ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر بروتوكول حقن اليرقة

يعالج هذا البروتوكول الصعوبات والتحديات المتعلقة باليرقة المجهرية من خلال وصف طريقة دقيقة تسمح باستخدام يرقة ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر كنموذج لمختلف الدراسات المناعية والجزيئية. هذه تقنية حقن بسيطة تقدم طريقة فعالة وفعالة من حيث التكلفة وسريعة لتقديم مجموعة متنوعة من المواد بشكل متكرر بطريقة موحدة ، مما يسمح بنتائج متسقة وموثوقة. ابدأ باختيار يرقات المرحلة الثالثة من instar وغسلها بمحلول Ringer في طبق Petri صغير.

ضع ورقة تصفية في طبق بتري ورطبها ب 5 مل من محلول رينجر. ثم ضع اليرقات على ورقة التصفية. تحضير الشعيرات الدموية باستخدام أنابيب شعرية زجاجية 3.5 بوصة في مجتذب ماصة دقيقة.

افتح الشعيرات الدموية الزجاجية بمساعدة ملقط متوسط النقطة مسننة مستقيمة. املأ الشعيرات الدموية المفتوحة بالزيوت المعدنية باستخدام حقنة بلاستيكية يمكن التخلص منها. ثم ، أخرج الزيت من الأنبوب الشعري باستخدام حاقن نانولتر.

املأ الشعيرات الدموية بالتحضير البكتيري المطلوب للحقن. انقل اليرقات المخدرة إلى ورقة ترشيح مبللة بمحلول رينجر. باستخدام الملقط ، قم بتطبيق ضغط قوي على الجانب الظهري من الطرف الخلفي لليرقات ، حيث تكون اللولبيات القصبية الهوائية واضحة.

ثم ، أدخل الإبرة أفقيا ، نحو الطرف الخلفي من اليرقات ، وحقن المخزونات البكتيرية. إزالة ملقط لتجنب انسكاب الهيموليمف أو الأمعاء. ثم ، اسحب الإبرة التي تم إدخالها مسبقا في اليرقات.

إصابة 20 يرقات لكل حالة تجريبية. باستخدام فرشاة الطلاء ، انقل اليرقات المحقونة برفق إلى ورقة ترشيح رطبة منفصلة. أضف محلول Ringer حسب الضرورة لمنع الجفاف.

احتضن طبق بتري في حاضنة في 25 C.أظهرت يرقات ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر المصابة ب Photorhabdus asymbiotica معدل بقاء على قيد الحياة بنسبة 57٪ لمدة 24 ساعة بعد الحقن ، في حين أظهرت اليرقة التي تم حقنها بالإشريكية القولونية معدل بقاء على قيد الحياة بنسبة 85٪ في نفس النقطة الزمنية. تكمن أهمية هذه الطريقة في أن الإبرة يتم الاحتفاظ بها بالتوازي تقريبا مع اليرقات. الضغط المطبق لعقد اليرقة قليل جدا ، مما يقلل من إمكانية تسرب الهيموليمف ، أو الإصابة المميتة ، أو عدم كفاية تسليم المادة المطلوبة.

يمكن إتقان هذه التقنية مع الممارسة.