فحص سلوكي للنوبات الناجمة عن الحرارة في نماذج الفئران من الصرع

الهدف من هذه الطريقة هو فحص ارتفاع الحرارة أو النوبات الناجمة عن الحرارة في نماذج الفئران. يصف البروتوكول استخدام غرفة مبنية خصيصا مع مراقبة مستمرة لدرجة حرارة الجسم لتحديد ما إذا كانت درجة حرارة الجسم المرتفعة تؤدي إلى نوبات.

تسبب طفرات GEFS + نوبات حموية لدى المرضى. تسمح لنا القدرة على دراسة النوبات الناجمة عن انخفاض حرارة الجسم في الفئران GEFS + بفحص العلاقة بين طفرات محددة وملف تعريف النوبات. تساعد وحدة التحكم الرقمية في درجة الحرارة على ضبط تدرج درجة الحرارة في صندوق التسخين بطريقة قابلة للتكرار.

وبالتالي ، يمكن زيادة درجة حرارة جسم الماوس بمعدل بطيء وثابت. يمكن استخدام هذا البروتوكول لتحديد العلاجات المحتملة، مثل الأدوية أو القيود الغذائية، التي يمكن استخدامها لتقليل النوبات الحموية أو القضاء عليها. لإدخال مسبار درجة حرارة المستقيم في الماوس دون إصابة، نوصي بتخدير الماوس لفترة وجيزة، وتليين طرف مسبار المستقيم.

ابدأ بتشغيل غرفة حرارة الماوس باستخدام زر التشغيل ثم اضغط على زر تشغيل الحرارة. باستخدام لوحة المفاتيح الموجودة على وحدة التحكم الرقمية في درجة الحرارة ، اضبط درجة حرارة غرفة الحرارة على 50 درجة مئوية. خط أرضية غرفة الحرارة مع فراش قطعة خبز.

قم بتركيب كاميرا تسجيل فيديو أمام غرفة الحرارة. قم بتبطين طبق بتري قطره 140 ملم بطبقات سميكة من المناديل الورقية وضعه على الجليد ليكون بمثابة وسادة تبريد. لفحص الفحص ، تأكد من أن وزن جسم الماوس هو 15 جراما أو أكثر.

قبل البدء في الإجراء ، تأكد من أن الماوس مخدر بالكامل باستخدام قرصة إصبع القدم. قم بتغطية الطرف المعدني لمسبار درجة حرارة المستقيم بمادة تشحيم وأدخله بلطف في الماوس. قم بتأمين مسبار المستقيم على ذيل الماوس باستخدام شريط.

ضع الماوس في قفص استرداد جديد مبطن بفراش قطعة خبز. ابدأ تشغيل مؤقت وراقب الماوس لمدة خمس دقائق أثناء مراقبة درجة حرارة الجسم الأساسية ، حتى يتعافى الماوس تماما من التخدير وتستقر درجة الحرارة عند 35 إلى 36 درجة مئوية. في نهاية خمس دقائق ، لاحظ درجة حرارة جسم الماوس كدرجة حرارة الجسم الأولية عند دقيقة الصفر.

انقل الماوس بسرعة إلى أرضية غرفة حرارة الماوس المسخنة مسبقا لبدء تجربة التجربة. بعد وضع الماوس في غرفة الماوس المسخنة مسبقا ، ابدأ تشغيل الكاميرا وساعة التوقيت ، وقم بزيادة درجة حرارة غرفة الحرارة على فترات منتظمة ، بحيث تزداد درجة حرارة جسم الماوس بمعدل 25 ، 2.5 درجة مئوية في الدقيقة. ابدأ في تسجيل درجة حرارة جسم الماوس على فترات دقيقة واحدة طوال مدة التجربة.

في 9.5 دقيقة ، اضبط درجة حرارة غرفة الحرارة على 55 درجة مئوية لتحقيق الاستقرار في درجة حرارة غرفة الحرارة عند 55 درجة مئوية بحلول الدقيقة 10. وبالمثل تحقيق درجة حرارة مستقرة من غرفة الحرارة إلى 60 درجة مئوية بحلول الدقيقة 20. تستمر كل تجربة فحص النوبات لمدة 30 دقيقة.

إذا تعرض الفأر لنوبة، فقم بتسجيل درجة حرارة جسم الفأر أثناء النوبة، كدرجة حرارة عتبة النوبة. لاحظ خصائص سلوك النوبة التي يعرضها الماوس ، ثم التقط الماوس بسرعة من الغرفة وضعه على لوحة التبريد. إذا لم يتعرض الفأر لنوبات ناجمة عن الحرارة خلال فترة المراقبة التي تبلغ 30 دقيقة ، أو وصلت درجة حرارة جسم الماوس إلى 44 درجة مئوية ، فضع الماوس على لوحة التبريد.

عندما تنخفض درجة حرارة جسم الماوس إلى 36 إلى 37 درجة مئوية ، انقل الماوس إلى قفص الاسترداد. لإزالة مسبار المستقيم من الماوس ، قم بقطع الشريط بعناية بين ذيل الماوس وسلك مسبار المستقيم. مسح وتنظيف الطرف المعدني من مسبار المستقيم مع 70 ٪ من الإيثانول.

راقب الماوس حتى يتعافى قبل إعادته إلى القفص المنزلي. استمر في مراقبة حالة الماوس. ضع علامة على نهاية التجربة التجريبية.

أعد ضبط درجة حرارة غرفة حرارة الماوس إلى 50 درجة مئوية واسمح لها بالتوازن قبل الفحص التالي. في فحص الاستيلاء على الحرارة ، تم تسجيل متوسط درجة حرارة جسم الفئران كل دقيقة باستخدام بروتوكول التسخين ، وتم تقييم معدل تغير درجة حرارة الجسم بمرور الوقت. لم يكن هناك فرق في معدل تغير درجة حرارة الجسم بين الفئران المتحورة غير المتجانسة والفئران من النوع البري ، في الخلفيات الجينية المعنية.

أظهرت المجموعات التجريبية والضابطة من الفئران سلوكا مختلفا عند تعرضها لزيادة دورية في درجة حرارة الجسم. أظهرت جميع الفئران المتحولة غير المتجانسة من الخلفيات الجينية 129X1 أو B6NJ نوبات ناجمة عن الحرارة. لم يتعرض أي من الفئران من النوع البري في الخلفية المخصبة 129X1 لنوبات ، في حين أن ثلث الفئران فقط من خلفية B6NJ الحساسة للنوبات أظهرت نوبات.

لم يكن متوسط درجة حرارة عتبة النوبة للفئران المتحولة 129X1 مختلفا اختلافا كبيرا عن متوسط درجة حرارة عتبة النوبة التي شوهدت في الفئران B6NJ. ثلث الفئران البرية من النوع B6NJ التي أظهرت نوبات ناجمة عن الحرارة ، كانت درجة حرارة عتبة النوبة أعلى بكثير من الفئران المتحولة غير المتجانسة B6NJ. تم قياس شدة النوبات باستخدام مقياس راسين المعدل.

لم تكن درجة راسين القصوى للفئران المتحولة غير المتجانسة في الخلفية المخصبة 129X1 مختلفة اختلافا كبيرا عن الفئران المتحولة غير المتجانسة في الخلفية الجينية B6NJ. أثناء إعداد بروتوكول التسخين ، يرجى التأكد من أن درجة حرارة جسم الفأر لا تزيد بمعدل أسرع من 25 درجة مئوية في الدقيقة ، أو يمكن أن تكون ضارة بصحة الحيوان. سيكون من الرائع جدا الجمع بين بروتوكول التسخين وتسجيلات EEG المتزامنة ، والتي من شأنها أن تسمح لنا بربط أنماط مختلفة من نشاط الدماغ بأنواع مختلفة من سلوك النوبات.