استخدام الملقط البصري المزدوج والموائع الدقيقة للدراسات أحادية الجزيء

يعد ربط المنافذ بالتزاوج مع المحاقن مع الأنابيب أمرا بالغ الأهمية لأنه عندما يتم ذلك بشكل صحيح ، لا توجد تسريبات ، ولا توجد فقاعات في خلية التدفق ، ويمكن إجراء التجارب بشكل متكرر باستخدام نفس خلية التدفق على مدى عام واحد مع الاستخدام الدقيق. هنا ، سيتم تقديم طريقتين بسيطتين لإرفاق الموصلات بخلايا التدفق. هذه سهلة ، وقابلة للتكرار ، وتسمح للمحقق بتكييف خلية التدفق بسهولة مع احتياجاتهم دون الكثير من المتاعب.

تم استخدام خلايا التدفق هذه مع وضع تجارب جزيء واحد في الاعتبار. على وجه الخصوص ، ما نسميه الكيمياء الحيوية البصرية ، ولكن يمكن استخدامها في أي دراسة تتطلب الموائع الدقيقة وفي الحالات التي يتم فيها استخدام تدفق سائل الصفيحة. لذلك ، لتجنب الأخطاء ، بدلا من استخدام خلايا التدفق القيمة لإنشاء التقنيات ، أقترح التدرب على شريحة زجاجية أو زلة غطاء أولا.

سيمكن ذلك المرء من التعرف على الزجاج أو مواد PDMS لمعرفة كيفية التعامل معها ومقدار القوة التي يجب تطبيقها عند إدخال الأنابيب أو ربط الموصلات. سيتطلب ذلك التضحية ببعض الموصلات ولكنها أرخص بكثير من خلايا التدفق. ابدأ بوضع خلية التدفق على سطح مستو نظيف.

امسك أنبوب PTFE بثلاثة ملليمترات من الطرف الحر بالملقط وادفع الأنبوب إلى المنفذ. كرر هذا الإجراء لكل منفذ من المنافذ المتبقية. قم بتوصيل منافذ المدخل بمضخة المحقنة والمخرج بزجاجة نفايات.

املأ كل حقنة زجاجية بملليلتر واحد من الميثانول الضوئي الطيفي ، وأرفقها بصمام التبديل. تأكد من أن الصمام يحتوي على مخرج موجه للنفايات وتطهير كل خط ب 50 ميكرولتر من الميثانول. قم بتبديل موضع المخرج إلى خلية التدفق وضخ 800 ميكرولتر من الميثانول عبر خلية التدفق بمعدل تدفق 100 ميكرولتر في الساعة لتبليل الأسطح والقضاء على الفقاعات.

في اليوم التالي ، كرر هذه العملية باستخدام 800 ميكرولتر من الماء عالي النقاء. خلية التدفق جاهزة الآن للاستخدام. إذا كان سيتم استخدام موصلات أنابيب مناسبة للضغط ، فقم بإزالة الشريط اللاصق بعناية من جانب واحد من الموصل وضعه فوق الفتحة الموجودة في شريحة المجهر.

اضغط لأسفل لبضع ثوان. كرر العملية للموصلات المتبقية. ثم ضع خلية التدفق على سطح مستو نظيف.

امسك أنبوب PTFE على بعد ثلاثة ملليمترات من الطرف الحر وادفع الأنبوب إلى الفتحة الموجودة في المنفذ. كرر هذا الإجراء لكل منفذ من المنافذ المتبقية. قم بتوصيل الأنابيب من المداخل بصمامات التبديل.

ضع الملحق إما على سطح نظيف ومسطح أو على مشعب مصمم خصيصا لتثبيت خلية التدفق والموصلات في مكانها أثناء حدوث الترابط. ضع خلية التدفق على الجزء الغائر من المشعب ثم ضع كمية صغيرة من الغراء الزجاجي في الجزء السفلي من المجموعة وأدخل الختم. ضع منفذ النانو فوق أحد فتحات الدخول على شريحة المجهر.

ادفع برفق لأسفل وثبت في مكانه بدون حركة جانبية. كرر العملية للمنافذ المتبقية. السماح ليجف أو المشبك في مكانه في المشعب.

قم بإزالة خلية التدفق برفق من المشعب وتأكد من محاذاة التجميعات جيدا مع منافذ الدخول في خلية التدفق. ضع خلية تدفق على مرحلة المجهر وقم بتوصيل الأنبوب باستخدام موصلات الإصبع الضيقة. املأ كل حقنة زجاجية بملليلتر واحد من الميثانول الطيفي الضوئي.

قم بتوصيل كل حقنة بصمام التبديل. تأكد من أن الصمام يحتوي على مخرج موجه للنفايات وتطهير كل خط ب 50 ميكرولتر من الميثانول. قم بتبديل موضع المخرج إلى خلية التدفق وضخ 800 ميكرولتر من الميثانول عبر خلية التدفق بمعدل تدفق 100 ميكرولتر في الساعة.

في اليوم التالي ، كرر هذه العملية باستخدام 800 ميكرولتر من الماء عالي النقاء. يظهر قياس خرج الطاقة هنا. يتم قياس خرج الطاقة من الليزر قبل تثبيت رأس الليزر في التخطيط البصري.

بمجرد الانتهاء من محاذاة المصيدة، يتم قياس قدرة الحزمة بعد هدف 100 x لكل مصيدة. توضح الصور الاصطياد البصري المستقر لخرزات فلورية ميكرومتر واحد. هنا F هو فخ ثابت ، و M هو فخ متنقل.

مع مصيدة المحمول في وضع المسح تتحرك من خلال دائرة صغيرة أو كبيرة في 30 هرتز. تدفق السوائل داخل خلية التدفق رقائقي. يوضح الرسم التخطيطي خلية التدفق من الأعلى لإثبات أن الانتشار بين القنوات هو المصدر الرئيسي للخلط بين تيارات السوائل المجاورة.

تشير الأسهم الزرقاء إلى اتجاه التدفق والتدفقات الفردية ملونة وبيضاء ورمادية فاتحة وبيضاء. يشار إلى المناطق المتسعة للانتشار العرضي بين القنوات باللون الأحمر. يظهر الجزء الداخلي صورة مضان لتيارات السوائل المجاورة عند تكبير 10 مرات مع مجمعات خرزة الحمض النووي الفلورية في التيار السفلي والمخازن المؤقتة فقط في التيار العلوي.

البقع البيضاء في التيار العلوي هي ضوضاء لقطة من كاميرا CCD. ملف تعريف التدفق وخلايا التدفق الصفحي مكافئ. يتم عرض خلية التدفق من الجانب ويشار إلى اتجاه التدفق فوق كل خلية.

تتأثر سرعة الخرزة الخطية بسرعة المضخة وتركيز السكروز. تتأثر القوة المعارضة على الخرزة بلزوجة المحلول. يؤثر قطر الخرزة على القوة على الخرز تحت التدفق.

عند محاولة هذا الإجراء ، تأكد من أن المنطقة التي تعمل فيها نظيفة وأنك قمت بتنظيف الأسطح الزجاجية باستخدام الميثانول أو الأسيتون من الدرجة الطيفية. في هذه المرحلة ، يجب أن يكون لديك خلية تدفق يتم تصنيعها إلى مضخة المحقنة الخاصة بك وأنت الآن جاهز لتقديم الحلول الخاصة بك وبدء تجارب الملقط البصري. مكن استخدام خلايا التدفق ، التي يمكن استخدامها لفترات طويلة من الزمن ، الباحثين من التحقيق في مجموعة متنوعة من تفاعلات الجزيء الواحد حيث يتم قياس أي من القوى ، ويتم تصور التفاعلات عن طريق التألق أو مزيج من الاثنين معا.