ثم أعد الأمعاء إلى تجويف البطن وقم بإجراء بقية إجراءات الرعاية بعد الجراحة كما هو موضح. تعتمد آثار زرع الجزر على الجرعة ، حيث لوحظ نسبة السكر في الدم الطبيعية بعد 30 يوما من زرع الجزر المتزامن عندما يتم نقل 500 جزيرة ، ولكن يتم ملاحظة ارتفاع السكر في الدم الانتقالي فقط عند تسليم 250 جزيرة ، مع عودة الفئران إلى ارتفاع السكر في الدم قبل 10 أيام بعد الزرع. لوحظ زيادة في وزن الجسم في كلتا المجموعتين ولوحظت استجابات متطابقة عند زرع الجزر البشرية في فئران NOD-SCID المصابة بالسكري ، مع ملاحظة ارتفاع نسبة السكر في الدم عند زرع أعداد أكبر من مكافئات الجزر ولكن ليس بأعداد أقل.غالبية الفئران التي تنزف بعد النقل تموت بعد الجراحة ، في حين أن الفئران دون نزيف البقاء على قيد الحياة. في 28 يوما بعد الزرع ، يكشف تلطيخ الأنسولين عن توزيع متساو للجزيرة البشرية في جميع أنحاء الكبد ، معظمها بالقرب من الأوعية الدموية. بالإضافة إلى الأنسولين ، لوحظ أيضا ترشيح الخلايا الفيبرين والخلايا النووية متعددة الأشكال داخل الجزر البشرية المزروعة.ستولد زراعة الجزر داخل الكبد ثقبا كبيرا في الوريد البابي قد يسبب نزيفا. يمكن أن يؤدي استخدام إجراءين محسنين إلى منع النزيف وتقليل الوفيات بعد زرع الجزر. يمكن لنموذج زرع الجزر داخل البوابة أن يحاكي زراعة الجزر البشرية السريرية.يمكن أن تؤدي إجراءاتنا المكررة إلى ارتفاع معدلات البقاء على قيد الحياة للمتلقين ، مما يسمح بإجراء مزيد من الدراسة لوظيفة الجزيرة بعد الزرع.

minimizing-post-infusion-portal-vein-bleeding-during-intrahepatic

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

يصف هذا الفيديو إجراء جراحيا لتوصيل خلايا ورم الثدي إلى كبد الفئران عن طريق حقن الوريد البابي. يسمح هذا النموذج بالتحقيق في المراحل المتأخرة من ورم خبيث في الكبد.

حقن الوريد البابي: طريقة لدراسة ورم خبيث سرطاني في الكبد

في هذا الفيديو ، نصف إجراء لحقن خلايا جزيرة البنكرياس في الوريد البابي الكبدي ، متبوعا بتطبيق رغوة الجل لمنع النزيف بنجاح. يعد نزيف ما بعد الجراحة سببا شائعا لارتفاع معدل الوفيات أثناء زرع الجزيرات.

نموذج الفئران لزرع الجزر: طريقة جراحية لحقن جزر البنكرياس في الوريد البابي والوقاية من نزيف ما بعد الجراحة

تتطلب  الأدوات المستخدمة لتصور تجديد الأوعية الدموية طرقا لتباين أشجار الأوعية الدموية. أظهر هذا الفيلم تقنية حقن دقيقة تستخدم لتحقيق التباين الأمثل لأشجار الأوعية الدموية وتوضيح الفوائد المحتملة الناتجة عن التحليل التفصيلي للعينة الناتجة باستخدام μCT والمقاطع التسلسلية النسيجية.

التصور الأوعية الدموية ومتني التجديد بعد استئصال الكبد الجزئي 70٪ في الفئران العادية

هذا البروتوكول يوضح الفئران العزلة جزيرة والبذر على سقالة ديسيلولاريزد. تم زرع الجزر التي تدعم سقالة في لوحة الدهون البربخ من ستريبتوزوتوسين (ستز) التي يسببها الفئران السكري. نجت الجزر في موقع الزرع وعكست حالة فرط سكر الدم.

تدعمه سقالة زرع الجزر في سادة الدهون البربخ من الفئران السكري

يتم عرض طريقة لزرع أومينتال من الجزر الصغيرة في ماوس. الجزر الصغيرة المعزولة مختلطة مع المائية ويوضع الخليط داخل الحقيبة أومينتال بالماوس السكري. ثم يتم رصد الجلوكوز في الدم، وإجراء التحليل المناعية histochemical.

طريقة لزرع جزيرة ليلى إلى الثرب في الماوس

زرع البنكرياس جزيرة ليلى وسيلة لتحقيق نورموجليسيميا في مرض السكري من النوع 1. تركز هذه المقالة على تقنية زرع الأعضاء من خلال توجيه إينترابورتال للحفاظ على مستويات السكر العادي في الفئران السكري.

إينترابورتال زرع جزيرات البنكرياس في طراز الماوس

في هذا البروتوكول ، يتم وصف طريقة عزل الجزر التورانية وزرعها في الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الجلدية. يتم زرع الجزر التورينية المعزولة في متلقي المورين باستخدام هيدروجيل غشاء الطابق السفلي. يتم مراقبة مستوى السكر في الدم من المتلقين، ويتم إجراء تحليل الأنسجة من الطعوم السبوة.

الاعلية الجلدية الجلدية الأنسجة الدهنية البيضاء (ISWAT) نموذج زرع الجزر المورين

والهدف من هذا البروتوكول هو رصد مستمر لديناميات عملية صيد الجزر البنكرياسية البشرية والبلدان المضيفة المساهمة مقابل الخلايا المانحة. ويتم ذلك عن طريق زرع الجزر البشرية في الغرفة الأمامية للعين (ACE) من NOD. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-المتلقي الماوس تليها تكرار 2-فوتون التصوير.

الطولية في التصوير فيفو و الكم من تطعيم جزيرة البنكرياس الإنسان والخلايا المضيفة المساهمة في غرفة العين الأمامية

يصف البروتوكول طريقة مباشرة لاستئصال كبد الفأر السليم للدراسات الأيضية من خلال تروية الوريد البابي.

السابقين فيفو التروية الكبدية من خلال الوريد البابي في الماوس

يعد تصفية الأنسولين الكبدي أمرا بالغ الأهمية لتنظيم توازن الجلوكوز. توضح هذه المقالة إجراء سهل الاستخدام للتروية الكبدية لتقييم معدل تصفية الأنسولين الكبدي في الموقع مباشرة في الفئران.

تقييم تصفية الأنسولين في الفئران عن طريق نضح الكبد في الموقع

هنا ، نقدم تفاصيل حول إجراء إفراز الأنسولين المحفز بالجلوكوز (GSIS) عن طريق التروية من خلال الأوعية الدموية للفئران مع بنكرياس سليم كتقنية إضافية لتقييم وظيفة البنكرياس الغدد الصماء مع تقليل العوامل المربكة المحتملة.

إفراز الأنسولين المحفز بالجلوكوز عن طريق التروية من خلال الأوعية الدموية للفئران مع البنكرياس السليم

اكتشف تقنيات جراحية محسّنة لزراعة جزر لانغرهانس داخل الوريد البابي في الفئران. تمنع هذه الطرق النزيف الناتج عن الزراعة وتقلل الوفيات، مما يعزز أبحاث أمراض الكبد والسرطان.

تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران

استكشف المزيد من الفيديوهات