إنشاء نموذج التهاب البنكرياس الحاد الوخيم للفأر باستخدام الحقن الرجعي لتاوروكولات الصوديوم في القناة الصفراوية البنكرياسية

الهدف العام من هذا الفيديو هو إنشاء نموذج فأر لالتهاب البنكرياس الحاد من خلال الحقن الرجعي لتاوروكولات الصوديوم في القناة الصفراوية البنكرياسية. تمت الموافقة على جميع التجارب التي شملت الحيوانات من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة سوشو. تم إجراء جميع العمليات الجراحية تحت التخدير الكامل.

لم يتم استخدام المسكنات من أجل عدم التدخل في المسار الطبيعي للمرض ، والذي أثبتته الأدبيات السابقة ووافقت عليه لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة سوشو. صوم الفأر قبل ثماني إلى 12 ساعة من الجراحة. تحضير مرشحات محلول توروكولات الصوديوم بنسبة 5٪ من خلال مرشح دقيق 0.22.

قم بتعقيم الأدوات والمواد الجراحية ، بما في ذلك الملقط والمقص وحامل الشفرة وحامل الإبرة ومشبك مرقئ الدم والمشابك الوعائية والستائر المعقمة. تم تعقيم المحقنة الدقيقة من خلال التشعيع. باستخدام الماوس ، قم بالحث على التخدير العام بالحقن داخل الصفاق لمحلول الصوديوم pentobarbital بنسبة 1٪ بجرعة 50 ملليغرام لكل كيلوغرام.

ثبت الماوس في وضع الاستلقاء على لوحة مسطحة من الرغوة المشععة باستخدام الشريط. قم بإزالة فرو الماوس باستخدام كريم إزالة الشعر من مستوى عملية الخناق وصولا إلى خط توصيل العمود الفقري الحرقفي العلوي الأمامي الثنائي ، مع الجانبين الأيسر والأيمن الموازي للخط الإبطي الأمامي. امسح الجلد مرتين إلى ثلاث مرات بنسبة 0.5٪ من اليودوفور واتركه يجف لمدة دقيقة إلى دقيقتين في كل مرة.

قم بتغطية الماوس بستائر معقمة. قطع طبقة الجلد المفتوحة ثم فتح تحت الجلد. قم بإجراء شق متوسط في البطن بطول سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات تقريبا.

حدد موقع الاثني عشر من اليسار إلى اليمين على طول المعدة. اسحب الاثني عشر برفق إلى الخارج وإلى الجانب الأيسر باستخدام ملقط جراحي وقطعة قطن منقوعة بمطهر لفضح البنكرياس والقناة الصفراوية البنكرياسية وحليمة الاثني عشر. استخدم 8-0 خيوط للمرور عبر الاتصال بين الاثني عشر والبنكرياس حول الحليمة ، وسحب خياطة إلى الجانب الأيسر من جسم الماوس لإصلاح الاثني عشر.

اسحب الجلد والحافة السفلية للكبد برفق جانبا. مشبك القناة الكبدية المشتركة. اخترق الحاقن الدقيق في القناة الصفراوية البنكرياسية البعيدة بأثر رجعي.

إصلاح طرف الإبرة بالقرب من حليمة الاثني عشر مع مشبك. غرس 10 ميكرولترات من توروكولات الصوديوم 5٪ في القناة الصفراوية البنكرياسية بمعدل 5 ميكرولترات في الدقيقة. حافظ على القناة الصفراوية البنكرياسية مغلقة لمدة 5 دقائق لتحقيق ضغط مستقر.

إزالة المشابك. اسحب الحاقن الدقيق ، وقم بإزالة المشبك الآخر وإصلاح الخياطة. استعادة الاثني عشر إلى الوضع التشريحي الأصلي والتحقق من النزيف.

أغلق الجرح ب 6-0 خيوط. إزالة الستارة المعقمة. تطهير الشق مع 0.5 ٪ يودوفور.

استعادة الحيوانات من التخدير على وسادة حرارية 37 درجة مئوية. إدارة 0.8 ملليلتر من 0.9٪ المالحة تحت الجلد لمكملات السوائل. في 24 ساعة بعد العملية ، قم بتخدير الماوس بالصوديوم البنتوباربيتال باستخدام نفس الجرعة وطريق الحقن.

جمع الدم كله من الشريان الأورطي البطني وتدور في 1،500 × غرام لمدة 15 دقيقة لعزل المصل للاختبار المصلي. جمع البنكرياس وأنسجة الرئة لتقييم الأنسجة. اغمر البنكرياس في محلول بارافورمالدهيد بنسبة 4٪ لمدة 24 ساعة.

تجفيف في سلسلة من تركيزات الكحول وتضمينها في البارافين. استخدم ميكروتوم لإعداد 5 أقسام أنسجة بنكرياس سميكة صغيرة. إجراء تلطيخ H & E للتقييم النسيجي للبنكرياس.

كانت الفئران غير نشطة قليلا وفقدت وزنها في 24 ساعة بعد العملية مقارنة بما قبل العملية. كانت معدلات البقاء على قيد الحياة لفئران التحكم و SAP 100٪ و 72.7٪ على التوالي ، بعد 72 ساعة من العملية. وفقا لنتائج تلطيخ H & E من أقسام البنكرياس ، يمكن ملاحظة النخر اللبلي لأنسجة البنكرياس في فئران SAP بينما لا يمكن العثور على تغييرات كبيرة في الفئران الضابطة.

علاوة على ذلك ، تم العثور على مستويات متزايدة بشكل كبير من الأميليز والليباز والبنكرياس ونشاط MPO الرئوي في الفئران SAP مقارنة بالفئران الضابطة. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على مستويات مرتفعة بشكل كبير من مؤشرات الكبد والكلى بما في ذلك ALT و AST و BUN والكرياتينين. باستخدام الحقن الرجعي لتاوروكولات الصوديوم في القناة الصفراوية البنكرياسية ، يمكن تحفيز التهاب البنكرياس الحاد الوخيم في الفئران.

التعرض الجيد للقناة الصفراوية البنكرياسية لضمان ثقب ناجح. أثناء الثقب ، تأكد من الزاوية والقوة المناسبتين لتجنب ثقب القناة الصفراوية البنكرياسية. نموذج SAP الناجم عن TC الذي تم وصفه هنا هو نموذج مناسب لدراسة الآليات المشاركة في التهاب البنكرياس الحاد الوخيم.

إنه نموذج اقتصادي يستخدم كواشف أقل تكلفة ويساعد هذا الفيديو في تدريب الجراح المبتدئ بشكل أسرع.