فحص خلوي قائم على المراسل لمراقبة كفاءة الربط
2.8K مشاهدة
•
استشهد بها 4
•
08:53 دقيقة
•
سبتمبر 15, 2021
سبتمبر 15, 2021
•يصف هذا البروتوكول فحصا لمراسل minigene لمراقبة تأثير طفرات موقع 5'-splice على الربط ويطور مثبط U1 snRNA لإنقاذ تثبيط الربط الناجم عن الطفرة. يتم التعبير عن بنى المراسل والمثبط U1 snRNA في خلايا HeLa ، ويتم تحليل الربط عن طريق تمديد التمهيدي أو RT-PCR.
Chapters in this video
0:04
Introduction
0:31
Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
2:00
32P-Labeling of Oligonucleotides
2:52
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
3:53
Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
5:08
Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
5:38
Setup and Running of Urea-PAGE Gels
6:27
Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
8:09
Conclusion
Related Videos
حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.