مفاعل حيوي متعدد التيار للتروية مدمج مع تجزئة المخرج لزراعة الخلايا الديناميكية

تساعد هذه الطريقة على فهم كيفية تغير معدلات الإفراز مع مرور الوقت وكيف تستجيب الخلايا للإشارات الصلبة المتغيرة زمنيا. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أن تكلفتها المنخفضة ، تتطلب القليل من التدريب ويمكن تكييف إعداد نظام الوفرة للتجارب الجديدة. ابدأ بملء حقنة واحدة بمحلول خلفية وقم بتحميلها في مضخة المحقنة الأولى.

املأ حقنة أخرى بمحلول التتبع وقم بتحميلها في مضخة المحقنة الثانية. قم بتوصيل كلا المحاقن باثنين من المنافذ الثلاثة لجهاز إيقاف رباعي الاتجاهات باستخدام موصلات luer. أغلق الموقوف إلى محلول الخلفية وضخ محلول التتبع في المتوقف حتى يقطر المنفذ المفتوح.

أوقف المضخة ولا تقم بضبط المحقنة أكثر. تأكد من دفع قضيب تحريك مضخات المحقنة لأعلى ضد غاطسات المحقنة بحيث يبدأ التدفق على الفور عند بدء تشغيل المضخة. أغلق الموقوف على محلول التتبع وقم بضخ محلول الخلفية في المتوقف حتى يتم طرد جميع حلول التتبع المتبقية من المنفذ المفتوح.

أوقف المضخة ولا تقم بضبط المحقنة أكثر. قم بإعداد مكون نظام التدفق المطلوب لتحليل RTD. أدخل الطرف في موزع طرف ماصة ومحلول خلفية المضخة من خلال المكون حتى يتم ملؤه بالكامل.

اضبط مضخة محلول التتبع على معدل التدفق المطلوب. أغلق الموقوف إلى حل الخلفية وابدأ تدفق حل التتبع. في الوقت نفسه ، ابدأ جامع الكسور.

استمر في تدفق محلول التتبع لفترة قصيرة من الزمن لتقريب إدخال الدافع للمقتفي. يوصى باستخدام مدة نبض تبلغ 10 دقائق ل RTDs بمعدل تدفق يبلغ ملليلتر واحد في الساعة. أوقف مضخة محلول التتبع في نهاية فترة نبض محلول التتبع.

أغلق السدادة بسرعة إلى حل التتبع وابدأ تدفق محلول الخلفية بنفس معدل التدفق. اسمح لمحلول الخلفية بالتدفق وجمع الكسور حتى يمر كل المقتفي عبر النظام وإلى الكسور التي تم جمعها. في ظل ظروف معقمة ، أدخل السدادات بالإبر في مزارع لوحة البئر مع سحب الإبر.

بعد وضع السدادة في مكانها ، اخفض الإبر إلى الارتفاع المطلوب للتروية لأن ارتفاع إبرة المخرج يحدد مستوى السائل المستقر. قم بتغطية الإبر بأغطية لوير ذكورية واحتفظ بلوحة البئر بأكملها في حاضنة عند 37 درجة مئوية حتى الاستخدام. قم بإعداد الوسائطين لاستخدامهما في التروية ، مع وضع علامة على الوسيط الذي سيتم توزيعه أولا على أنه واحد والوسيط الآخر على أنه اثنان.

لكي يتم تشغيل كل ثقافة ، املأ حقنة واحدة بحقنة متوسطة لتدوم طوال مدة انتعاشها بالإضافة إلى حجم كاف لملء نظام التروية في البداية. املأ حقنة ثانية بحقنة متوسطة لمدة عامين لتدوم طوال مدة تقاعدها. قم بتوصيل كلا الحقنتين باثنين من المنافذ الثلاثة لجهاز إيقاف رباعي الاتجاهات.

قد تكون هناك حاجة إلى طول الأنابيب لتوصيل المحاقن ب stopcocks. قم بإعداد السدادات عن طريق إغلاق السدادة لمتوسط واحد وتوزيع اثنين متوسطين في السدادة حتى تبدأ للتو في التنقيط من المنفذ المفتوح. ثم أغلق المودكوك للمتوسط اثنين وقم بتوزيع المتوسط واحد في الموقوف حتى يتم طرد كل الوسط المتبقي من المنفذ المفتوح.

قم بتوصيل أنبوب المنبع بمنفذ التوقف المفتوح باستخدام موصل أنثى إلى موصل لواء. أدخل موصل لواء من الذكور إلى القضيب على الطرف الآخر من الأنبوب. قم بتوزيع واحد متوسط من المحقنة حتى يتم ملء أنبوب المنبع بالوسط والمضي قدما في إعداد الأنابيب النهائية كما هو موضح سابقا.

أدخل موصل لوير من الذكور إلى اللوح في أحد طرفي الأنابيب النهائية وقم بتغطيته بغطاء لوير أنثوي. أحضر بعناية جميع الأنابيب والمحاقن ولوحة البئر إلى الحاضنة التي سيتم استخدامها للتروية. ضع مضخة المحقنة وجامع الكسر في المواقع المطلوبة بالقرب من الحاضنة.

ضع مضخة المحقنة فوق الحاضنة أو بالقرب منها وضع جامع الكسور بجوار الحاضنة بالقرب من الميناء. قم بتحميل المحاقن في المضخة. قم بتجميع الأطراف المغطاة لجميع أنابيب المنبع والمصب معا وادفعها من خارج الحاضنة إلى الداخل من خلال المنفذ.

أدخل الأطراف المفتوحة لأنابيب المصب في أطراف ماصة التوزيع الخاصة بموزع مجمع الكسور متعدد الرؤوس. داخل الحاضنة ، اسحب أكبر قدر ممكن من الركود في أنابيب المنبع إلى الحاضنة لزيادة طول الأنابيب التي يمكن من خلالها للوسط المتدفق تلقي الحرارة وثاني أكسيد الكربون. لكل بئر موصول ، قم بفك الغطاء بسرعة الإبر وأنابيب المنبع والمصب لهذا البئر ، ثم قم بتوصيلها مع موصلات luer الخاصة بها.

بمجرد توصيل جميع الأجزاء ، قم بتشغيل مضخة المحقنة لفترة وجيزة بسرعة عالية نسبيا لضمان تدفق جميع التيارات بشكل صحيح. في هذه المرحلة ، إذا كان من المرغوب فيه بدء التجربة مع أنابيب المصب المليئة بالوسط ، فاستمر في تشغيل المضخة حتى يتم ملء كل شيء ، وإلا ، أوقف المضخة. اضبط معدل تدفق مضخة المحقنة على متوسط واحد وتواتر جمع الكسور وابدأ تشغيل كلا الجهازين في وقت واحد لبدء التجربة.

عندما يحتاج المصدر المتوسط إلى التغيير ، أوقف مضخة المحقنة بسرعة للمصدر المتوسط. أدر السدادة مغلقة إلى متوسطة واحدة وابدأ تشغيل مضخة المحقنة لمتوسطتين. إذا رغبت في ذلك لاحقا ، فقم بتبديل المصدر مرة أخرى إلى مصدر متوسط بالمثل.

جمع الكسور لمدة التجربة المطلوبة. تم قياس تركيزات التتبع في الكسور من تجربتين RTD وإدخالها في RTD من نص MATLAB للبيانات لإنتاج RTDs. الأنابيب المفردة وقطع متعددة من الأنابيب في سلسلة تتناسب بشكل جيد مع نموذج تشتت محوري واحد وإضافة لوحة بئر 48 في الخط تسببت في انحراف ضئيل يسمح لكل من RTD أنبوب متر واحد و RTD للنظام بأكمله بالتناسب مع وظائف التشتت المحوري.

تم عرض مثال على ملاءمة نموذج ضعيف باستخدام نموذج التشتت المحوري المركب على بيانات RTD لأنبوب متر واحد وتم رسمه جنبا إلى جنب مع البيانات. تم تغيير تخمينات المعلمة الأولية لإنتاج نموذج جيد مناسب حيث كان تاو مساويا تقريبا لحجم نظام التروية مقسوما على معدل التدفق الحجمي. تم تعريف نبضة 90 دقيقة من TNF-alpha على أنها إشارة الإدخال إلى النظام وتم الالتفاف مع أنبوب RTD الذي يبلغ طوله مترا واحدا لتحديد إشارة TNF-alpha عند مدخل لوحة البئر.

كما تم الخلط بين إشارة الإدخال وRTD للنظام بأكمله لتحديد إشارة TNF-alpha عند مخرج النظام في الكسور المجمعة. تم تصميم خلايا HEK 293 لإفراز GLuc مدفوعا بمروج يحتوي على عنصر استجابة NF-kappaB. كشفت التجربة عن زيادة كبيرة في التعبير وانخفاض بطيء في تعبير GLuc مدفوعا ب NF-kappaB بعد التعرض ل TNF-alpha.

يتم وصف الاختلافات في النظام في الورقة المصاحبة ، بما في ذلك إعداد أبسط للتجارب التي لا تتطلب إدخال إشارات وتعريض الخلايا لملفات تعريف المذاب الضام فارما-هو.