Name: عزل الخلايا البدائية عن أجنة الدجاج اللاحم (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: تعلم عزل الخلايا البدائية من أنسجة الدهون في أجنة الدجاج اللاحم باستخدام الهضم الإنزيمي والتصفية. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة التمايز الدهني والنمو المبكر للدهون في الدجاج والبشر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يشكر المؤلفون UT AgResearch وقسم علوم الحيوان على دعم وتحسين هذا البروتوكول. تم تمويل هذا العمل من خلال منحة وزارة الزراعة الأمريكية.

<ol><li>Fryar, C. D., Carroll, M. D., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFryar%2C+CD+%22Prevalence+of+overweight%2C+obesity%2C+and+severe+obesity+among+children+and+adolescents+aged+2-19+years%3A+United+States%2C+1963-1965+through+2015-2016%22">Prevalence of overweight, obesity, and severe obesity among children and adolescents aged 2-19 years: United States, 1963-1965 through 2015-2016</a>. , (2018).</li>
<li>Siegel, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+modern+broiler+and+feed+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">Evolution of the modern broiler and feed efficiency.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 375-385 (2014).</li>
<li>Zuidhof, M. J., Schneider, B. L., Carney, V. L., Korver, D., Robinson, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth%2C+efficiency%2C+and+yield+of+commercial+broilers+from+1957%2C+1978%2C+and+2005%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Growth, efficiency, and yield of commercial broilers from 1957, 1978, and 2005.</a> Poultry Science. 93 (12), 2970-2982 (2014).</li>
<li>Poulos, S. P., Dodson, M. V., Hausman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line+models+for+differentiation%3A+preadipocytes+and+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell line models for differentiation: preadipocytes and adipocytes.</a> Experimental Biology and Medicine. 235 (10), 1185-1193 (2010).</li>
<li>Vilaboa, S. D. -A., Navarro-Palou, M., Llull, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+influence+on+stromal+vascular+fraction+cell+yield+obtained+from+human+lipoaspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Age influence on stromal vascular fraction cell yield obtained from human lipoaspirates.</a> Cytotherapy. 16 (8), 1092-1097 (2014).</li>
<li>Speake, B. K., Noble, R. C., McCartney, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+changes+in+lipid+composition+and+lipoprotein+lipase+activity+during+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29-Lipids+and+Lipid+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific changes in lipid composition and lipoprotein lipase activity during the development of the chick embryo.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Lipids and Lipid Metabolism. 1165 (3), 263-270 (1993).</li>
<li>Chen, P., Suh, Y., Choi, Y. M., Shin, S., Lee, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+regulation+of+adipose+tissue+growth+through+hyperplasia+and+hypertrophy+in+the+embryonic+Leghorn+and+broiler%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Developmental regulation of adipose tissue growth through hyperplasia and hypertrophy in the embryonic Leghorn and broiler.</a> Poultry Science. 93 (7), 1809-1817 (2014).</li>
<li>Farkas, K., Ratchford, I. A., Noble, R. C., Speake, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+size+and+docosahexaenoic+acid+content+of+adipocytes+during+chick+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">Changes in the size and docosahexaenoic acid content of adipocytes during chick embryo development.</a> Lipids. 31 (3), 313-321 (1996).</li>
<li>Claver, J. A., Quaglia, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+morphology%2C+development%2C+and+function+of+blood+cells+in+nonmammalian+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Exotic+Pet+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative morphology, development, and function of blood cells in nonmammalian vertebrates.</a> Journal of Exotic Pet Medicine. 18 (2), 87-97 (2009).</li>
<li>Corning Cell Counter Demo Video. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=JWjckEHO6Wg">https://www.youtube.com/watch?v=JWjckEHO6Wg</a> (2022).</li>
<li>Nema, R., Khare, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+animal+cell+culture%3A+Advance+technology+for+modern+research%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Bioscience+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">An animal cell culture: Advance technology for modern research.</a> Advances in Bioscience and Biotechnology. 3 (3), 219-226 (2012).</li>
<li>Regassa, A., Kim, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oleic+acid+and+chicken+serum+on+the+expression+of+adipogenic+transcription+factors+and+adipogenic+differentiation+in+hen+preadipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International%22%5BJournal%5D)">Effects of oleic acid and chicken serum on the expression of adipogenic transcription factors and adipogenic differentiation in hen preadipocytes.</a> Cell Biology International. 37 (9), 961-971 (2013).</li>
<li>Temkin, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+crude+oil%2Fdispersant+mixture+and+dispersant+components+on+PPAR+%CE%B3+activity+in+vitro+and+in+vivo%3A+identification+of+dioctyl+sodium+sulfosuccinate+%28DOSS%3B+CAS%23+577-11-7%29+as+a+probable+obesogen%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Health+Perspectives%22%5BJournal%5D)">Effects of crude oil/dispersant mixture and dispersant components on PPAR γ activity in vitro and in vivo: identification of dioctyl sodium sulfosuccinate (DOSS; CAS# 577-11-7) as a probable obesogen.</a> Environmental Health Perspectives. 124, 112-119 (2016).</li>
<li>Hausman, D. B., Park, H. J., Hausman, G. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHausman%2C+DB+%22Adipose+Tissue+Protocols%22">Adipose Tissue Protocols</a>. , Springer. 201-219 (2008).</li>
<li>Lee, M. J., Wu, Y., Fried, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+protocol+to+maximize+differentiation+of+human+preadipocytes+and+improve+metabolic+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity%22%5BJournal%5D)">A modified protocol to maximize differentiation of human preadipocytes and improve metabolic phenotypes.</a> Obesity. 20 (12), 2334-2340 (2012).</li>
<li>Church, C. D., Berry, R., Rodeheffer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+study+of+adipocyte+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Isolation and study of adipocyte precursors.</a> Methods in Enzymology. 537, 31-46 (2014).</li>
<li>Akbar, N., Pinnick, K. E., Paget, D., Choudhury, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+human+adipocyte-derived+extracellular+vesicles+using+filtration+and+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of human adipocyte-derived extracellular vesicles using filtration and ultracentrifugation.</a> Journal of Visualized Experiments. (170), e61979(2021).</li>
<li>Perlman, D., Giuffre, N. A., Brindle, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Fungizone+in+control+of+fungi+and+yeasts+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Use of Fungizone in control of fungi and yeasts in tissue culture.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 106 (4), 880-883 (1961).</li>
<li>Kuhlmann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prophylactic+use+of+antibiotics+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">The prophylactic use of antibiotics in cell culture.</a> Cytotechnology. 19 (2), 95-105 (1995).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Black+swimming+dots+in+cell+culture%3A+the+identity%2C+detection+method+and+judging+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Black swimming dots in cell culture: the identity, detection method and judging criteria.</a> bioRxiv. , 366906(2018).</li>
<li>Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFreshney%2C+RI+%22Culture+of+animal+cells%3A+a+manual+of+basic+technique+and+specialized+applications%22">Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications</a>. , John Wiley & Sons. 163-186 (2015).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

على الرغم من أن العديد من البروتوكولات الموصوفة جيدا قد أبلغت عن عزل الخلايا الشهية14،15،16،17 ، فقد تم تحسين عزل الخلايا الشهية الجنينية ، والتي يمكن استخدامها للتحليلات الوظيفية لنمو الدهون في وقت مبكر من الحياة وتطورها في فراخ اللاحم. ينتج عن هذا البروتوكول أسلاف الخلايا الشحمية الجنينية عالية الجدوى مع إمكانات تمايز عالية. علاوة على ذلك ، فإن الإجراء المقدم لعزل الخلايا البدائية لا يقتصر عل...

السمنة هي تهديد صحي عالمي لكل من البالغين والأطفال. الأطفال الذين يعانون من زيادة الوزن أو السمنة هم أكثر عرضة بخمس مرات تقريبا للإصابة بالسمنة مثل البالغين ، مما يعرضهم لخطر متزايد بشكل كبير للإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية والسكري والعديد من الأمراض المصاحبة الأخرى. حوالي 13.4٪ من الأطفال الأمريكيين الذين تتراوح أعمارهم بين 2-5 يعانون من السمنة1 ، مما يدل على أن الميل إلى تراكم الدهون الزائدة في الجسم يمكن أن يبدأ في وقت مبكر جدا من الحياة. لأسباب مختلفة جدا ، فإن تراكم الأنسجة الدهنية الزائدة هو مصدر قلق للدجاج اللاحم (نوع اللحوم). اللاحم الحديث فعال بشكل لا يصدق ولكن لا يزال يتراكم المزيد من الدهون مما هو ضروري من الناحية الفسيولوجية 2,3. يبدأ هذا الاتجاه بعد فترة وجيزة من الفقس ويهدر الأعلاف بشكل فعال ، وهو أغلى مكون إنتاج ، عن طريق تخصيصه بعيدا عن نمو العضلات. لذلك ، بالنسبة لكل من الأطفال والدجاج اللاحم ، وإن كان ذلك لأسباب مختلفة للغاية ، هناك حاجة لفهم العوامل التي تؤثر على نمو الأنسجة الدهنية وتحديد طرق للحد من توسع الدهون في وقت مبكر من الحياة.
تتشكل الخلايا الشحمية من الخلايا الدهنية ، وهي خلايا جذعية مشتقة من الأنسجة الدهنية تخضع للتمايز لتطوير خلايا دهنية ناضجة تخزن الدهون. وفقا لذلك ، فإن الخلايا البدائية في المختبر هي نموذج تجريبي قيم لدراسات السمنة. هذه الخلايا ، المعزولة عن الجزء الوعائي اللحمية من المستودعات الدهنية ، يمكن أن توفر فهما أساسيا للمسارات الجزيئية التي تتحكم في تمايز الخلايا الشحمية والتمثيل الغذائي 4,5. تعتبر أجنة الكتاكيت نموذجا تجريبيا مواتيا في الدراسات التنموية لأن زراعة البيض وفقا للجدول الزمني المطلوب يجعل التلاعب التجريبي أسهل ، لأنه يتيح الحصول على الأجنة دون تضحية الأم لمراقبة سلسلة من مراحل نمو الأجنة. علاوة على ذلك ، لا يلزم إجراء عمليات جراحية معقدة وفترات زمنية طويلة للحصول على الأجنة مقارنة بالنماذج الحيوانية الأكبر. لذلك ، يقدم جنين الفرخ فرصة للحصول على الخلايا الدهنية من المراحل المبكرة من تطور الأنسجة الدهنية. تصبح الأنسجة الدهنية تحت الجلد مرئية في الفرخ حول اليوم الجنيني 12 (E12) كمستودع محدد بوضوح يقع حول الفخذ. يتم إثراء هذا المستودع في الخلايا الشحمية عالية التكاثر التي تخضع بنشاط للتمايز تحت إشارات تنموية لتشكيل الخلايا الشحمية الناضجة 6,7. عملية التمايز الشحمي قابلة للمقارنة بين الدجاج والبشر. لذلك ، يمكن استخدام الخلايا البدائية المعزولة من أجنة الكتاكيت كنموذج مزدوج الغرض للدراسات ذات الصلة بالبشر والدواجن. ومع ذلك ، فإن غلة الخلايا الدهنية الأولية تنخفض مع الشيخوخة حيث تنمو الخلايا إلى الخلايا الشحمية الناضجة5.
يعمل البروتوكول الحالي على تحسين عزل الخلايا الدهنية عن الأنسجة الدهنية خلال المرحلة (E16-E18) التي يكون فيها التمايز الشحمي المنشأ وتضخم الخلايا الشحمية في ذروتهما في أجنة الفرخ اللاحم8. يمكن لهذا الإجراء تقييم آثار العوامل التي يتعرض لها الجنين النامي في البيضاوة ، مثل النظام الغذائي للدجاجة ، على تطور الخلايا الشحمية والإمكانات الشحمية خارج الجسم الحي. ويمكنه أيضا اختبار تأثير التلاعب المختلفة (على سبيل المثال ، نقص الأكسجة ، وإضافات المغذيات ، والناهضات الدوائية ، والخصوم) على تكوين الدهون أو مختلف 'omes' (على سبيل المثال ، transcriptome ، metabolome ، methylome) من أسلاف الخلايا الشحمية. كتمثيل للمرحلة المبكرة من تكوين الدهون ، تعد الخلايا التي تم الحصول عليها باستخدام هذا البروتوكول نماذج قيمة للدراسات ذات الصلة بالدواجن والبشر.

<table><tbody><tr><td>1 مل ماصة</td><td>Eppendorf</td><td>Z683825</td><td>ماصة أحادية القناة ، 100 - 1000 وميكرو ؛ L</td></tr><tr><td>1 مل طرف ماصة</td><td>فيشر Scientific</td><td>02-707-402</td><td></td></tr><tr><td>100٪ إيزوبروبانول</td><td>فيشر Scientific</td><td>A426P4</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>25 مل قارورة</td><td>بيركس</td><td>4980-25</td><td></td></tr><tr><td>37٪ فورمالديهايد</td><td>فيشر Scientific</td><td>F75P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>6 آبار لوحة</td><td></td><td>فالكون 353046</td><td></td></tr> لوحة <tr><td>فحص 96 بئر</td> المعالجة بزراعة <td>الأنسجة كوستار</td><td>3632</td><td></td></tr><tr><td>96 بئر ،</td><td>كوستار</td><td>3603</td> معالجة <td>بزراعة الأنسجة</td></tr><tr><td>AdipoRed</td><td>Lonza</td><td>PT-7009</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Gibco</td><td>15290026</td><td></td></tr><tr><td>ممسحة أعلى مقاعد البدلاء (Kimtechwiper)</td><td>كيمبرلي كلارك</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>بيتادين</td><td>أعلى & حتى</td><td>NDC 1167300334</td><td>20٪ حل العمل</td></tr><tr><td>عداد الخلية</td><td>Corning</td><td>6749</td><td></td></tr><tr><td>مصفاة الخلية ، 40 & مايكرو ؛ m</td><td>SPL</td><td>93040</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugaton</td><td>Eppendorf</td><td>5702</td><td></td></tr><tr><td>مصل الدجاج</td><td>جيبكو</td><td>16110082</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب الطرد المركزي المخروطية ، 15 مل</td><td>VWR</td><td>10025-690</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب الطرد المركزي المخروطية ، 50 مل</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Cryovial</td><td>Nunc</td><td>343958</td><td></td></tr><tr><td>ملقط منحني ، 100 مم</td><td>مقص جراحي منحني Roboz</td><td>Surgical RS-5137</td><td></td></tr><tr><td>، 115 مم</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-6839</td><td></td></tr> ماء <tr><td>مقطر</td><td>Millipore</td><td>SYNSV0000</td><td>يتم الاستغناء عنه حسب الحاجة</td></tr><tr><td>DMEM / F12</td><td>HyClone</td><td>SH30023.01</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>2701</td><td>70٪ حل عمل</td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنينية (FBS)</td><td>جيبكو</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>مجهر الفلورسنت</td><td>EVOS</td><td>M7000</td><td></td></tr><tr><td>قارئ الألواح الفلورية</td><td>Biotek</td><td>Synergy H1</td><td></td></tr><tr><td>احباط</td><td>رينولدز</td><td></td><td>رينولدز لفائف رقائق الألومنيوم شديدة التحمل ، 125 قدما مربعا.</td></tr><tr><td>حاوية التجميد</td><td>الحرارية العلمية</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>الجيلاتين</td><td>ميليبور</td><td>4055</td><td>2٪ محلول عمل</td></tr><tr><td>مقياس الدم (غرفة العد)</td><td>كورنينج</td><td>480200</td><td>0.1 مم</td></tr><tr><td>عميق حاضنة</td><td>فيشر Scientific</td><td>6845</td><td></td></tr><tr><td>معقم الأدوات</td><td>VWR</td><td>B1205</td><td></td></tr><tr><td>حمض اللينوليك الأوليك مجهر محلول العمل الحمضي</td><td>Sigma</td><td>L9655</td><td>1x</td></tr><tr><td></td><td>Evos</td><td>AMEX1000</td><td></td></tr><tr><td>ماصة</td><td>حرارية علمية</td> متعددة القنوات <td>4661070</td><td>ماصات 12 قناة ، 30 - 300 وميكرو ؛ L</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td></td> <td>S-7907</td><td></td></tr><tr><td>NaH 2PO 4</td><td></td> <td>S-3139</td><td></td></tr><tr><td>NucBlue</td><td>Invitrogen</td><td>R37605</td><td></td></tr><tr><td>زيت أحمر O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>شاكر المداري</td><td>IKA</td><td>KS130BS1</td><td></td></tr><tr><td>منشفة ورقية</td><td>Tork</td><td>RK8002</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm M</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin / Steptomycin (P / S)</td> <td>Gibco</td><td>15140122</td><td>1x Working</td></tr><tr><td>Solution Petri أطباق ، أطباق</td><td>فالكون</td><td>351029</td><td></td>بتري</tr><tr><td>100 مم ، 60 مم</td><td>Falcon</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Plate Shaker</td><td>VWR</td><td>200</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lysis Buffer</td><td>Roche</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>Reservior Reservior</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td></td></tr><tr><td>دورق صغير ، 100 مل</td><td>Pyrex</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>قارئ لوحة مقياس الطيف</td> الضوئي <td>Biotek</td><td>Synergy H1</td><td></td></tr><tr><td>شاش معقم</td><td>McKesson</td><td>762703</td><td></td></tr><tr><td>ملقط مستقيم ، 120 مم</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-4960</td><td></td></tr><tr><td>مقص مستقيم ، 140 مم</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-6762</td><td></td></tr><tr><td>T-25 قارورة</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>حاضنة</td></tr><tr><td>زراعة الأنسجة</td><td>المعالجة بزراعة الأنسجة مصفاة</td><td>الأنسجة 50144906</td><td></td></tr> العلمية <tr><td>الحرارية ، 250 & micro ؛ m</td><td>بيرس</td><td>87791</td><td></td></tr><tr><td>تريبان بلو داين</td><td>جيبكو</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>تريبسين</td><td>جيبكو</td><td>15400054</td><td>0.1٪</td></tr><tr><td>ملاقط محلول العمل ، 110 مم</td><td>روبوز جراحي</td><td>RS-5035</td><td></td></tr><tr><td>النوع 1 كولاجيناز</td><td>جيبكو</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>حمام مائي</td><td>فيشر ساينتيك</td><td>15-462-10</td><td></td></tr><tr><td>ورق الترشيح Whatman الصف 1</td><td>Whatman</td><td>1001-110</td><td></td></tr></tbody></table>

عزل الخلايا البدائية عن أجنة الدجاج اللاحم

Isolation of Preadipocytes from Broiler Chick Embryos

الخلايا الشحمية الأولية هي نظام تجريبي قيم لفهم المسارات الجزيئية التي تتحكم في تمايز الخلايا الشحمية والتمثيل الغذائي. توفر أجنة الدجاج الفرصة لعزل الخلايا الشهية من المرحلة المبكرة من التطور الدهني. يمكن استخدام هذه الخلية الأولية لتحديد العوامل التي تؤثر على انتشار الخلايا ما قبل الشحمية والتمايز الشحمي المنشأ ، مما يجعلها نموذجا قيما للدراسات المتعلقة بالسمنة في مرحلة الطفولة والسيطرة على ترسب الدهون الزائدة في الدواجن. النمو السريع للأنسجة الدهنية بعد الولادة يهدر الأعلاف بشكل فعال عن طريق تخصيصها بعيدا عن نمو العضلات في الدجاج اللاحم. لذلك ، قد توفر طرق فهم المراحل المبكرة من تطور الأنسجة الدهنية أدلة لتنظيم هذا الميل وتحديد طرق للحد من توسع الدهون في وقت مبكر من الحياة. تم تصميم هذه الدراسة لتطوير طريقة فعالة للعزل ، والثقافة الأولية ، والتمايز الشحمي المنشأ للخلايا الشهية المعزولة عن تطوير الأنسجة الدهنية لأجنة الدجاج اللاحم التجاري (نوع اللحوم). تم تحسين الإجراء لإنتاج خلايا ذات صلاحية عالية (~ 98٪) وزيادة القدرة على التمايز إلى خلايا دهنية ناضجة. تدعم هذه الطريقة البسيطة لعزل الخلايا المعقدة، وثقافتها، وتمايزها التحليلات الوظيفية لنمو الدهون وتطورها في الحياة المبكرة.

تشبه الخلايا الأولية البدائية من الناحية المورفولوجية الخلايا الليفية ، مع أشكال غير منتظمة تشبه النجوم ونواة مركزية (الشكل 2A-C). تلتصق الخلايا بسهولة بالبلاستيك المزروع بالأنسجة وتبدأ في التكاثر بعد فترة وجيزة من التعلق. فهي تميز بسرعة وتتراكم قطرات الدهون (الشكل 3D) عند تزويدها بالأحماض الدهنية في الوسائط. الجدوى (98 ٪ ، على أساس استبعاد الصبغة) المبلغ عنها في العزلات الممثلة هنا نموذجية. في حين أن الخلايا قوية إلى حد ما ، فإ...

يصف هذا البروتوكول طريقة بسيطة لعزل الخلايا الدهنية من الأنسجة الدهنية في أجنة اللاحم. تتيح هذه الطريقة العزل مع غلة عالية ، والثقافة الأولية ، والتمايز الشحمي للخلايا الدهنية. قام تلطيخ الزيت الأحمر O وبقع الدهون / الحمض النووي بقياس القدرة الشحمية للخلايا المعزولة المستحثة بوسائط التمايز.

Primary preadipocytes are a valuable experimental system for understanding the molecular pathways that control adipocyte differentiation and metabolism. ...

الخلايا الدهنية الأولية هي نظام تجريبي قيم لفهم المسارات الجزيئية التي تتحكم في استقلاب الخلايا الشحمية. توفر أجنة الدجاج الفرصة لعزل الخلايا الشهية من المرحلة المبكرة من تطور الخلايا الشحمية. تم تحسين هذه الطريقة لإنتاج خلايا ذات صلاحية عالية وزيادة القدرة على التمايز إلى خلايا دهنية ناضجة ، والتي يمكن استخدامها للتحليل الوظيفي لنمو الدهون في وقت مبكر من الحياة وتطور الجنين في الكتاكيت.عملية التمايز الشحمي قابلة للمقارنة إلى حد كبير بين الدجاج والبشر. لذلك ، يمكن استخدام الخلايا البدائية المعزولة كنموذج مقترح مزدوج للدراسات ذات الصلة بالبشر والدواجن. لبدء مسحة جسم الجنين مع 70 ٪ من الإيثانول.ثم لمنع التداخل أثناء الترشيح في خطوات لاحقة بعد الهضم فرك سطح الجلد بلطف مع شاش معقم لإزالة الريش. ثم قطع الجلد بين الساقين ومنطقة البطن للكشف عن زوج من مستودعات الدهون الفخذية. استخدم ملقط منحني بيد واحدة لتثبيت الجلد حول الساق وإزالة الدهون تحت الجلد الفخذية بلطف.من ناحية أخرى. في وقت لاحق ، استخدم ملقط منحني لسحب المستودع برفق بعيدا عن الساق. انقل الأنسجة إلى أنبوب 15 ملليلتر يحتوي على خمسة ملليلترات من وسائط التجميع وكرر التشريح للجانب الآخر من وسادة الدهون.الآن ، انقل منصات الدهون التي تم جمعها إلى طبق بتري 60 ملم يحتوي على محلول تعقيم وشطفه لفترة وجيزة عن طريق تدوير الطبق عدة مرات. ثم شطف محلول التعقيم عن طريق نقل منصات الدهون إلى طبق بتري 60 ملم يحتوي على PBS. قم بتدوير اللوحة بلطف ومرة أخرى ، اغسلها باستخدام PBS.لهضم الأنسجة الدهنية ، انقلها إلى أنبوب 15 ملم يحتوي على محلول إنزيمي قبل التدفئة. ثم اغمر زوجا من المقص المستقيم الطويل في الأنبوب وأخيرا قم بتقطيع الأنسجة الدهنية في المحلول إلى قطع صغيرة قدر الإمكان. انقل الأنسجة المفرومة والمحلول الأنزيمي إلى قارورة معقمة سعة 25 ملليلتر.لف القارورة بفيلم البارافين وضع القارورة في حاضنة اهتزاز مدارية عند 37 درجة مئوية للهضم. بعد الهضم ، ماصة بلطف لأعلى ولأسفل لتخلط جيدا. ثم قم بإزالة أي أجزاء من الأنسجة غير المهضومة والحطام عن طريق التصفية من خلال مصفاة أنسجة 250 ميكرومتر في أنبوب 15 ملليلتر عن طريق السحب.الآن ، قم بإزالة الخلايا الملتصقة بالقارورة عن طريق شطف القارورة بأربعة ملليلترات من وسائط النمو وتصفية تعليق الخلية في نفس الأنبوب الذي يبلغ حجمه 15 ملليلتر. بعد ذلك شطف المصفاة عن طريق سحب وسائط النمو مرة أخرى لإزالة أي خلايا محاصرة في الفلتر. جهاز طرد مركزي بسرعة 300 مرة G لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة لتكوير جزء الخلية وشفط السوبرنات دون إزعاج بيليه الخلية.أعد تعليق الكريات بلطف في ملليلتر واحد من المخزن المؤقت لتحلل خلايا الدم الحمراء ، واخلطها جيدا عن طريق السحب واحتضنها لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بتخفيف الخلايا عن طريق إضافة خمسة ملليلترات من وسائط النمو إلى الأنبوب الذي يحتوي على الخلايا ومزجها بلطف عن طريق السحب. الآن ، ماصة الخلايا على مصفاة خلية 40 ميكرومتر وتصفيتها في أنبوب جديد 50 ملليلتر.ثم شطف المصفاة بخمسة ملليلترات إضافية من وسائط النمو وقم بتكسير الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 300 مرة G لمدة سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة. شفط بعناية supernatant. إعادة تعليق بيليه الخلية المتبقية في ملليلتر واحد من وسائط النمو عن طريق السحب لتحديد كثافة الخلية وقابليتها للبقاء، امزج 10 ميكرولترات من كل عينة باللون الأزرق التربان عن طريق السحب.قم بتحميل 10 ميكرولترات من الخليط على مقياس الدم وقم بحساب الخلايا. أظهر تحليل الخلايا الشهية الأولية بعد 24 و 48 و 72 ساعة مورفولوجيا الخلايا الطبيعية وعددها. أظهر الحث الأديبوجيني للخلايا الدهنية الأولية تمايزا سريعا وتراكما لقطرات الدهون.أدى التعامل العدواني مع الخلايا الدهنية أثناء العزل إلى تلف الخلايا وانخفاض عدد الخلايا. يمكن ملاحظة التلوث الميكروبي على الرغم من اتخاذ تدابير وقائية. يشير تلطيخ الدهون بالزيت الأحمر O إلى أن الخلايا الشهية تبدأ بسرعة في تطوير قطرات دهنية تحت التحفيز الشحمي المنشأ ويتقدم التراكم بمرور الوقت كما لوحظ في 24 و 48 و 72 ساعة.تم قياس تراكم الدهون بالنسبة لعدد الخلايا باستخدام بقع الدهون والحمض النووي. زاد كل من تراكم الدهون وتكاثر الخلايا بمرور الوقت. يمكن ملاحظة انخفاض عدد الخلايا أو الخلايا التالفة عندما يتم هضم كسور الأنسجة لفترة طويلة جدا.لذلك ، يوصى بعدم تجاوز ساعة ونصف من الهضم. يمكن استخدام الخلايا الدهنية المعزولة لدراسات التعبير الجيني. يمكن الحصول على ما يكفي من الحمض النووي الريبي للاستخدام في تخليق cDNA ومتابعة qPCR أو RNAseq.

isolation-of-preadipocytes-from-broiler-chick-embryos

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

هذه المادة سوف توفر وسيلة لعزل وزراعة السمان أو الدجاج...

العزلة وثقافة الطيور الجنينية الخلايا الاصلية صمامي

يوضح هذا الفيديو عزل الغشاء المشيمي الحامل للورم عن جنين الدجاج. يمكن استخدام CAM المحصود لمزيد من التطبيقات النهائية.

حصاد غشاء الفصيلة النارية للكتيكوت: طريقة لعزل غشاء المشيمة اليمي الحامل للورم من بيض الدجاج

نماذج ثقافة الخلية توفر تحكم مفصلة على الظروف البيئية وبالتالي توفر منصة قوية لتوضيح جوانب عديدة من بيولوجيا الخلايا العصبية. نحن تصف طريقة سريعة وغير مكلفة، وموثوق بها لعزل وفصل، والثقافة الخلايا العصبية الحسية من الأجنة الفرخ. كما تقدم تفاصيل إعداد الطبقات التحتية ومناعية.

العزلة وثقافة فصل الخلايا العصبية الحسية من الفرخ الأجنة

هنا، نحن وصف إيمونوبريسيبيتيشن الكروماتين (شريحة) ورقاقة seq المكتبة إعداد بروتوكول لإنشاء التشكيلات الجانبية ابيجينوميك العالمية من عينات الدجاج منخفض-وفرة الجنينية.

الكروماتين إيمونوبريسيبيتيشن (رقاقة) بروتوكول لعينات جنينية وفرة منخفضة

توفر هذه المقالة طريقة لعزل نقية الأنسجة الجنينية من أجنة السمان والدجاج التي يمكن دمجها إلى النموذج السابقين فيفو تشيميريك الأجهزة.

عزل الأنسجة الجنينية وتشكيل أجهزة تشيميريك السمان-الدجاج باستخدام المثال الغدة الصعترية

يصف هذا التقرير بروتوكولا للعزل المتزامن للخلايا الأولية قبل الخلايا البنية والبيضاء من الفئران حديثي الولادة. يمكن زراعة الخلايا المعزولة في الثقافة وتحث على التفريق إلى خلايا بيضاء وبنية ناضجة تماما. تمكن هذه الطريقة من التوصيف الوراثي والجزيئي والوظيفي للخلايا الدهنية الأولية في الثقافة.

عزل وتمايز الخلايا التمهيدية الأولية البيضاء والبنية من الفئران حديثي الولادة

هذه طريقة فعالة لفحص المكثفات أو محركات الانبثاث السرطاني. يتم حقن الخلايا ، التي يتم تحويلها باستخدام مكتبة التعبير ، في الأوعية الدموية للغشاء المشيمي للدجاج لتشكيل مستعمرات منتشرة. يتم استئصال المستعمرات التي انخفضت أو زادت من الغازية ، وتوسيعها ، وإعادة حقنها لتأكيد النمط الظاهري ، وأخيرا ، تحليلها باستخدام تسلسل الإنتاجية العالية.

اكتشاف المنظمين النقيلي باستخدام نموذج الغشاء السريع والكمي داخل الفرخ Chorioallantoic

يصف هذا البروتوكول العزل شبه الآلي للجزء الوعائي اللحمي (SVF) من الأنسجة الدهنية للفئران للحصول على الخلايا الدهنية وتحقيق تمايز الخلايا الشحمية في المختبر. استخدام مفكك الأنسجة لهضم كولاجيناز يقلل من التباين التجريبي ويزيد من التكاثر.

عزل شبه آلي للجزء الوعائي اللحمي من الأنسجة الدهنية البيضاء باستخدام مفكك الأنسجة

هنا ، نصف بروتوكولا لفصل صفار البيض والخلايا الحبيبية وخلايا theca في بصيلات ما قبل الإباضة للطيور. يتيح هذا التعامل الدقيق إجراء تحقيقات نقدية في دور هذه الطبقات في الوظيفة الإنجابية ، مما يساعد على فهم تطور البصيلات ، والتنظيم الهرموني ، وأبحاث الأمراض من أجل تعزيز الإنتاجية الزراعية والرؤى الطبية الحيوية.

فصل حبيبات بصيلات الطيور قبل الإباضة وطبقات خلايا الثيكا للتطبيقات النهائية

قد يكون عرض جنين الدجاج والوصول إليه أثناء التطور أمرا صعبا. لقد قمنا بتطوير طريقة ex ovo بسيطة وفعالة من حيث التكلفة ويمكن استخدامها بسهولة في الفصل الدراسي أو بيئة البحث. توفر هذه الطريقة الوصول إلى الجنين في المراحل المتأخرة من التطور الجنيني (HH 40).

الأمثل السابقين البيضة التثقيف من الفرخ الأجنة إلى مراحل متقدمة من التطوير

تعلم عزل الخلايا البدائية من أنسجة الدهون في أجنة الدجاج اللاحم باستخدام الهضم الإنزيمي والتصفية. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة التمايز الدهني والنمو المبكر للدهون في الدجاج والبشر.

عزل الخلايا البدائية عن أجنة الدجاج اللاحم

استكشف المزيد من الفيديوهات