تحفيز الجافية واختبار فون فراي حول الحجاج في الفئران كنموذج قبل سريري للصداع

ما هي الأحداث التي تحدث داخل السحايا التي تساهم في الصداع في غياب إصابة الأنسجة؟ على عكس الاستخدام السابق لنماذج التحفيز الجافية في الفئران ، فإنه يسمح باستخدام كتالوج واسع النطاق من الفئران المعدلة وراثيا. سيكون الصراع الأساسي هو تحديد موقع تقاطع الغرز اللامدوئيدية والسهمية عن طريق ملامسة الجمجمة مع الحاقن.

للبدء ، قم بإنشاء منقوع الماوس عن طريق تعديل قنية داخلية متاحة تجاريا وغرس مع غطاء بلاستيكي سيليكا منصهر قابل للتعديل ويتم إدخاله في قنية دليل قياس 28. استخدم الفرجار لضبط غطاء السيليكا البلاستيكي المنصهر على المنفوخ دون ثني المنقوع. اضبط جهاز التنقيط على طول 6 ملليمترات تم قياسه من طرف المضخم إلى حافة الغطاء البلاستيكي للسيليكا.

قم بإجراء حقن تجريبية لسلالات الماوس الأخرى واضبط الطول للحقن بدقة في الأم الجافية. ثم ، قم بتوصيل الطرف الطويل من المنقوع بأنابيب بلاستيكية من ثماني بوصات أو أكثر لاستيعاب حجم خمسة ميكرولترات. أدخل الأنبوب مع ضمان التغطية الكاملة للجزء المعدني والجزء العلوي من السدادة البلاستيكية الموجودة على جهاز النفخ لمنع تراكم فقاعات الهواء في الخط.

بعد ذلك ، املأ المحقنة الدقيقة وأرفق الطرف الآخر من الأنبوب بحقنة زجاجية صغيرة سعة 10 ميكرولتر ، مما يضمن الختم الضيق على الجزء المعدني من المحقنة. بعد ذلك ، ردم المحقنة بخمسة ميكرولترات من PBS أو السائل الخلالي الاصطناعي أو المركبات الأخرى المفضلة لمنع تكوين فقاعة الهواء. إذا لزم الأمر ، قم بإغراق الخط بالسيارة لتبديد الفقاعات مسبقة التشكيل.

بدلا من ذلك ، املأ المحقنة مسبقا ، وبعد الاتصال ، ادفع السائل عبر الخط المتصل. بمجرد أن يعمل الخط المملوء بالسيارة بكفاءة ، قم بتحميل خمسة ميكرولترات من المحلول في حقنة هاميلتون. بمجرد تخدير الفأر بالكامل ، ضع مرهما معقما للعيون على العينين وحلق رأس الحيوان ، ثم قم بتطهير الجلد بيود البوفيدون والإيثانول.

ثبت رأس الحيوان بيد واحدة وأمسك المحقق بالحقنة المحملة بالمخدرات في اليد الأخرى. ثم ، باستخدام منقوع ، قم بالتحقيق بعناية وتحديد موقع والتحقق من تقاطع الغرز السهمية و lambdoidal على جمجمة الماوس. بمجرد تحديد موقع الخيط ووجود جهاز النفخ في مكانه ، قم بتحريك جهاز infuser ببطء وبلطف ذهابا وإيابا حتى يخترق المنقوع في الجلد ويسقط في التقاطع على طول الطريق حتى السدادة البلاستيكية ، مما يضمن إدخال طرف infuser بالكامل بحجم 6 ملليمترات في التقاطع.

ثم ، ادفع ببطء مكبس المحقنة لطرد خمسة ميكرولترات من السوائل إلى الأم الجافية. في يوم الاختبار ، بعد التأقلم مع الغرفة ، قم بإزالة ماوس واحد مع الكأس من الغرفة المعنية. حافظ على الكوب في الوضع الأفقي لوزن الجسم الموزع بالتساوي ، لأن توزيع الوزن غير المتكافئ قد يغير أو يمنع استجابة الحيوانات.

ضع الكوب مع الماوس على وسادة ماصة محفوظة على الطاولة أسفل رف الاختبار. ثم، لاختبار فون فراي حول الحجاج، ضع خيوط فون فراي التي يبلغ وزنها 07 جرامات في وسط الوجه بين العينين واضغط ضغطا كافيا على الخيوط للتسبب في انحناء شعر فون فراي إلى تشكيل على شكل حرف C. حافظ على اتصال الخيوط لمدة ثلاث إلى خمس ثوان تقريبا أو حتى يسحب الماوس الخيوط باستخدام الرأس أو الكفوف.

لاتباع طريقة ديكسون من أعلى إلى أسفل، قم بتطبيق الخيط التالي الأقل وزنا إذا كان الماوس يستجيب للخيوط، وإلا، قم بتطبيق خيوط أعلى وزنا. تم استخدام الإجراء لفحص آثار البرولاكتين الجافية على فرط الحساسية الميكانيكية للوجه. أظهرت نتائج الدراسة انخفاضا كبيرا في عتبات انسحاب الوجه لدى إناث الفئران ICR استجابة لخمسة ميكروغرامات من البرولاكتين الجافية.

كما أظهرت جرعة أقل بمقدار عشرة أضعاف من 5 ميكروغرام من البرولاكتين انخفاض عتبات سحب الوجه ، على غرار جرعة عالية من البرولاكتين. أنتجت حقن البرولاكتين سلوكيات عفوية مرتبطة بالألم ، والتي تم تقييمها عن طريق الكآبة. تسبب Dural 5 micrograms من البرولاكتين في تجهم كبير في الفئران الإناث وأظهر دورا واضحا للبرولاكتين الجافية في السلوكيات الشبيهة بالصداع النصفي للإناث الاختبار السلوكي باستخدام خيوط فون فراي أو كآبة الوجه لتحديد ما إذا كان الحافز ، في حالة عدم وجود إصابة ، يسبب استجابة للصداع.

يمكن الآن استخدام هذه التقنية للتحقيق في الآليات القائمة على الالتهابات في السحايا دون القلق بشأن المحاذير التي تسببها عمليات استئصال القحف والالتهاب اللاحق.