نظام تصوير عالي الوضوح قابل للتعديل للدراسات السلوكية للبالغين Drosophila

نظرا لحجمها محرجا، Drosophila من الصعب الصورة. توضح هذه الطريقة تصوير سلوك الذباب ومورفولوجياه من خلال استخدام مجهر ستيريو. ويمكن استخدام هذا البروتوكول للبحث العلمي والتدريس.

إثبات الإجراء سيكون Ms.Li تونغ والسيدة وينغ يوجيا، الطلاب الجامعيين القيام بالتدريب البحثي تحت إشرافي. للبدء، وجعل غرفة مراقبة سلوك الذبابة، أو FBOC، وذلك باستخدام غطاء زجاجة بلاستيكية شفافة من حوالي 17 في 22 ملليمتر أو عن طريق قطع قسم من 17 ملليمتر من نهاية سميكة من طرف ماصة خمسة ملليلتر. صب 1٪ أجار في بنك الشعب الصيني لضبط عمقه.

إذا كان الطعام يحتاج إلى وضع في بنك الشعب الصيني، صب أغار للحصول على عمق 12 ملليمتر. إذا كان الطعام لا يحتاج إلى وضعه في بنك الفقار، صب أغار إلى عمق خمسة ملليمترات لتتبع مكان وجود ذباب الفاكهة بسهولة أكبر. إذا كنت تستخدم طرف ماصة لجعل FBOC، ضع مقطع تلميح ماصة قطع في طبق بيتري 35 أو 60 ملليمتر.

صب هلام 1٪agar في طبق بيتري إلى سمك حوالي خمسة ملليمترات وانتظر أجار لترسيخ وختم الجزء السفلي من FBOC. ثم صب هلام أجار في FBOC إلى سمك المطلوب. جعل قاعدة بنك الشعب الصيني عن طريق مملة حفرة عميقة 10 ملليمتر في وسط قطعة من ورقة رغوة الإيثيلامين مع نفس القطر كما FBOC.

أدخل بنك FBOC في الحفرة. جعل يطير الغذاء إذا لزم الأمر مع الخميرة المتوسطة، والنظام الغذائي الاصطناعي، أو السكروز النقي أو الجلوكوز، اعتمادا على الغرض من الملاحظة. لتحديد بصريا ما إذا كان الذباب يتغذى، إضافة الأصباغ الغذائية إلى الغذاء إلى تركيز النهائي من 12.5 ملليغرام لكل 100 ملليلتر.

صب الطعام المعد في طبق بيتري إلى ارتفاع ثمانية ملليمترات. بعد التجسيد، ضع الطعام على مستطيل مرسوم على الورق وقطع الطعام وفقا لذلك ووضعه على قطعة من البلاستيك وقطعه إلى هرم رباعي الزوايا أو هرم فروستوم رباعي الزوايا للسماح بتسجيل سلوك الذباب من زوايا مختلفة حيث يهبط الذباب على الطعام. قطع قطعة من البلاستيك واستخدام ملاقط لوضع البلاستيك والغذاء في وسط FBOC.

صب هلام 1٪ أجار في زجاجة فارغة نظيفة إلى سمك 1-2 سم ووضعه في درجة حرارة الغرفة لمدة 1-2 ساعة. نقل الذباب إلى الزجاجة ووضعه في 25 درجة مئوية لمدة 36 ساعة أو أكثر. البرد وتعطيل الذباب في الجليد سحقت، وفرزها على كيس من الجليد ونقلها إلى FBOC كما هو موضح سابقا.

بعد نقل الذباب إلى FBOC ، قم بتغطيته ب 30-40 ملليمترا من الأشعة فوق البنفسجية أو فلتر واضح للكاميرا لتشكيل مجمع FBOC. ضع مجمع FBOC تحت المجهر الاستريو للمراقبة. إلقاء الضوء على بنك الشعب الصيني.

جبل أضواء الفيديو LED مصغرة لوميض حامل الأحذية الساخنة تقف ووضع الأضواء على الجانبين الأيسر والأيمن من FBOC. بدوره على الاضواء وتعيين درجة حرارة اللون إلى 5، 000 إلى 5، 600 كلفن والسطوع إلى 100٪ بدوره على أضواء الفيديو LED وضبط المجهر التكبير ستيريو حتى حافة FBOC يمكن أن ينظر إليها بوضوح بالعين المجردة. نقل بنك الشعب الصيني إلى وسط مجال الرؤية.

إرفاق المشبك من محول الكاميرا الرقمية التلسكوب العالمي إلى العدسة من المجهر ستيريو. ثم إرفاق كاميرا رقمية مدمجة إلى محول بشكل آمن عن طريق تحويل بالتناوب المسمار تركيب الكاميرا والكاميرا إصلاح المسمار. قم بتشغيل الكاميرا الرقمية ثم قم بتشغيل مقابض الضبط الأفقية/الرأسية حتى تظهر حافة FBOC بوضوح في وسط مجال الرؤية الدائري الساطع على شاشة LCD الخاصة بالكاميرا.

تدوير قرص الوضع إلى وضع تلقائي ذي أولوية الفتحة. اضغط على وضع التركيز البؤري على محدد متعدد، واختر الماكرو عن قرب ثم اضغط على الزر موافق. حرك مفتاح التكبير/التصغير من نهاية الزاوية الواسعة إلى النهاية المقربة وازوم الصورة الدائرية حتى يملأ الجزء المركزي منها شاشة LCD الكاملة.

اضغط على زر تسجيل الفيلم وابدأ في تسجيل سلوك الطيران. بدوره مقبض التركيز من المجهر حتى الذباب في FBOC مرئية بوضوح. اختر سلوك الطيران الذي يهم الملاحظة أو تسجيل الفيديو.

بدوره مقبض التكبير والتصغير للتكبير والتصغير لتحقيق التكبير المطلوب للمراقبة أو تسجيل الفيديو. الصورة التمثيلية التي التقطت من خلال فلتر الأشعة فوق البنفسجية واضحة وحادة ، تشبه إلى حد كبير الصورة التي التقطت عندما لا يتم تغطية قارورة الثقافة. نوعية الصورة التي اتخذت من خلال الزجاج من طبق بيتري سيئة للغاية وغير واضحة جزئيا.

تظهر هنا صورة مأخوذة من تسجيل الفيديو تظهر تفاصيل كل جزء من جسم الذبابة. نظرا لأن الكاميرا متصلة بمجهر استريو التكبير، فمن السهل جدا التصوير من الصور البانورامية إلى لقطات عن قرب باستخدام نظام التكبير/ التصغير. باستخدام هذا البروتوكول، يمكن ملاحظة سلوك الطيران وتوثيقه لزوايا عرض متعددة.

على سبيل المثال ، تقوم الذبابة الأنثوية بفرك ovipositor باستمرار بساقيها الخلفيتين أثناء عملية وضع البيض. لا يمكن رؤية هذه التفاصيل من سلوك وضع البيض بوضوح من الجانب. باستخدام هذه الطريقة البسيطة والاقتصادية ، يمكننا التقاط صورة بانورامية أو عن قرب لسلوك ومورفولوجيا الذباب والحصول على فيديو أو صورة ذات نوعية جيدة.