فحص خلوي قائم على المراسل لمراقبة كفاءة الربط

2.7K مشاهدة

استشهد بها 4

08:53 دقيقة

سبتمبر 15, 2021

10.3791/63014-v

سبتمبر 15, 2021

2.7K مشاهدة

يصف هذا البروتوكول فحصا لمراسل minigene لمراقبة تأثير طفرات موقع 5'-splice على الربط ويطور مثبط U1 snRNA لإنقاذ تثبيط الربط الناجم عن الطفرة. يتم التعبير عن بنى المراسل والمثبط U1 snRNA في خلايا HeLa ، ويتم تحليل الربط عن طريق تمديد التمهيدي أو RT-PCR.

استكشف المزيد من الفيديوهات

U1 Hela

Chapters in this video

0:04

Introduction

0:31

Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids

2:00

32P-Labeling of Oligonucleotides

2:52

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension

3:53

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR

5:08

Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR

5:38

Setup and Running of Urea-PAGE Gels

6:27

Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs

8:09

Conclusion

Related Videos