زرع RPE تحت الشبكية على حامل في الخنازير الصغيرة: إرشادات للاستعدادات قبل الجراحة والتقنيات الجراحية والرعاية بعد الجراحة

يعتبر التنكس البقعي المرتبط بالعمر أحد الأسباب الرئيسية لفقدان الرؤية المركزية. يعد الانحطاط التدريجي والخلل الوظيفي لطبقة RPE سمة مميزة للشكل المبكر من AMD. على الرغم من التقدم في علاج أمراض الشبكية ، لا يزال تطوير طريقة علاج فعالة يمثل تحديا.

أحد أكثر مفاهيم العلاج الواعدة هو استبدال RPE بخلايا RPE مستزرعة في المختبر من أصل مختلف. عادة ما يتم تسليم RPE إلى الفضاء تحت الشبكية في شكل تعليق خلية ، أو ورقة خلية ذاتية الدعم ، أو طبقة أحادية الخلية مدعومة بحامل اصطناعي. الميزة الرئيسية للطريقتين المتأخرتين هي أنه بعد الزرع ، توجد الخلايا في حالة أحادية الطبقة متباينة في الفضاء تحت الشبكية.

تهدف الدراسات قبل السريرية التي أجريت على الحيوانات في الجسم الحي إلى إنشاء إجراء جراحي آمن وقابل للتكرار على نموذج حيواني كبير للعين من أجل الحصول على البيانات التي يمكن أن تكون مفيدة وقابلة للتطبيق في البشر. من خلال هذا البروتوكول ، نهدف إلى الإبلاغ عن مبادئ التقنية الجراحية تحت الشبكية المستخدمة في زرع تحت الشبكية في الجسم الحي لحامل خلية في نموذج حيواني كبير يمكن استخدامه للدراسات التجريبية في الجسم الحي مع زرع أنواع مختلفة من الخلايا وناقلات الخلايا. مع هذا الفيديو ، نود أن نقدم بروتوكولا خطوة بخطوة للإجراء الجراحي لزرع تحت الشبكية لحامل الخلية في عيون Libechov minipig.

أدخل منظار الغطاء. افتح الملتحمة على جانب الأنف من 2 إلى 3 ملليمترات من الحافة من أجل فضح الصلبة لاستئصال التصلب. أدخل المبازل الثلاثة ذات المقياس 25 ثلاثة ملليمترات من النسيان في منطقة pars plana.

حافظ على القرنية رطبة ، أو قم بتغطيتها بميثيل السليلوز أثناء الجراحة بأكملها لمنع وذمة القرنية التناضحية. قم بإزالة الجزء الأوسط من الجسم الزجاجي باستخدام نهج استئصال الزجاجية القياسي ثلاثي المنافذ. قم بإزالة الجسم الزجاجي خلف العدسة بعناية في منطقة بضع التصلب الكبير في المستقبل.

استخدم حقن الأسيتونيد تريامسينولون داخل الجسم الزجاجي لتلطيخ الجسم الزجاجي الخلفي ، والذي يظل عادة ملتصقا بالشبكية من أجل إجراء انفصال زجاجي خلفي متحكم فيه. بعد ذلك ، قم بإجراء حقن تحت الشبكية ببطء من BSS باستخدام قنية قياس 41 بشكل مركزي ، وتجنب تكوين الفقاعة باتجاه المحيط. تقليل ضبط ضغط العين لنظام الري إلى 15 ملم من الزئبق أثناء الحقن تحت الشبكية من أجل منع انسداد الأوعية الدموية الشبكية العابر.

قم بإجراء الإنفاذ الحراري الداخلي الخطي الكبير للشبكية باستخدام مسبار الإنفاذ الحراري الداخلي قياس 27 بالقرب من قاعدة فقاعة الأنف. بعد ذلك ، قم بإجراء بضع شبكية كبير بثلاثة ملليمترات باستخدام شفرة MVR قياس 25 ، أو مقص عمودي مع إعداد ضغط العين المرتفع لنظام الري حتى 60 ملم من الزئبق لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. ثم قم بإجراء بضع تصلب كبير بثلاثة ملليمترات من الحافة باستخدام سكين فاكو 2.75 ملم.

إيلاء الاهتمام ل exodiathermy من نزيف محتمل من الأوعية الصلبة والجسم الهدبي داخل بضع الصلبة الكبيرة. إزالة الجسم الزجاجي المتدلي على جانب بضع التصلب الكبير مع vitrector. ثم أدخل الحاقن برفق بيد مهيمنة في التجويف الزجاجي من خلال بضع التصلب الكبير.

زرع حامل الخلية من خلال بضع الشبكية في الفضاء تحت الشبكية. سحب الحاقن من العين ، وإغلاق بضع الصلبة الكبيرة مع 8-0 خياطة Vicryl لتجنب المضاعفات المرتبطة بنقص التوتر داخل العين. قم بإجراء تبادل كامل للسائل والهواء باستخدام القنية ذات الرؤوس السيليكونية.

بعد ذلك ، قم بحقن زيت السيليكون في التجويف الزجاجي حتى يصبح ضغط العين طبيعيا. في نهاية الجراحة ، قم بإزالة المبازل ، وأغلق عمليات التصلب الثلاثة والملتحمة بنتيجة 8-0 خيوط فيكريل. لمزيد من التفاصيل ، يرجى الاطلاع على قسم الإجراء الجراحي.

تنظيف المنطقة المحيطة بالعين. استخدم الملقط والمقص لإزالة الجفن العلوي والسفلي. إزالة الجفن الثالث.

قطع من خلال الملتحمة. قطع عضلات العين بالمقص. تابع القطع بشكل دائري من السطح إلى العمق.

قطع العصب البصري. إزالة العين من المدار. يسمح وضوح التجويف الزجاجي المملوء بزيت السيليكون للمرء بتصور حالة شبكية العين مع حامل الخلايا تحت الشبكية في أي نقطة زمنية من فترة ما بعد الجراحة.

تظهر الصور الخالية من اللون الأحمر أن انعكاسية خلايا RPE البشرية المزروعة داخل إطار حامل الخلية لا تختلف عن انعكاسية طبقة RPE الخنازير الأصلية. يكشف تصوير OCT في الجسم الحي أن حامل الخلية المزروع في الفضاء تحت الشبكية لا يزيد بشكل كبير من سمك الشبكية بالكامل. يبدو أن غشاء بروخ لا يزال غير تالف أيضا.

يتسبب إطار الناقل الخلوي في تظليل طفيف فقط لإشارة OCT. توضح الدراسة النسيجية لأقسام التبريد بعد الوفاة من شبكية العين تكوين طبقة الخلايا المصطبغة المستمرة وغير المنتظمة في منطقة RPE البشري الأساسي المزروع ، مما يثبت بقاء الخلايا المزروعة على الخلايا الحاملة للخلية. يظهر التحليل الكيميائي المناعي لقسم الأنسجة خلايا RPE البشرية ، الموجودة في منطقة الزرع ، وتعبر عن علامة RPE النموذجية المشابهة لخلايا RPE الصغيرة الأصلية.

على الرغم من ذلك ، لا تظهر خلايا RPE المزروعة كطبقة أحادية للخلية. ومع ذلك ، تقع هذه الخلايا داخل الفضاء تحت الشبكي المحدد. نموذج العين الكبيرة من الخنازير الصغيرة ، في هذه الحالة ، Libechov minipigs ، نعتبره أحد أنسب النماذج للتطبيق المستقبلي للمفاهيم الجديدة لعلاج أمراض الشبكية التنكسية ، نظرا لتشابهها مع تشريح العين البشرية وعلم وظائف الأعضاء.

تسمح أوجه التشابه هذه بتطوير التقنيات الجراحية والأجهزة اللازمة لزرع حامل الخلايا تحت الشبكية ، ويمكن نقل هذه التقنية بسهولة إلى علاج اضطرابات العين البشرية. من المهم التأكد من أن العمليات الجراحية على الخنازير الصغيرة يتم إجراؤها بنفس الأجهزة ، بما في ذلك أدوات توصيل الزرع ، والتي سيتم استخدامها أيضا في العمليات الجراحية البشرية ، مما يجعل تطبيق الخبرة المكتسبة والدراية على البشر دون صعوبات. يمكن أن يكون الوصف التفصيلي لإجراءات الرعاية الجراحية قبل الجراحة وما بعد الجراحة مفيدا للدراسات المستقبلية من خلال زيادة توليد البيانات بكفاءة وموحدة.