Name: التقنيات الجزيئية والمناعية في نموذج فأر مهندس وراثيا لورم الجهاز الهضمي اللثوي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: اكتشف تقنيات التشريح ومعالجة العينات في نموذج فأر Kit V558Δ/+ المهندس وراثياً لدراسة أورام الجهاز الهضمي اللثوي. يُمكّن هذا البروتوكول الباحثين من اختبار العلاجات المناعية بدقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم هندسة مجموعةV558Δ / + الفئران وراثيا ومشاركتها من قبل الدكتور بيتر بيسمر10. تم دعم هذا العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة R01 CA102613 و T32 CA251063.

تم إيواء جميع الفئران في ظروف خالية من مسببات الأمراض في جامعة بنسلفانيا وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة وبموافقة جامعة بنسلفانيا IACUC. تم تنفيذ القتل الرحيم وفقا لإجراءات التشغيل القياسية للموارد الحيوانية في مختبر جامعة بنسلفانيا.
1. كيتV558Δ / + تربية الماوس
<ol><li>قم بإرجاع الفئرانV558Δ/+ أكثر من 10 مرات على خلفية C57BL/6J باستخدام الفئران C57BL/6J. للقيام بذلك ، قم بتربية الفئران الذكور V558Δ / + مع الفئران C57BL / 6J الإناث بنسبة 1: 2. ملاحظة: النمط الوراثي لمجموعة متماثلة الزيجوت V558 Δ/V558Δ قاتل في الرحم. من الممكن تربية إناث كيتV558Δ / + الفئران مع الفئران C57BL / 6J الذكور ، ولكن حجم القمامة حوالي نصف ما شوهد من الفئران البرية C57BL / 6J. علاوة على ذلك ، تنتج الفئران الإناث V558Δ / + كميات محدودة من الفضلات بعد 4 أشهر من العمر.</li>
	<li>النمط الوراثي للجراء في عمر 7-14 يوما عن طريق قص إصبع القدم لتأكيد وجود النمط الوراثي KitV558Δ / +. استخدم التمهيدي الأمامي: TCTCCTCCAGAAACCCATGTATGAA; مراسل 1: CCTCGACAACCTTCCA ؛ عكس التمهيدي: TTGCGTCGGGTCTATGTAAACAT; والمراسل 2: TCTCCTCGACCTTCCA للتنميط الجيني.</li>
</ol>2. كيتV558Δ / + علاج الماوس
<ol><li>يتطابق العمر والجنس مع مجموعةV558Δ/+ الفئران قبل العلاج. استخدم الفئران المتطابقة مع العمر والجنس في الأتراب لأن الأورام من الفئران الإناث V558Δ / + أكبر من تلك الموجودة في الفئران الذكور. علاج الفئران في عمر 8-12 أسبوعا ، وفي ذلك الوقت يتم إنشاء الأورام (الشكل 1).</li>
	<li>إعطاء مثبطات التيروزين كيناز عن طريق الفم أو عن طريق الحقن داخل الصفاق (i.p) ؛ مجموعةV558Δ / + الأورام حساسة لمثبطات التيروزين كيناز. توفير إيماتينيب بجرعة 600 ملغم/لتر في مياه الشرب أو حقن 45 مغ/كغ مرتين يوميا. قم بقياس انخفاض وزن الورم باستخدام المقاييس الرقمية بعد تشريح الورم كما هو موضح في الخطوة 3 ، والتي تبلغ حوالي 50٪ في أسبوع واحد و 80٪ في 4 أسابيع بعد العلاج باستخدام إيماتينيب (الشكل 2).</li>
</ol>3. كيتV558Δ / + حصاد جهاز الماوس
<ol><li>القتل الرحيم للفئران بواسطة مخدر CO2 بمعدل تدفق 60٪ من حجم الغرفة في الدقيقة. اترك الفئران في الغرفة لمدة 2 دقيقة على الأقل بعد توقف التنفس ، ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم لتأكيد الوفاة.</li>
	<li>تعقيم جميع الأدوات ، وارتداء القفازات طوال العملية ، والحفاظ على حقل معقم. تحضير الجلد مع 70 ٪ من الإيثانول. قم بعمل شق عمودي في خط الوسط 2 سم باستخدام مقص وأدخل تجويف البطن. قم بتحليل أي التصاقات داخل البطن بشكل حاد.</li>
	<li>لإزالة العقدة الليمفاوية المساريقية المستنزفة، اتبع الخطوات الموضحة أدناه.<ol>
<li>تحديد الأعور ورفع مساريقه بشكل متفوق. في منتصف الطريق تقريبا إلى قاعدة المساريق القولون ، حدد العقدة الليمفاوية المساريقية وتشريحها بحدة. العقدة الليمفاوية بيضاء اللون ويبلغ حجمها حوالي 0.5 سم × 0.5 سم.</li>
		<li>قسم أنسجة العقدة الليمفاوية إلى أثلاثين لعزل البروتين والأنسجة وتعليق الخلية الواحدة ، حسب الحاجة. بالنسبة لمعلقات الخلايا المفردة ، ضع أنسجة العقدة الليمفاوية في 20 مل من الوسائط الخالية من المصل (RPMI) واحتفظ بها على الجليد.</li>
	</ol>
</li>
	<li>لعزل GIST والأعور ، اتبع الخطوات الموضحة أدناه.<ol>
<li>يتم استبدال الأعور في كيتV558Δ / + الفئران في الغالب ب GIST. تقسيم بعناية تقاطع اللفائفي من قاعدة الورم. لجمع الأعور ، قسم القولون مرة أخرى ، 2 سم بالقرب من قاعدة الورم.</li>
		<li>في 50٪ -60٪ من الفئران KitV558Δ / + ، يحتوي رأس الورم على غطاء من الأنسجة السيكالية ، والتي تحتوي عادة على سائل مصلي ولكن نادرا ما تحتوي على القيح (الشكل 3). تشريح أنسجة الغطاء بشكل حاد بعيدا عن أنسجة الورم.</li>
		<li>قسم أنسجة الورم و / أو الأعور إلى أثلاثين لعزل البروتين والأنسجة وتعليق الخلية الواحدة ، حسب الحاجة. بالنسبة لتعليق الخلية الواحدة ، ضع أنسجة الورم أو الأعور في HBSS مع 2٪ FCS ، وهو ما يكفي لتغطية العينة والحفاظ على الجليد.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. تحليل اللطخة الغربية لأنسجة GIST
<ol><li>تحضير المخزن المؤقت لتحلل الأنسجة الذي يحتوي على 50 ملليمتر TrisHCl (الرقم الهيدروجيني 7.5) ، 150 mM NaCl ، 5 mM EDTA ، 1٪ منظف غير محدد ، 2 mM Na3VO4 ، 1 mM PMSF ، 10 mM NaF ، و 20 ميكرولتر / مل خليط مثبطات البروتيناز.</li>
	<li>قم بإعداد محلول ملحي مخزن مؤقتا 1x Tris مع 1٪ Tween 20 (TBST) من خلال الجمع بين 1800 مل من الماء منزوع الأيونات ، و 2 مل من Tween 20 ، و 200 مل من محلول ملحي مخزن مؤقتا 10x Tris (TBS).</li>
	<li>أعد تعليق الأنسجة من الخطوة 3.4.3 في أنبوب FACS في 5mL / g من المخزن المؤقت لتحلل الأنسجة وتجانس مرتين باستخدام مجانس ميكانيكي عند 15000 دورة في الدقيقة لمدة 15 ثانية على الجليد. احتضان الليزات لمدة 30 دقيقة على الجليد.</li>
	<li>نقل الليزات إلى أنبوب جهاز طرد مركزي دقيق 1.5 مل. جهاز طرد مركزي بسرعة قصوى لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية. نقل supernatant إلى أنبوب جديد للطرد المركزي الدقيق.</li>
	<li>قم بتشغيل lysates على هلام متدرج بنسبة 4٪ إلى 15٪ ، ثم انقله إلى غشاء نيتروسليلوز ، كما هو موضح في14.</li>
	<li>اغسل الغشاء مرة واحدة في 1x TBS لمدة 5 دقائق ثم احجب الغشاء في 5٪ من الحليب لمدة 1 ساعة. مرة أخرى ، اغسل الغشاء مرة واحدة في 1x TBS لمدة 10 دقائق.</li>
	<li>الغشاء الحاضن في الأجسام المضادة الأولية المخفف 1: 1000 في 5٪ BSA عند 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. اغسل الغشاء 3x في 1x TBST لمدة 10 دقائق لكل منهما. لطخة الحضانة مع الأجسام المضادة الثانوية المخففة 1: 2500 في الحليب 2.5 ٪ لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>اغسل الغشاء مرة واحدة في 1x TBS لمدة 5 دقائق. أضف ما يكفي من ركيزة HRP لتغطية الغشاء ، عادة 200-500 ميكرولتر ، واستخدم جهاز تصوير رقمي للكشف عن التلألؤ الكيميائي وقياسه كميا.</li>
</ol>5. الكيمياء النسيجية المناعية لأنسجة GIST
<ol><li>إصلاح الأنسجة من الخطوة 3.3.2 أو 3.4.3 في 4٪ بارافورمالديهايد عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. تخزين الأنسجة في 70٪ EtOH حتى تصبح جاهزة للمعالجة. قم بتضمين كتل وتقسيمها بسماكة 5 ميكرومتر على شرائح زجاجية ، كما هو موضحفي 15,16.</li>
	<li>الكشف الكامل عن الكيمياء المناعية باستخدام مجموعة أساسية للكشف عن المناعة ، كما هو موضح سابقا17.</li>
</ol>6. تعليق خلية واحدة من العقدة الليمفاوية المساريقية
<ol><li>صب وسائط RPMI مع عينة العقدة الليمفاوية من الخطوة 3.3.2 على مرشح 100 ميكرومتر. انقل الفلتر إلى عقدة ليمفاوية مخروطية وهرسية جديدة سعة 50 مل مع الطرف الناعم لمحقنة بلاستيكية سعة 3 مل. فلتر الغسيل مع 20 مل من وسائط RPMI.</li>
	<li>الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g عند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت.</li>
	<li>أعد تعليق الكريات في 20 مل من FBS بنسبة 1٪ في PBS (المخزن المؤقت للخرزة) واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر. جمع ترشيح الخلية. عد الخلايا باستخدام مقياس الدم.</li>
	<li>الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g عند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت. أعد التعليق في المخزن المؤقت للخرزة عند 6 × 107 خلايا/مل لقياس التدفق الخلوي.</li>
</ol>7. تعليق خلية واحدة من GIST
<ol><li>تحضير الكولاجيناز المخزن المؤقت عن طريق إضافة 250 ملغ من الكولاجيناز الرابع ، قرص واحد من مثبط الأنزيم البروتيني الخالي من EDTA و 100 ميكرولتر من DNase I إلى 50 مل من HBSS. تدور لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة حتى تذوب.</li>
	<li>ضع GIST في طبق معقم وأضف 2.5 مل من الكولاجيناز العازل. افرم الورم باستخدام مشرط معقم ومقص حتى يصبح الورم في شظايا دقيقة. استخدم ماصة كبيرة التجويف لشفط الورم والكولاجيناز في أنبوب سعة 50 مل.</li>
	<li>احتضن في حاضنة تهتز عند 100 دورة في الدقيقة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. قم بإخماد التفاعل باستخدام 2 مل من FBS.</li>
	<li>صب الكولاجيناز مع عينة GIST على مرشح 100 ميكرومتر وهرس الورم مع نهاية ناعمة من حقنة بلاستيكية 3 مل وجمعها في أنبوب 50 مل. اغسل الفلتر ب 20 مل من HBSS. جهاز الطرد المركزي للترشيح عند 450 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت.</li>
	<li>أعد تعليق الكريات في 20 مل من المخزن المؤقت للخرز واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر. جمع الخلايا المرشحة وعد الخلايا باستخدام مقياس الدم. جهاز الطرد المركزي للترشيح عند 450 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت. أعد التعليق في المخزن المؤقت للخرزة عند 6 × 107 خلايا/مل لقياس التدفق الخلوي.</li>
</ol>8. تعليق خلية واحدة من الأعور
<ol><li>تحضير الكولاجيناز المخزن المؤقت كما في الخطوة 7.1. باستخدام المقص ، قم بتقسيم الأعور طوليا لفضح الغشاء المخاطي الداخلي. تقطع إلى أقسام 0.5 سم وتوضع في أنبوب 50 مل مع 5 مل من HBSS مع 2٪ FBS. رج بقوة لمدة 30 ثانية ، وأجهزة الطرد المركزي في 450 × غرام لمدة 20 ثانية ، ثم استنشق السوبرناتان.</li>
	<li>أضف 5 مل من HBSS مع 2 mM EDTA. احتضان في حاضنة تهتز عند 37 درجة مئوية عند 100 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. جهاز طرد مركزي عند 450 × جم لمدة 20 ثانية. شفط السوبرناتانت.</li>
	<li>أضف 5 مل من HBSS. رج بقوة لمدة 30 ثانية ، وأجهزة الطرد المركزي في 450 × غرام لمدة 20 ثانية ، ثم استنشق السوبرناتان. كرر مرة أخرى.</li>
	<li>أضف 5 مل من الكولاجيناز العازل. احتضن في حاضنة تهتز عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة عند 100 دورة في الدقيقة. رجه بقوة كل 10 دقائق. قم بإخماد التفاعل باستخدام 2 مل من FBS.</li>
	<li>صب الكولاجيناز مع عينة الأعور على مرشح 100 ميكرومتر وهرس مع نهاية ناعمة من حقنة بلاستيكية 3 مل. اغسل الفلتر ب 20 مل من HBSS. جمع الترشيح.</li>
	<li>الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. شفط السوبرناتانت. أعد تعليق الكريات في 20 مل من المخزن المؤقت للخرز واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر. جمع الخلايا المرشحة وعدها باستخدام مقياس الدم.</li>
	<li>الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. شفط السوبرناتانت. أعد التعليق في المخزن المؤقت للخرزة عند 6 × 107 خلايا/مل لقياس التدفق الخلوي.</li>
</ol>

<ol><li>Mastrangelo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+soft+tissue+sarcoma+and+beyond%3A+a+population-based+prospective+study+in+3+European+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Incidence of soft tissue sarcoma and beyond: a population-based prospective study in 3 European regions.</a> Cancer. 118 (21), 5339-5348 (2012).</li>
<li>Joensuu, H., DeMatteo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+management+of+gastrointestinal+stromal+tumors%3A+a+model+for+targeted+and+multidisciplinary+therapy+of+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The management of gastrointestinal stromal tumors: a model for targeted and multidisciplinary therapy of malignancy.</a> Annual Review of Medicine. 63, 247-258 (2012).</li>
<li>Blanke, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+results+from+a+randomized+phase+II+trial+of+standard-+versus+higher-dose+imatinib+mesylate+for+patients+with+unresectable+or+metastatic+gastrointestinal+stromal+tumors+expressing+KIT%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long-term results from a randomized phase II trial of standard- versus higher-dose imatinib mesylate for patients with unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors expressing KIT.</a> Journal of Clinical Oncology. 26 (4), 620-625 (2008).</li>
<li>Demetri, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+regorafenib+for+advanced+gastrointestinal+stromal+tumours+after+failure+of+imatinib+and+sunitinib+%28GRID%29%3A+an+international%2C+multicentre%2C+randomised%2C+placebo-controlled%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib (GRID): an international, multicentre, randomised, placebo-controlled, phase 3 trial.</a> Lancet. 381 (9863), 295-302 (2013).</li>
<li>Gold, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+metastatic+GIST+in+the+era+before+tyrosine+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Outcome of metastatic GIST in the era before tyrosine kinase inhibitors.</a> Annals of Surgical Oncology. 14 (1), 134-142 (2007).</li>
<li>Huynh, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorafenib+induces+growth+suppression+in+mouse+models+of+gastrointestinal+stromal+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Sorafenib induces growth suppression in mouse models of gastrointestinal stromal tumor.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 8 (1), 152-159 (2009).</li>
<li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors%3A+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996(2020).</li>
<li>Balachandran, V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imatinib+potentiates+antitumor+T+cell+responses+in+gastrointestinal+stromal+tumor+through+the+inhibition+of+Ido%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imatinib potentiates antitumor T cell responses in gastrointestinal stromal tumor through the inhibition of Ido.</a> Nature Medicine. 17 (9), 1094-1100 (2011).</li>
<li>Vitiello, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+immune+profiles+distinguish+the+mutational+subtypes+of+gastrointestinal+stromal+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Differential immune profiles distinguish the mutational subtypes of gastrointestinal stromal tumor.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (5), 1863-1877 (2019).</li>
<li>Sommer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+stromal+tumors+in+a+mouse+model+by+targeted+mutation+of+the+Kit+receptor+tyrosine+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (11), 6706-6711 (2003).</li>
<li>Cavnar, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIT+oncogene+inhibition+drives+intratumoral+macrophage+M2+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">KIT oncogene inhibition drives intratumoral macrophage M2 polarization.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (13), 2873-2886 (2013).</li>
<li>Medina, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+kinase+inhibition+limits+Batf3-dependent+dendritic+cell+development+and+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oncogenic kinase inhibition limits Batf3-dependent dendritic cell development and antitumor immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 216 (6), 1359-1376 (2019).</li>
<li>Zhang, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+and+CD8%28%2B%29+T+cells+mediate+the+antitumor+efficacy+of+combined+CD40+ligation+and+imatinib+therapy+in+gastrointestinal+stromal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Macrophages and CD8(+) T cells mediate the antitumor efficacy of combined CD40 ligation and imatinib therapy in gastrointestinal stromal tumors.</a> Cancer Immunology Research. 6 (4), 434-447 (2018).</li>
<li>General Protocol for Western Blotting. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf">https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf</a> (2022).</li>
<li>Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSadeghipour%2C+A+%22Biobanking%3A+Methods+and+Protocols%22">Biobanking: Methods and Protocols</a>. , Springer. New York. 253-268 (2019).</li>
<li>Sy, J., Ang, L. -C. Microtomy: Cutting formalin-fixed, paraffin-embedded sections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSy%2C+J+%22Biobanking%3A+Methods+and+Protocols%22">Biobanking: Methods and Protocols</a>. , Springer. New York. 269-278 (2019).</li>
<li>Seifert, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1%2FPD-L1+blockade+enhances+T-cell+activity+and+antitumor+efficacy+of+imatinib+in+gastrointestinal+stromal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">PD-1/PD-L1 blockade enhances T-cell activity and antitumor efficacy of imatinib in gastrointestinal stromal tumors.</a> Clinical Cancer Research. 23 (2), 454-465 (2017).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+KIT+modulates+Type+I+IFN-mediated+antitumor+immunity+in+GIST%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Oncogenic KIT modulates Type I IFN-mediated antitumor immunity in GIST.</a> Cancer Immunology Research. 9 (5), 542-553 (2021).</li>
<li>Rossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+Kit+signaling+and+therapeutic+intervention+in+a+mouse+model+of+gastrointestinal+stromal+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Oncogenic Kit signaling and therapeutic intervention in a mouse model of gastrointestinal stromal tumor.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (34), 12843-12848 (2006).</li>
</ol>

وليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

يعد نموذج الماوس KitV558Δ/+ أداة بحث قوية في التحليل الجزيئي والمناعي ل GIST. على الرغم من أن استراتيجية التربية تتطلب صليبا واحدا ، إلا أن استخدام مجموعات الفئران Kit V558Δ / + في التجارب التي تحلل استجابة الورم يتطلب تربية واسعة النطاق. يجب أن تكون الفئران متطابقة مع العمر والجنس لضمان أوزان الورم المماثلة ، وتموت 10٪ من الفئران قبل 8 أسابيع من العمر عند إنشاء الأورام. استراتيجيات تربية أقل شمولا ممكنة إذا استخدمت تقنيات تصوير متقدمة مثل التصوير المقطعي المحوسب أو التصوير بالرنين...

GIST هو الساركوما الأكثر شيوعا في البشر مع حدوث حوالي 6000 حالة في الولايات المتحدة الأمريكية1. يبدو أن GIST ينشأ من خلايا تنظيم ضربات القلب المعدية المعوية المسماة الخلايا الخلالية في Cajal ، وعادة ما يكون مدفوعا بطفرة واحدة في مجموعة التيروزين كيناز أو PDGFRA2. الجراحة هي الدعامة الأساسية لعلاج GIST ويمكن أن تكون علاجية ، ولكن يمكن علاج المرضى الذين يعانون من مرض متقدم باستخدام مثبط التيروزين كيناز (TKI) ، إيماتينيب. منذ تقديمه منذ أكثر من 20 عاما ، قام imatinib بتحويل نموذج العلاج في GIST ، مما أدى إلى تحسين البقاء على قيد الحياة في الأمراض المتقدمة من 1 إلى أكثر من 5 سنوات 3,4,5. لسوء الحظ ، نادرا ما يكون إيماتينيب علاجيا بسبب طفرات KIT المكتسبة ، لذلك هناك حاجة إلى علاجات جديدة لهذا الورم.
نماذج الفئران هي أداة بحثية مهمة في التحقيق في العلاجات الجديدة في السرطان. تم تطوير العديد من نماذج xenograft تحت الجلد و xenograft المشتقة من المريض والتحقيق فيها في GIST 6,7. ومع ذلك ، فإن الفئران التي تعاني من نقص المناعة لا تمثل GIST البشري بشكل كامل لأن GISTs تؤوي ملفات تعريف مناعية تفاضلية اعتمادا على طفرتها الورمية ، وتغيير البيئة الدقيقة لورم الجهاز الهضمي يحسن من آثار العلاج TKI 8,9. يحتوي الماوس Kit V558Δ/+ على حذف خط جرثومي غير متجانس في Kit exon 11 ، والذي يشفر مجال juxtamembrane ، وهو الموقع الأكثر تحورا شيوعا في GIST10 البشري. تقوم الفئرانV558Δ / + بتطوير GIST سيكال واحد مع اختراق 100٪ ، والأورام لها أنسجة مماثلة ، وإشارات جزيئية ، وتسلل مناعي ، واستجابة للعلاج مثل GIST البشري 8,11,12,13. هنا ، نصف تربية وعلاج وعزل العينات ومعالجتها في الفئران KitV558Δ / + لاستخدامها في البحوث الجزيئية والمناعية في GIST.

<table><tbody><tr><td>مرشح 100 ميكرون</td><td>EMSCO</td><td>1194-2360</td><td></td></tr><tr><td>1x مخزن مؤقت تحلل كرات الدم الحمراء</td><td>Life Technologies</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>حقنة 3 مل</td><td>Thermo Fisher Scientific / BD Biosciences</td><td>14823435</td><td></td></tr><tr><td>4 & ndash ؛ 15٪ جل بروتين صغير PROTEAN TGX مسبقة الصب ، 10 بئر ، 30 وميكرو ؛ ل</td><td>Bio-Rad</td><td>4561083</td><td></td></tr><tr><td>4٪ محلول بارافورمالدهايد</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AAJ19943K2</td><td></td></tr><tr><td>40 ميكرون مرشح</td><td>EMSCO</td><td>1194-2340</td><td></td></tr><tr><td>5M NaCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6546</td><td></td></tr><tr><td>مرشح 70 ميكرون</td><td>EMSCO</td><td>1194-2350</td><td></td></tr><tr><td>AKT الأجسام المضادة (C67E7)</td> <td>إشارات الخلية</td><td>4691</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6J الفئران</td><td>The Jackson Laboratory</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagenase IV</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>مثبط البروتياز المصغر الكامل الخالي</td><td>من EDTA توماس Scientific</td><td>C852A34</td><td></td></tr><tr><td>الكونتيسة الثانية عداد الخلايا الآلي</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Thermal Fisher Thermal Fisher Scientific Thermal Fisher Scientific / Exel International</td><td>14-840-00</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Thomas Scientific</td><td>C756V81</td><td></td></tr><tr><td>Dog1 الجسم المضاد</td><td>abcam</td><td>ab64085</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>ERK الجسم المضاد (p44 / 42)</td> <td>إشارات الخلية</td><td>9102</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>توماس Scientific</td><td>C788U23</td><td></td></tr><tr><td>برنامج FIJI</td><td></td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji</td></tr><tr><td>فيشربراند 850 الخالط</td><td>الحراري فيشر العلمي</td><td>15-340-169</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>مركز</td><td></td><td></td>الخلية بجامعة بنسلفانيا</tr><tr><td>إيماتينيب ميسيلات</td><td>سيليك للكيماويات</td><td>S1026</td><td></td></tr><tr><td>KIT الجسم المضاد (D13A2)</td> <td>إشارات الخلية</td><td>3074</td><td></td></tr><tr><td>KitV558 & دلتا ؛ /+ التنميط الجيني</td><td>Transnetyx</td><td></td><td></td></tr><tr><td>أنابيب الطرد المركزي الدقيقة (1.5 مل)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Mouse on Mouse Immunodetection Kit ،</td><td>مختبرات النواقلات</td> الأساسية <td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>غشاء النيتروسليلوز ، Precut ، 0.45 & micro ؛ m</td><td>Rio-Rad</td><td>1620145</td><td></td></tr><tr><td>الحليب الجاف الخالي من الدسم</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NC9121673</td><td></td></tr><tr><td>Nonidet P 40 بديل</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>74385</td><td></td></tr><tr><td>الجسم المضاد p-AKT (S473)</td> إشارات <td>الخلية</td><td>4060</td><td></td></tr><tr><td>الجسم المضاد p-ERK (p44 / 42)</td> <td>إشارات الخلية</td><td>9101</td><td></td></tr><tr><td>الجسم المضاد p-KIT (Y719)</td> إشارات <td>الخلية</td><td>3391</td><td></td></tr><tr><td>PMSF مثبط البروتياز</td><td>الحراري فيشر العلمي</td><td>36978</td><td></td></tr><tr><td>Proeinase K</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP170050</td><td></td></tr><tr><td>اختبار البوليسترين المستدير القاع (FACS) أنابيب</td><td>Falcon / Thermo Fisher Scientific</td><td>14-959-2A</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>مركز</td><td></td><td></td>خلايا جامعة بنسلفانيا</tr><tr><td>فلوريد الصوديوم (NaF)</td> <td>سيجما ألدريتش</td><td>201154</td><td></td></tr><tr><td>أورثوفاناديت الصوديوم (Na3VO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6508</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>34076</td><td></td></tr><tr><td>TBS buffer (10x)</td><td>طبق زراعة الأنسجة بجامعة بنسلفانيا</td> (<td></td><td></td></tr><tr><td>100 مم 2)</td><td>ثيرمو فيشر ساینتينفيك / فالكون</td><td>08-772E</td><td></td></tr><tr><td>TrisHCL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP1757500</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Rio-Rad</td><td>1706531</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; منصة vivaCT 80</td><td>Scanco الطبية</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

التقنيات الجزيئية والمناعية في نموذج فأر مهندس وراثيا لورم الجهاز الهضمي اللثوي

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

الورم اللحمي المعدي المعوي (GIST) هو الساركوما البشرية الأكثر شيوعا وعادة ما يكون مدفوعا بطفرة واحدة في مستقبلات KIT. عبر أنواع الأورام ، تم تطوير العديد من نماذج الفئران من أجل التحقيق في الجيل التالي من علاجات السرطان. ومع ذلك ، في GIST ، تستخدم معظم الدراسات في الجسم الحي نماذج فأر xenograft التي لها قيود متأصلة. هنا ، نصف نموذجا للفأر المختص بالمناعة والمعدل وراثيا لورم لحمية الجهاز الهضمي يؤوي طفرة KitV558Δ / +. في هذا النموذج ، يتم دفع KIT المتحور ، وهو الجين الورمي المسؤول عن معظم GISTs ، بواسطة مروجه الداخلي مما يؤدي إلى GIST الذي يحاكي المظهر النسيجي والتسلل المناعي الذي شوهد في GISTs البشرية. علاوة على ذلك ، تم استخدام هذا النموذج بنجاح للتحقيق في كل من العلاجات الجزيئية والمناعية المستهدفة. هنا ، نصف تربية وصيانة مستعمرة الفأر KitV558Δ / +. بالإضافة إلى ذلك ، تفصل هذه الورقة علاج وشراء GIST ، وتصريف العقدة الليمفاوية المساريقية ، والأعور المجاور في الفئران KitV558Δ / + ، بالإضافة إلى إعداد العينات للتحليلات الجزيئية والمناعية.

يسمح نموذج الماوس KitV558Δ/+ بالتحقيق في العلاجات في نموذج الماوس المناعي. يبلغ متوسط عمر الفئران V558Δ/+ 8 أشهر بسبب انسداد الأمعاء التدريجي (الشكل 4). الأورام من KitV558Δ / + الفئران تعبر عن العلامات القانونية ل GIST بما في ذلك مجموعة التيروزين كيناز والقناة عبر الغشاء DOG1 (الشكل 5) ، وكذلك عامل النسخ ETV1 (غير معروض). يمكن دراسة الأ...

الهدف من هذه المخطوطة هو وصف نموذج الماوس KitV558Δ/+ وتقنيات التشريح والمعالجة الناجحة لعينات الماوس.

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

يصف بروتوكولنا تربية وصيانة وتشريح ومعالجة العينات لنموذج الماوس الوحيد المختص بالمناعة ، GIST ، المستخدم حاليا. نأمل أن يتمكن الباحثون في المستقبل من استخدام نموذج الماوس هذا من أجل إجراء مزيد من الأبحاث الانتقالية في GIST. تتضمن العلاجات التقليدية في GIST العلاج الجزيئي المستهدف بمثبطات التيروزين كيناز.يمكن هذا النموذج الباحثين من اختبار العلاجات المناعية في GIST. للبدء ، قم بتعقيم جميع الأدوات ، وارتداء القفازات طوال الإجراء ، والحفاظ على حقل معقم. تحضير منطقة شق مع 70 ٪ من الإيثانول.باستخدام المقص ، قم بعمل شق عمودي في خط الوسط بطول سنتيمترين وأدخل تجويف البطن. قم بتحليل أي التصاقات داخل البطن بشكل حاد. لإزالة العقدة الليمفاوية المساريقية المستنزفة ، حدد الأعور وارفع مساريقه بشكل فائق.في منتصف الطريق تقريبا إلى قاعدة المساريق القولون ، حدد العقدة الليمفاوية المساريقية وتشريحها بحدة. حسب الحاجة ، قسم أنسجة العقدة الليمفاوية إلى أثلاثين لعزل البروتين والأنسجة وتعليق الخلية الواحدة. ضع أنسجة العقدة الليمفاوية في 20 ملليلتر من وسط RPMI لتعليق خلية واحدة والحفاظ على الجليد.يتم استبدال الأعور في الغالب ب GIST في الفئران Kit558. لعزل GIST والأعور ، قم بتقسيم التقاطع اللفائفي بعناية من قاعدة الورم. ثم ، قسم الأعور مرة أخرى ، سنتيمترين بعيدين إلى قاعدة الورم.في 50 إلى 60٪ من الفئران Kit558 ، يحتوي رأس الورم على غطاء من الأنسجة الدائرية ، والتي تحتوي عادة على سائل مصلي ، ولكن نادرا ما تحتوي على القيح. تشريح أنسجة الغطاء بشكل حاد بعيدا عن أنسجة الورم. قسم أنسجة الورم والأعور إلى أثلاثين لعزل البروتين والأنسجة وتعليق الخلية الواحدة.بالنسبة للمعلقات أحادية الخلية ، ضع أنسجة الورم أو الأعور في HBSS مع 2٪ FCS ، وهو ما يكفي لتغطية العينة ، والحفاظ على الجليد. صب وسائط RPMI مع عينة العقدة الليمفاوية على مرشح 100 ميكرومتر. انقل الفلتر إلى مخروطي جديد سعة 50 ملليلتر، وقم بهرس العقدة الليمفاوية بالطرف الناعم لمحقنة بلاستيكية سعة 3 ملليلترات.اغسل الفلتر ب 20 ملليلتر من وسائط RPMI. الطرد المركزي للعينات وشفط السوبرناتان. أعد تعليق الكريات في 20 ملليلتر من المخزن المؤقت للخرز واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر.جمع ترشيح الخلية. عد الخلايا باستخدام مقياس الدم. الطرد المركزي للعينات والتخلص من supernatant.ثم ، أعد التعليق في المخزن المؤقت للخرزة لقياس التدفق الخلوي. قم بإعداد مخزن كولاجيناز مؤقت كما هو موضح في مخطوطة النص. ضع GIST في طبق معقم وأضف 2.5 ملليلتر من الكولاجيناز العازل.باستخدام مشرط ومقص معقمين ، قم بفرم الورم حتى يصبح في شظايا دقيقة. استخدم ماصة كبيرة التجويف لشفط الورم والكولاجيناز في أنبوب سعة 50 ملليلتر. احتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة بمعدل 100 دورة في الدقيقة ، ثم قم بإخماد التفاعل بملليلتر من FBS.صب الكولاجيناز مع عينة GIST على مرشح 100 ميكرومتر وهرس الورم مع نهاية ناعمة من حقنة بلاستيكية ثلاثة ملليلتر وجمعها في أنبوب 50 ملليلتر. اغسل الفلتر ب 20 ملليلتر من HBSS. قم بالطرد المركزي للترشيح عند 450 RCF لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية ، ثم تخلص من السوبرناتال.أعد تعليق الكريات في 20 ملليلتر من المخزن المؤقت للخرز واسكبه فوق مرشح 40 ميكرومتر اجمع خلايا الترشيح والعد باستخدام مقياس الدم. جهاز طرد مركزي وشفط السوبرنات ، ثم إعادة التعليق في المخزن المؤقت للخرز لقياس التدفق الخلوي. باستخدام المقص ، قم بتقسيم الأعور طوليا لفضح الغشاء المخاطي الداخلي.قطعها إلى أقسام 0.5 سم وضعها في أنبوب 50 ملليلتر مع خمسة ملليلتر من HBSS و 2٪ FBS. رج بقوة لمدة 30 ثانية وجهاز طرد مركزي على 450 RCF لمدة 20 ثانية. ثم ، تجاهل supernatant.أضف من خمسة إلى 20 ملليلتر من HBSS مع EDTA ثنائي المليمولار. احتضنه عند 37 درجة مئوية عند 100 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. جهاز طرد مركزي وتخلص من السوبرنات ، ثم أعد تعليق الكريات في خمسة إلى 20 ملليلتر من HBSS.رج الخليط بقوة لمدة 30 ثانية ، ثم قم بجهاز الطرد المركزي عند 450 RCF لمدة 20 ثانية وتخلص من supernatant. كرر هذه العملية مرة أخرى. أعد تعليق الكريات في خمسة ملليلترات من الكولاجيناز العازل ، ثم احتضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة عند 100 دورة في الدقيقة.رجه بقوة كل 10 دقائق وقم بإخماد التفاعل باستخدام ملليلترين من FBS. صب الكولاجيناز مع عينة الأعور على مرشح 100 ميكرومتر وهرس مع نهاية ناعمة من حقنة بلاستيكية ثلاثة ملليلتر. اغسل الفلتر ب 20 ملليلتر من HBSS وجمع الترشيح.جهاز الطرد المركزي والتخلص من supernatant. أعد تعليق الكريات في 20 ملليلتر من المخزن المؤقت للخرز واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر. جمع الخلايا المرشحة وعدها باستخدام مقياس الدم.كرر عملية الطرد المركزي مرة أخرى وأعد تعليق الكريات في المخزن المؤقت للخرز لقياس التدفق الخلوي. كان متوسط عمر الفئران Kit558 ثمانية أشهر بسبب انسداد الأمعاء التدريجي. عبرت الأورام من الفئران Kit558 عن العلامات الأساسية ل GIST ، بما في ذلك مجموعة التيروزين كيناز ، والقناة عبر الغشاء Dog1 ، وعامل النسخ ETV1.تمت دراسة الأورام بحثا عن تغييرات في مسار إشارات KIT مثل علامات المصب ERK و AKT أو البيئة الدقيقة المناعية ، والتي تحاكي عن كثب GIST البشري. تم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي أو التصوير المقطعي المحوسب لتتبع حجم الورم كقياس دقيق لاستجابة الورم. يعد تشريح الورم بعيدا عن التقاطع اللفائفي وبعيدا عن غطاء الساق أمرا مهما لالتقاط وزن الورم الحقيقي والتحليل المناعي والجزيئي.داخل GIST ، سمح هذا النموذج بالتحقيق في البيئة الدقيقة للورم ، وكذلك العلاجات المناعية.

molecular-immunologic-techniques-genetically-engineered-mouse-model

Research

JoVE Journal

Cancer Research

أبحاث السرطان

ووصف جيل وتوصيف الخلايا السرطانية T معينة باستخدام الفئران أنسنة هنا. تزرع الأنسجة البشرية والغدة الصعترية المعدلة وراثيا خلايا الجذعية المكونة للدم في الفئران المناعة. هذه النتائج في إعادة تشكيل نظام المناعة البشري هندسيا يسمح لفحص الجسم الحي في المضادة للورم الاستجابات المناعية.

باستخدام الماوس BLT إنساني وساق الموديل خلية مقرها جين ورم العلاج

نصف هنا بروتوكولا فعالا ومتعدد الاستخدامات للحث على الأورام الأرومية الدبقية الجديدة (GBM) ومراقبتها وتحليلها باستخدام الحمض النووي للينقولات المحقون في بطينات الفئران حديثي الولادة. خلايا المنطقة تحت البطينية ، التي تمتص البلازميد ، تتحول وتتكاثر وتولد أورام ذات خصائص نسيجية مرضية ل GBM البشري.

ينقول ساطة دمج البلازميد الحمض النووي في المنطقة Subventricular من الفئران حديثي الولادة لتوليد نماذج جديدة من ورم أرومي دبقي

هنا نصف النموذج والنهج لدراسة وظائف البلاعم السنخية الرئوية في ورم خبيث سرطاني. لإثبات دور هذه الخلايا في ورم خبيث ، تم استخدام النموذج المتزاوي (4T1) لسرطان الثدي بالتزامن مع استنفاد البلاعم السنخية مع الجسيمات الشحمية كلودرونات...

دراسة دور السنخية الضامة في سرطان الثدي ورم خبيث

يصف هذا البروتوكول جيل من الفئران أورام المثانة مثلي في الإناث C57BL / 6J الفئران ورصد نمو الورم.

والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف

ويرد بروتوكول لإنشاء نموذج الفأر المهندسة وراثيا من سرطان القولون والمستقيم عن طريق العدوى الغدة اللحية القطاعية وترصدها عن طريق التنظير القولون عالية الدقة.

نموذج الفأر المهندسة وراثيا لسرطان القولون والمستقيم المتفرقة

الليزر المجهري (LMD) هو تقنية حساسة وقابلة للاستنساخ للغاية التي يمكن استخدامها للكشف عن المسارات التي تتوسط عدم تجانس الورم الدبقي والغزو. هنا، نحن نصف بروتوكول الأمثل لعزل المناطق المنفصلة من أنسجة الورم الدبقي باستخدام الليزر LMD تليها تحليل النسخ.

الليزر التقاط Microdissection من المناطق دون الإقليمية ديوموما للتوصيف المكاني والجزيئي للتغاير داخل الورم، Oncostreams، والغزو

توضح هذه المقالة سير عمل التقنيات المستخدمة لاختبار الوسطاء المرشحين الجدد لورم خبيث سرطان الجلد وآلية (آليات) عملهم.

منصة اكتشاف قوية لتحديد الوسطاء الجدد لورم خبيث سرطان الجلد

يعد استخدام نموذج الورم الأصلي المختص بالمناعة والمدفوع بطفرات المريض الشائعة للاختبار قبل السريري أمرا بالغ الأهمية لاختبارات العلاج المناعي. يصف هذا البروتوكول طريقة لتوليد نماذج فأر ورم في المخ باستخدام التوصيل القائم على التثقيب الكهربائي للحمض النووي البلازميد الذي يمثل طفرات المريض الشائعة ، وبالتالي توفير نموذج فأر دقيق وقابل للتكرار ومتسقة.

نمذجة أورام الدماغ في الجسم الحي باستخدام التوصيل القائم على التثقيب الكهربائي للحمض النووي البلازميد الذي يمثل توقيعات طفرة المريض

لقد طورنا منهجية لتقييم ما إذا كانت أورام الجهاز العصبي في الفئران المعدلة وراثيا تلخص بدقة أمراض نظرائهم من البشر. هنا ، نطبق هذه التقنيات النسيجية ، والمعايير المرضية المحددة ، ومنهجيات الثقافة على الأورام الليفية العصبية وأورام غمد الأعصاب المحيطية الخبيثة الناشئة في نموذج الماوس P 0-GGFβ3.

تحديد وتشخيص وتصنيف أورام غمد الأعصاب المحيطية الخبيثة في نماذج الفئران المعدلة وراثيا

يوضح هذا البروتوكول كيفية توليد أورام نسيلي ملحوظ fluorescently، الذي يعرف وراثيا في ذبابة الفاكهة أقراص تخيلي antennal (EAD) العين /. فهو يصف كيفية تشريح EAD والدماغ من يرقات العمر الثالث وكيفية معالجتها لتصور وتحديد التغييرات التعبير الجيني وغزو الورم.

ال<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تخيلي ورم القرص نموذج: التصور والكمي للالتعبير الجيني وغزو الورم عن طريق الفسيفساء الوراثية

اكتشف تقنيات التشريح ومعالجة العينات في نموذج فأر Kit V558Δ/+ المهندس وراثياً لدراسة أورام الجهاز الهضمي اللثوي. يُمكّن هذا البروتوكول الباحثين من اختبار العلاجات المناعية بدقة.

التقنيات الجزيئية والمناعية في نموذج فأر مهندس وراثيا لورم الجهاز الهضمي اللثوي

استكشف المزيد من الفيديوهات