المكونات الأساسية لبوريليلا (بوريليا) بورغدورفيري في مقايسات النسخ المختبري

يوفر نظام فحص النسخ في المختبر ل Borreliella burgdorferi أداة كيميائية حيوية للباحثين لدراسة الآليات التنظيمية الجينية والعوامل التي تحكم النشاط الأنزيمي لبوليميراز الحمض النووي الريبي. يسمح لنا النظام باختبار كيفية تأثير عوامل النسخ والعوامل المساعدة وتركيزات الملح ودرجة الحموضة على وظيفة بوليميراز Borreliella burgdorferi RNA ، مما يساهم في فهمنا العام للآليات التنظيمية للجينات. يمكن أن تسمح لنا هذه التقنية القوية أيضا بفحص الأدوية التي تثبط بوليميراز الحمض النووي الريبي بشكل انتقائي ، مما يفتح الباب أمام تطوير عقاقير جديدة لعلاج داء لايم.

للبدء ، اجمع حبيبات الخلية من لترين إلى أربعة لترات من Borreliella burgdorferi RpoC-His10X المستزرعة في وسط BSKII في بيئة محبة للهواء الدقيقة بكثافة تتراوح من اثنين إلى أربعة أضعاف 10 ثابت لكل ملليلتر. بيليه الخلايا في 10،000 مرة G لمدة 30 دقيقة عند أربع درجات مئوية في زجاجات الطرد المركزي 500 ملليلتر وتجاهل طاف. بعد ذلك ، أعد تعليق الخلايا في 30 ملليلتر من المخزن المؤقت HN المثلج البارد ، وكرر خطوة الطرد المركزي ، وصب المادة الطافية.