تطوير قطاع كروماتوغرافي للتدفق الجانبي للكشف السريع والكمي عن مركبات الجزيئات الصغيرة

يصف الإجراء إعداد الذهب الغرواني وتجميع الشرائط الكروماتوغرافية المناعية. أولا، تم استخدام حمض الكلورواريك وسيترات الصوديوم لتركيب الذهب الغرواني. تمت إضافة سيترات الصوديوم إلى محلول حمض الكلورواريك وغليه للحصول على الذهب الغرواني مع حجم الجسيمات المناسبة.

التوليف، والأجسام المضادة الذهب الغروانية المصاحبة. بعد الطرد المركزي، تم إذابة جزيئات الذهب الغرواني في محلول مناسب ثم أعيد إنفاقها للحصول على محلول ذهبي غروي. غمر غشاء الألياف الزجاجية في اقتران لإعداد لوحة اقتران.

إسقاط مستضد اصطناعي وأجسام مضادة ثانوية على غشاء NC كخط T وخط C. إرفاق غشاء NC، الغشاء الماصة، لوحة عينة، وغشاء الألياف الزجاجية في المجلس PVC على التوالي. قطع لوحة الورق المجمعة إلى شريط بعرض 3.5 ملليمتر.

Confect كامل في المئة محلول حمض كلوريد الذهب و 1٪ محلول سيترات الصوديوم على التوالي. بدوره على stirrer المغناطيسي ووضع القارورة على خلاط. أضف 120 ملليلتر من الماء المقطر إلى قارورة مستديرة القاع واسخنيها حتى تغلي على ستيرر المغناطيسي الحراري.

الحفاظ على الغليان وسريعة إضافة 0.5 ملليلتر من حمض الكلورواريك كامل في المئة وخمسة ملليلتر من سيترات الصوديوم 1٪. استمر في التسخين لمدة خمس إلى عشر دقائق. مراقبة لون الحل تغيير من الأصفر الشاحب إلى النبيذ الأحمر.

إيقاف قوة خلاط الحرارة المغناطيسي، بارد لدرجة حرارة الغرفة ومكان الخليط في زجاجة نظيفة. يخزن في أربع درجة مئوية. تظهر الجسيمات النانوية الذهبية تأثير Tyndall.

تم تحديد حجم ومورفولوجيا الجسيمات النانوية الذهبية من خلال التحليل الطيفي فوق البنفسجي وتصوير المجهر الإلكتروني. إضافة 100 ميكرولتر محلول كلوريد الصوديوم إلى ثمانية أنابيب. ضبط حلول الذهب الغروانية إلى درجة الحموضة 5 إلى 12 باستخدام 0.1 مول لكل لتر كربونات البوتاسيوم.

إضافة 100 ميكرولتر من محلول الذهب الغرواني إلى ثمانية أنابيب تحتوي على كلوريد الصوديوم. الوقوف بعد عدة دقائق من المزج. مراقبة تغيير لون كل حل أنبوب وتسجيل الأنبوب الذي لا يزال أحمر.

اختر قيمة درجة الحموضة بأقل كمية من كربونات البوتاسيوم المضافة ولون محلول مستقر كقيمة درجة الحموضة المثلى لإعداد اقتران. تكييف نفس النهج. لاحظ تغير اللون وتسجيل الأنبوب الذي لا يزال أحمر.

اختيار كمية الأجسام المضادة مع أدنى تركيز من mAB ولون حل مستقر ككمية mAB الأمثل. خذ 10 ملليلتر حل الذهب الغرواني واستخدام 0.1 مول لكل لتر كربونات البوتاسيوم لضبط الحل لقيمة درجة الحموضة الأمثل. أضف ببطء مركبات ثنائي الفينيل متعددة المستويات SSD مع التركيز المناسب وهز في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.

طرد مركزي الخليط في 2000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة في أربع درجة مئوية. إزالة الترسبات التي تحتوي على شوائب الذهب الغرواني المعجل. طارد مركزي الخليط في 10، 000 دورة في الدقيقة لمدة 40 دقيقة.

تجاهل الناتنات الفائق. الراسب هو الذهب الغرواني mAB اقتران. إضافة حمض الهيدروكلوريك تريس، BSA، توين 20، و PEG 20، 000، ثم مزيج جيدا لإعداد العازلة إعادة الإنفاق.

إضافة المخزن المؤقت لإعادة الإنفاق وتفكيك الراسب. قطاع مواد الغشاء، بما في ذلك غشاء السليلوز الزجاجي، غشاء البوليستر السليلوز، ومجلس PVC. المواد الغشاء، تحتاج إلى تتبع وتقييم بواسطة المجهر العقيم للتخلص من التجانس.

أولا، ضع غشاء NC على لوحة PVC على بعد سنتيمترين من حافة الجزء نهاية اللوحة. ثانيا، إسقاط اثنين ملليغرام لكل ملليلتر SSD-BSA على غشاء NC في سنتيمترين من الحافة العليا كخط اختبار وإسقاط 1.5 ملليغرام لكل ملليلتر الذهب المضادة للفأرة IgG على غشاء NC في سنتيمترين من الحافة السفلى كخط التحكم. إرفاق لوحة ماصة إلى ورقة PVC فوق غشاء NC وتتداخل مع غشاء NC من قبل ملليمترين.

تقليم غشاء الألياف الزجاجية إلى خمسة سنتيمترات طويلة وسنتيمترين واسعة واستخدامها كوسادة مترافقة. غمر غشاء الألياف الزجاجية في الجسيمات النانوية الذهبية mAB الموازة الحل. نقع لفترة من الوقت لجعل امتصاص الجسيمات النانوية الذهب mAB.

جفف الغشاء الواسع في الحاضنة عند 37 درجة. لصق وسادة اقتران المعالجة مسبقا تحت غشاء NC وينبغي أن يكون طول متداخلة مع غشاء NC 0.1 سم. تقليم غشاء Fusion3 إلى 1.8 سم طويلة و 3.5 سم واسعة واستخدامها كوسادة العينة.

ثم ضع لوحة العينة على لوحة PVC وتداخل مع لوحة اقتران بمقدار ملليمترين. قطع، وتجميع لوحة الورق إلى شرائح 3.5 ملليمتر واسعة باستخدام آلة القطع وصغيرة الحجم باستخدام نظام صفح دفعة. وأخيرا، ضع شرائط الاختبار في القشرة.

ختم لهم في كيس رقائق الألومنيوم التي تحتوي على المجففة والمخزن بعيدا عن الضوء. يتم تجميع ICS الآن. إسقاط 50 ميكرولتر من محلول العينة على ثقب العينة لمراقبة عملية الكروماتوغرافيا.

بعد ذلك ، قم بتحليل الشرائط باستخدام قارئ شريط محمول. يمكن للجهاز توفير نسبة خط الاختبار إلى خط التحكم. تقييم خصوصية اختبار ICS وحساسيته وقابليته للتكرار واستقراره.

تمت قراءة حلول الذهب الغروانية المعدة. وكشفت تحليلات المجهر الإلكتروني انتقال أن الجسيمات كانت متعددة الهد في الشكل ووزعت بشكل موحد مع قطر متوسط 14 نانومتر. وأظهرت صور المجهر الإلكتروني عالية الدقة انتقال نمط هامش مستمر مع تباعد 0.117 نانومتر من الجسيمات النانوية الذهب.

وأشار امتصاص الأشعة فوق البنفسجية المرئية إلى أنه يمكن الحصول على أحجام مختلفة من جزيئات الذهب الغروانية عن طريق تغيير نسبة الصوديوم سيترات وحمض الكلورواريك. في التجربة الكمية ، تم مسح الشرائط مع نتائج اختبار saikosaponin D باستخدام قارئ ICS محمول. قمنا بحساب منحنى قياسي من خلال ربط عدم تركيزات سايكوسابوين D بالاستيعاب المقابل في كل تركيز.

بعد التحقيق المنهجي ، يمكن تطبيق الطريقة للكشف الكمي وشبه النوعي لمركبات الجزيئات الصغيرة. ويشمل هذا الإجراء إعداد الذهب الغرواني، وتركيب الجسيمات النانوية الذهبية mAB اقتران، وتجميع الشريط والتحقيق المنهجي. يوفر هذا العمل بروتوكول مفصل لتطوير الشريط المناعي اللوني لاستخدامه في الكشف السريع والكمي للجزيء الصغير.

بعد مشاهدة هذا الفيديو وآمل أن يكون لديك فهم جيد لإعداد الشريط immunochromatographic. شكرا لكم على المشاهدة وحظا سعيدا لتجاربكم.