استخدام قطب كهربائي ثنائي القطب لإنشاء نموذج فأر صرع الفص الصدغي عن طريق إشعال اللوزة كهربائيا

اقترح هذا البروتوكول نموذجا للصرع مع اللوزة كأصله. إنه يمهد الطريق للتحقيق في هياكل الفص الصدغي المتوسط. يمكن تفسير هذا النموذج على أنه أساس التجربة.

حيث أن هذا البروتوكول هو وسيلة منخفضة التكلفة وفعالة بحيث يمكن تنفيذه بسرعة في معظم المختبرات. سيكون Yongchang Lu ، وهو خريج في مختبرنا ، دليلا على الإجراء. ابدأ بجمع المكونات المعدة مسبقا بدءا من قطع طولها سنتيمترين من سلك التنغستن المطلي بالتفلون بقطر دب يبلغ 76.2 ميكرومتر.

قطعة واحدة من الأسلاك الفضية بقطر دب 127 ميكرومتر من نفس الطول ومجموعة واحدة من اثنين من دبابيس الحبل المقيسة. استخدم ولاعة لحرق أحد طرفي كل سلك تنغستن لإزالة خمسة ملليمترات من طلاء العزل. قشر قسما من الأسلاك متعددة الخيوط فائقة الدقة.

قم بفك الغلاف من الأسفل إلى الطرف العلوي حيث يبدأ الظلام ويستمر إلى الأعلى. اجمع بين هذا السلك فائق الدقة وسلك التنغستن عن طريق الضغط على أحد طرفيه ولف الطرف الآخر برفق ، مما يتيح تشابك المادتين معا بسهولة. اسحب برفق للتأكد من أن الأسلاك ملفوفة بإحكام وقطع السلك الزائد فائق الدقة.

حاول الحفاظ على سلك التنغستن مستقيما طوال العملية. ثبت دبوس الحبل على المشبك الموجود على طاولة اللحام بحيث يكون الجانب الأطول من المسامير متجها للخارج. استخدم إبرة المحقنة لالتقاط بعض معجون اللحام وتطبيقه على المسامير.

تسخين شعلة اللحام إلى 320 درجة مئوية. قم بإذابة وتشويه بعض أسلاك القصدير الخالية من الرصاص بطرف الشعلة. تداخل الطرف العلوي من سلك التنغستن بإبرة واحدة من دبابيس الحبل واستخدم اللحام الموجود على الشعلة لربط سلك التنغستن بالدبوس.

قم بلحام سلك تنغستن آخر وسلك فضي آخر بدبوس الحبل بنفس الطريقة بحيث يتوافق كل سلك مع إبرة. قطع اثنين من الأنابيب القابلة للتقلص بالحرارة أطول قليلا من الطرف العلوي لسلك التنغستن. ضعها على مفصل اللحام لسلكين من التنغستن لضمان تغطية الجزء الموصل بالكامل في الأنبوب بحيث لا يتم وضع دائرة سلكي التنغستن في سلسلة.

قم بإزالة القطب من مشبك طاولة اللحام وأمسك القطب برفق باستخدام كماشة كبيرة حيث يسهل على الأقطاب الكهربائية أن تفقد شكلها عند تسخين الأنبوب القابل للتقلص. استخدم مشبك توصيل حراري جيد بقوة أكبر قليلا. قم بتشغيل مجرى الهواء وتسخينه حتى تصل درجة الحرارة إلى 320 درجة مئوية.

انفخ الأنبوب القابل للتقلص بالحرارة لعدة ثوان حتى يتم شده. تعزيز القطب مع لاصق تذوب الساخنة. امسك سلكي التنغستن ولفهما معا ، مع إبقاء نهاياتهما متباعدتين.

قم بقص أسلاك التنغستن الملتوية إلى حوالي 10 ملم في الطول بحيث لا يتجاوز الفصل في النهايات 0.5 ملم. تحقق من الأقطاب الكهربائية بمقياس متعدد عن طريق وضع شريط واحد من المتر المتعدد على الجانب غير الملحوم من دبابيس الحبل ولمس نهاية سلك التنغستن أو السلك الفضي برفق إلى الشريط الآخر. التحقق مما إذا كانت الدائرة سلسة.

تأكد من عدم وضع الخطوط في سلسلة. انزع خمسة ملليمترات من الجلد العازل في كل طرف لكشف السلك المعدني بالداخل. أضف قسما من الأنابيب القابلة للتقلص بالحرارة إلى كل سلك بداية.

قم بلحام كل سلك بقابس موصل جهاز EEG. تقليص الأنبوب القابل للتقلص بالحرارة بالهواء الساخن. أضف قسما من الأنبوب القابل للتقلص بالحرارة إلى كل سلك دوار.

قم بربط الأجزاء الموصلة من الأسلاك الحمراء والبرتقالية معا ولحامها بمفصل ورأس لتناسب دبوس الحبل. قم بلحام السلكين الآخرين على الرأس لكل مفصل. وزن الماوس.

عندما يتم تخدير الماوس بالكامل ، احلق الشعر من العين إلى منطقة الأذن باستخدام ماكينة حلاقة. إصلاح الماوس على الإطار المجسم. ضع الأسنان العلوية الأمامية في شريط القاطعة وأدخل كلا قضيبي الأذن إلى أعماق متساوية في الأذنين.

ضع مرهم العين الاريثروميسين على العينين لمنع الجفاف والعمى الناجم عن الضوء الساطع أثناء الجراحة. تطهير المنطقة الجراحية ثلاث مرات على الأقل مع مسحات بالتناوب من اليودوفور و 75 ٪ الكحول. قم بعمل شق طولي لكشف المنطقة الجراحية بالكامل أو قم بعمل شق مثلث طالما أنه يكشف اليافوخ الأمامي والخلفي ومواقع زرع القطب الكهربائي.

لف قطعة صغيرة من القطن على شكل كرة ورطبها بنسبة 3٪ بيروكسيد الهيدروجين. قم بإزالة الأنسجة الرخوة المتصلة بالجمجمة عن طريق فرك المنطقة المكشوفة برفق باستخدام كرة قطنية صغيرة حتى يتم رؤية اليافوخ الأمامي والخلفي. اضبط الارتفاعات الأمامية والخلفية بحيث يكون اليافوخ الأمامي والخلفي أفقيا.

ضع في اعتبارك أن موضع اليافوخ الأمامي هو أصل المحاور. ثبت برغي من الفولاذ المقاوم للصدأ على جمجمة المخيخ الأيسر. اضبط إحداثيات إشعال اللوزة من البريغما واضبط جهاز التجسيم لتحديد موقع هذه البقعة ووضع علامة عليها.

حفر حفرة على بقعة المسيرة مع حفر الجمجمة قطرها 0.5 ملم. ثبت الأقطاب الكهربائية على قضيب تحديد موقع الجهاز المجسم. ضع القطب عموديا فوق الفتحة وقم بإسقاط الموضع إلى سالب 4.9 ملم ببطء.

لف السلك الفضي حول المسمار ثلاث مرات. الحرص على عدم هز جسم القطب أثناء التشغيل. خلط الاسمنت الأسنان وتطبيقه بلطف على القطب وسطح الجمجمة.

عندما يصلب الأسمنت السني ، قم بتعديل الجزء الخارجي حتى يتحول الأسمنت الذي يحيط بالقطب الثابت إلى مخروط. ثم حرر القطب من الجهاز المجسم. أخرج الماوس وضعه مرة أخرى في القفص.

إبقائها منفصلة عن الفئران الأخرى. ضع الماوس في صندوق مخصص به كابلات زلقة تربط القطب على رأس الماوس وجهاز EEG. قم بتشغيل الكبل من خلال فتحة في غطاء الصندوق واضبط الطول المتبقي في الصندوق للسماح للماوس بالتحرك بحرية.

قم بتشغيل جهاز EEG وتأكد من أنه يعمل بشكل صحيح. اضبط معلمات المحفز لتقديم نبضات موجة مربعة أحادية الطور ميلي ثانية واحدة عند 60 هرتز لمدة قطار ثانية واحدة لمدة 10 دورات تحفيز. ابدأ بكثافة حالية تبلغ 50 ميكروأمبير للتحفيز الأول.

راقب مخطط كهربية الدماغ بعد التفريغ الذي يتميز بارتفاعات عالية التردد. إذا لم يلاحظ بعد التفريغ ، أضف 25 ميكروأمبير إلى التحفيز التالي واستمر في هذه العملية كل 10 دقائق حتى يتم ملاحظة تفريغ بعد ويستمر خمس ثوان. تحفيز الماوس مع شدة التيار المحددة كل 15 دقيقة ، لا يزيد عن 20 مرة في اليوم.

مراقبة الاستجابات السلوكية للتحفيز. تم إجراء جراحة زرع القطب الكهربائي على ستة ذكور بالغين أصحاء C57 أسود 6 فئران وتم إجراء التحفيز الكهربائي بعد أسبوعين من الجراحة. زاد مستوى النوبات السلوكية تدريجيا مع زيادة عدد المحفزات وتم تسجيل عدد المحفزات المطلوبة للإشعال الكامل.

استمر تخطيط كهربية الدماغ بعد التفريغ من خمس إلى 15 ثانية. ثم تكثفت التصريفات التلقائية داخل الجمجمة وبدأت الأعراض السلوكية. كانت مدة النوبة عادة أقل من دقيقة واحدة مما يقلل من خطر الوفاة من التشنجات الشديدة التي تؤدي إلى انقطاع النفس.

تم الكشف عن تعبير c-Fos في أنسجة المخ بواسطة الكيمياء الهيستولوجية المناعية بعد ساعتين من الإشعال الكامل. أظهرت النتائج أن التعبير عن c-Fos في اللوزة المماثلة زاد بشكل كبير للتحقق من جدوى هذا النموذج. يجب ألا يتجاوز فصل نهايات سلك التنغستن نصف ملليمتر وإلا فلن يمر عبر ثقب الدماغ.

يجب ألا يكون طول القطب طويلا وإلا فإنه سيؤثر على نشاط الفئران.