امتصاص جرعة التعرض للمركبات القائمة على البلاتين والروثينيوم في أسماك الزرد عن طريق قياس الطيف الكتلي للبلازما المقترن بالحث مع تطبيقات أوسع

الزرد هو نموذج جذاب ، لكن العلماء لا يعرفون مقدار امتصاص الكائن الحي للجرعات المنقولة بالماء. طورنا تقنية لهضم الأنسجة بعد التعرض وتحديد كمية المعادن عبر ICPMS. تسمح لنا هذه التقنية بتحديد كمية الاستجابة للجرعة والتحقق منها بدقة باستخدام ICPMS.

هذه الطريقة لديها الكثير من الإمكانات. يمكن تطبيق التعرض للمعادن الدوائية أو البيئية من المستوى الخلوي على طول الطريق إلى أنظمة الأعضاء بأكملها في النماذج الحيوانية. أضف ما يقرب من 0.25 ملليلتر من حمض النيتريك عالي النقاء إلى أنابيب الطرد المركزي المصنوعة من البولي بروبيلين سعة 15 ملليلتر لما يصل إلى 10 يرقات.

الموجات فوق الصوتية لمدة ساعة واحدة لهضم العينات مسبقا. بالنسبة للموجات فوق الصوتية، قم بإجراء دورات قصيرة من هضم الأنسجة بفواصل زمنية مدتها خمس دقائق في جهاز هضم ميكروويف آمن للحمض حتى تتأكسد جميع الأنسجة بشكل واضح، مما ينتج عنه محلول أصفر واضح وموحد. راقب سلامة الأنابيب بعناية لتجنب التمزق وإجراء دورات قصيرة في جهاز الطرد المركزي بين الدورات.

بمجرد أكسدة الأنسجة بشكل واضح ، قم بتخفيف العينات في غطاء الدخان إلى 3.5٪ من حمض النيتريك باستخدام 6.75 ملليلتر من الماء عالي النقاء والدوامة لخلطها جيدا. ثم إجراء منحنى معايرة من 7 نقاط مطابق للمصفوفة لحساب أي تداخلات متساوية الضغط محتملة. باستخدام تركيز مخزون من معيار العناصر المائية المعتمد ، خذ أليكوت 0.1 ملليلتر ، وعن طريق الماصة في أنبوب طرد مركزي جديد 15 ملليلتر.

تمييع مع 3.5٪ حمض النيتريك إلى حجم نهائي من 10 ملليلتر لإنتاج 10 أجزاء في مليار حلول قياسية. باستخدام 10 أجزاء لكل مليار مخزون ، اجعل التخفيفات التسلسلية 0.1 و 1.0 و 5.0 أجزاء لكل مليار محاليل قياسية في 3.5٪ من حمض النيتريك. باستخدام مخزون 0.1 ، قم بعمل التخفيفات التسلسلية 0.001 و 0.005 و 0.01 جزء في المليار من المحاليل القياسية في 3.5٪ من حمض النيتريك.

ثم قبل إعداد أداة ICPMS لتحليل العينات ، تأكد من أن صمام غاز الأرجون مفتوح ، وجميع الأنابيب متصلة ونظيفة بشكل آمن ، وحمض النيتريك 5٪ مفتوح لشطف الأنابيب والأواني الزجاجية بين تحليلات العينات. تحقق من حالة الشعلة والمخاريط وتأكد من أن صندوق الشعلة مغلق بإحكام. ويتم توصيل أنبوب تصريف غرفة الرش بشكل صحيح بالمضخة المحيطية.

افتح البرنامج ، وتحقق من قراءات الفراغ ، وتأكد من تشغيل جميع المضخات التوربينية بنسبة 100٪ Click START في نافذة حالة نظام التحكم في البلازما لبدء تسلسل البدء. قم بتشغيل مضخة البلازما ومبرد البلازما ، وجثم البخاخات وإضاءة البلازما. انتظر حتى تكون البلازما مضاءة ومستقرة عندما تشير نافذة Status إلى اكتمال تسلسل بدء التشغيل.

عند هذه النقطة، راقب النقاط الخضراء على نافذة حالة النظام التي تشير إلى أن جميع مصادر الطاقة قيد التشغيل. في شريط القوائم ، انقر فوق التحكم ، Autosampler في القائمة المنسدلة. أدخل موضع رف أخذ العينات التلقائية للأنبوب الذي يحتوي على حمض النيتريك بنسبة 5٪ ، واسمح للحمض بدخول البلازما.

في شريط القوائم ، انقر فوق المسح الضوئي ، المغناطيس في القائمة المنسدلة. في نافذة MagnetScan ، اكتب 115 في موضع كتلة العلامة وانقر فوق Enter. اسمح للمغناطيس بالمسح الضوئي عبر نطاق الكتلة لمدة 30 دقيقة أثناء ارتفاع درجة حرارة الجهاز.

بعد 30 دقيقة، استخدم عنصر التحكم التلقائي في أخذ العينات للانتقال إلى موضع حل ضبط متعدد العناصر مكون من جزء واحد لكل مليار. قم بشفط حل الضبط وضبط الأداة لتحسين قراءة الإشارة. اضبط موضع الشعلة لإحداثيات X و Y و Z ، بحيث تتماشى الشعلة مع مركز المخاريط ومعدل تدفق البخاخات في نافذة التحكم في البلازما.

قم بإجراء التعديلات اللازمة في نافذة ضبط البصريات الأيونية للمصدر والكاشف والمحلل. بمجرد تحسين قراءة الإشارة، انقر فوق إيقاف في نافذة مسح المغناطيس، وانقر فوق معايرة المغناطيس وحدد دقة منخفضة في النافذة المنبثقة. انقر فوق موافق وافتح ملف smc لمعايرة الكتلة لمعايرة المغناطيس.

انقر فوق حفظ، استخدم لتطبيق معايرة المغناطيس الحالية على التحليلات. عند قياس عينات غير معروفة مع مجموعة كبيرة من التركيزات، قم بإجراء معايرة كاشف لمقارنة إشارات عدد نبضات الأيونات بتركيزات منخفضة بإشارات الأيونات الموهنة المنتجة بتركيزات أعلى. ابدأ تحليل العينة بالنقر فوق اكتساب البيانات ، ثم انقر فوق إعداد الطريقة في القائمة المنسدلة.

استخدم طريقة موجودة توفرها الشركة المصنعة أو قم بإنشاء طريقة تستند إلى عناصر الاهتمام. إذا لزم الأمر، اضبط وضع التحليل، ووقت السكن، وتأخير التبديل، وعدد عمليات الاجتياح والدورات، والدقة، ووضع الكشف، وكتلة الركن لإعدادات الانحراف. انقر فوق حفظ لتسجيل إعدادات الطريقة.

تحسين المعلمات لكل معدن و isotype. في شريط القوائم، انقر على الحصول على البيانات. انقر فوق تشغيل الدفعات في القائمة المنسدلة.

بدلا من ذلك ، انقر فوق رمز BATCH أسفل شريط القوائم ، أو قم باستيراد معلمات الدفعات من جدول بيانات أو قم بإنشاء تسلسل في نافذة Batch Run. أدخل نوع العينة، وموضع حامل أخذ العينات التلقائي، ووقت النقل، ووقت الغسيل، والنسخ المتماثل، ومعرف العينة، وملف الطريقة. رتب تشغيل الدفعات للحلول القياسية لمنحنى المعايرة، متبوعا بمعيار مراقبة الجودة، ثم عينات غير معروفة.

راقب انحراف الأداة وقابلية تكرار العينة من خلال تضمين 0.5 جزء في المليار معيار لمراقبة الجودة كل 5 إلى 10 عينات. أجريت دراسات امتصاص الأنسجة مع التعرض للسيسبلاتين المنقول بالماء ومركب جديد مضاد للسرطان قائم على الروثينيوم PMC79. تم تقييم الفتك وتأخر الفقس للتركيزات الاسمية من سيسبلاتين.

0 و 3.75 و 7.5 15 و 30 و 60 ملليغرام لكل لتر من سيسبلاتين. تم تحديد تراكم البلاتين في أنسجة الكائنات الحية من خلال تحليل ICPMS واحتوت أنسجة الكائنات الحية على جرعات 0.05 و 8.7 و 23.5 و 59.9 و 193.2 و 461.9 نانوغرام لكل كائن حي. لوحظ تأخر الفقس في جميع تركيزات سيسبلاتين.

بعد إزالة التشويق ، تم جمع وتحليل الكرومات للبلاتين بشكل منفصل. حددت الجرعات غير المميتة من سيسبلاتين المستخدمة في دراسات التجريد أن 93 إلى 96٪ من إجمالي الجرعة المقدمة من سيسبلاتين قد تراكمت في المشيمية ، مع الجرعة المتبقية داخل أنسجة اليرقات. تعرضت يرقات الزرد ل 0 و 3.1 و 6.2 و 9.2 و 12.4 ملليغرام لكل لتر من PMC79.

تم تحديد هذه التركيزات تحليليا لتحتوي على 0 و 0.17 و 0.44 و 0.66 و 0.76 ملليغرام لكل لتر من الروثينيوم. على عكس هذا سيسبلاتين ، لم يلاحظ تأخر الفقس في اليرقات المكشوفة PMC79. لم يتم تضمين الكوريونات في تحليل الروثينيوم لأنها تدهورت بشكل طبيعي قبل جمع اليرقات.

كان المعدن الضخم داخل أنسجة اليرقات التي تم تحليلها عند كل تركيز 0.19 و 0.41 و 0.68 نانوغرام من الروثينيوم لكل يرقة. أي من الكواشف المضافة إلى بروتوكول التعرض تعطي إمكانية حدوث تداخلات متساوية القوة. عندما يكون ذلك ممكنا ، فكر في بدائل مثل التبريد السريع مقارنة بالتريكاين.

تسمح هذه الطريقة بقياس كمية الجرعة المعدنية للسمية والفعالية والتجارب التي يمكن مقارنتها عبر الفقاريات الأعلى. كنا متحمسين بشكل خاص لأن جرعة العتبة لدينا كانت ضمن ترتيب الحجم المعطى للمرضى.