تكشف حساسية غشاء الميتوكوندريا الداخلي ل Na+ عن برك CoQ وظيفية مجزأة جزئيا

يسلط هذا البروتوكول الضوء على دور الصوديوم كرسول ثان ويظهر أيضا وجود برك يوبيكوينول متباينة جزئيا. توضح هذه التقنية نهجا بسيطا للغاية لدراسة برك يوبيكوينول التي تتطلب نماذج خلايا محددة للغاية. يمكن استخدام هذا النهج لدراسة نقل الإلكترون في الأغشية الأخرى ، وخاصة الإنزيمات داخل قطرات الدهون.

قسم العينات إلى أربع عينات فرعية سعة كل منها 20 ميكروغرام وقم بتصنيفها من A إلى D.Split العينات A و B إلى عينتين فرعيتين سعة كل منهما 10 ميكروغرام وقم بتصنيفها على أنها A1 و A2 و B1 و B2. قم بإعداد المخزن المؤقت C1/C2 كما هو موضح في بروتوكول النص وقم بتسخينه مسبقا إلى 37 درجة مئوية. في كوفيت واحد ملليلتر ، أضف كل عينة من العينات الفرعية إلى 30 ميكرولتر من السيتوكروم c و 10 ميكرولترات من المالونات. أضف المخزن المؤقت C1 / C2 لرفع مستوى الصوت إلى 980 ميكرولتر في الكوفيت A1 و B1 و 979 ميكرولتر في A2 و B2. أضف 10 ميكرولترات من كلوريد البوتاسيوم المولي الواحد في الكوفيت A1 و A2 و 10 ميكرولترات من كلوريد الصوديوم المولي الواحد في B1 و B2. أضف ميكرولتر واحد من روتينون مللي مولا واحد إلى الكوفيت A2 و B2. قبل القياس مباشرة ، أضف 10 ميكرولترات من NADH 10 ملليمولار في جميع الكفيتات.