تحديد فعالية التطهير الفيروسي لغسل الماء الساخن

يختبر هذا البروتوكول فعالية التطهير لغسل الماء الساخن. يمكن أن يساعد في تقييم ما إذا كانت الغسالة والمجفف مناسبين لتنظيف الملابس الملوثة بفيروس. الميزة الرئيسية لتقنية الغسيل هذه هي أنه يمكن تكرارها في مختبرات أخرى على نطاق أصغر باستخدام الإجراءات التي مرت بعملية ضمان الجودة.

وسيشارك في هذا الإجراء أحمد عبد الهادي، عالم الأحياء الدقيقة، وماريلا مونج، وجوناثان سوير، وهما عالما أبحاث، وآخرون من مختبرنا. للبدء ، قم بإعداد أجار الصويا التريبتيك المعدل عن طريق وزن وخلط المكونات في الماء منزوع الأيونات كما هو موضح في النص. ثم ، أضف ملليلتر واحد من أليكوت Phi6 غير المخفف والمركز إلى الأجار الناعم و 100 ميكرولتر من ثقافة حقنة pseudomonas في المرحلة السجلية.

بعد ذلك ، صب أجار ناعم على سطح صفيحة أجار الصويا المعدلة المعدلة الصلبة التي يبلغ قطرها 100 ملم. منع الفقاعات أو الانسكاب عن طريق تدوير الألواح بلطف وتوزيع الأجار الناعم بالتساوي على سطح الأجار الصلب. بعد الحضانة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة ، قم بكشط محتويات الألواح الثلاثة بلطف باستخدام موزع خلايا معقم في أنبوب مؤرخ معقم سعة 50 ملليلتر يحتوي على 15 ملليلتر من المخزن المؤقت SM.

دوامة الأنابيب في أقصى إعداد لمدة دقيقة إلى دقيقتين لكسر أجار ثم الطرد المركزي لهم لمدة 15 دقيقة في 7،000 مرات G.ثم جمع supernatant وتصفيته من خلال مرشح حقنة 0.2 ميكرون. قم بتخزين المادة الفائقة المصفاة على شكل أليكوت ملليلتر واحد في التبريد عند 80 درجة مئوية حتى مزيد من الاستخدام. قم بإجراء تقييم بصري مسبق للاختبار عن طريق قياس وتسجيل طول وعرض معدات الحماية الشخصية غير المغسولة أو عناصر معدات الوقاية الشخصية في مواقع مختلفة.

للتلقيح ، قم بإعداد محلول مستخلص لحم البقر بنسبة 10٪ عن طريق إذابة غرام واحد من مستخلص اللحم البقري في حجم إجمالي قدره 10 ملليلتر من 1X PBS. يقوم المرشح بتعقيم الحجم الكامل للمحلول باستخدام مرشح حقنة 0.2 ميكرون. بعد ذلك داخل خزانة السلامة الحيوية ، قم بتلقيح كوبونات الاختبار والتحكم الإيجابي بحوالي 10 إلى وحدات تشكيل اللوحة السابعة لكل عينة عن طريق سحب كمية 10 ميكرولتر من المحلول على عنصر معدات الوقاية الشخصية كقطرات متعددة ونشر القطرة باستخدام طرف الماصة.

قم بتسخين محلول الغسيل إلى 50 درجة مئوية باستخدام صفيحة ساخنة وحرك القضيب. ثم قم بقياس وتسجيل درجة الحموضة ودرجة حرارة محلول الغسيل وجمع 10 ملليلتر من المحلول لفحص العقم. ثم ، صب 3.25 لتر من محلول الغسيل في غسالة معقمة.

ضع عناصر معدات الوقاية الشخصية ، وغطاء وجه واحد ملقح ، وأربعة أقنعة أفلام غير ملوثة بدون كوبونات في الغسالة. بعد غسل معدات الوقاية الشخصية لمدة 18 دقيقة ، قم بتصريف الغسالة وشطفها ثلاث مرات بخمسة لترات من ماء الصنبور في درجة حرارة الغرفة في كل مرة لإزالة الرغوة. أضف 3.25 لتر من ماء الصنبور المعقم بدرجة حرارة الغرفة إلى الغسالة وقم بإجراء دورة شطف مدتها تسع دقائق.

بعد ذلك ، حرك عناصر معدات الوقاية الشخصية في جانب دوران الغسالة للدوران لمدة خمس دقائق. جفف معدات الوقاية الشخصية لمدة 80 دقيقة على درجة حرارة عالية تبلغ 93 درجة مئوية في المجفف. ثم انقل عناصر معدات الوقاية الشخصية من المجفف إلى مساحة العمل المعقمة.

قم بإزالة القسائم من العناصر الملقحة ووضعها في أنابيب مخروطية معقمة. بعد ذلك ، قم باستخراج القسائم في 10 ملليلتر من مرق تحييد Dey-Engley بنسبة 10٪ عن طريق الدوامة لمدة دقيقتين عند الحد الأقصى لإعداد المعدات. لطلاء المستخلصات باستخدام طريقة تراكب الأجار العلوية الناعمة التقليدية ، أضف أليكوتات عينة الاختبار إلى أنبوب الأجار الناعم الذي يحتوي على ستة ملليلترات من الأجار الناعم و 100 ميكرولتر من حقنة P للمرحلة السجلية.

بعد ذلك ، صب الأجار الناعم على سطح صفيحة أجار الصويا المعدلة الصلبة وقم بتوزيع الأجار الناعم بالتساوي على سطح الأجار الصلب عن طريق تدوير اللوحة. بعد الحضانة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة ، قم بتعداد وحدات المنصة يدويا على كل لوحة. وأظهرت الاختبارات المختبرية المنهجية لتقييم فعالية غسل التطهير الفيروسي من معدات الوقاية الشخصية أو الملابس كاملة الحجم، أن وحدة المنصات أو عدد لوحات PFU وحجم العينة المستخرجة مكنت من حساب عدد وحدات المنصات لكل قسيمة اختبار.

تم الحصول على نتائج الانتعاش الفيروسي التمثيلي لاختبار تغطية الوجه. قدمت اختبارات الغسيل معلومات حول خصائص المواد مثل تمدد أو انكماش عناصر الملابس والبيانات الخاضعة لمراقبة الجودة للبروتوكول. تم إثبات فعالية غسل الماء الساخن في تطهير أغطية الوجه والدنيم ومواد معدات الوقاية الشخصية المقشر من Phi6 في هذا الرسم البياني حيث تشير النجوم إلى التطهير الكامل.

من المهم استخدام تقنيات التعقيم طوال هذا الإجراء لمنع التلوث المتبادل. أيضا ، أوقات تجفيف التلقيح للكوبونات فريدة من نوعها لكل مادة ويتم إنشاؤها قبل الاختبار. وتشمل الطرق المجانية الأخرى الفحص المجهري واختبارات اختراق السائل لاستكشاف تدهور المواد أو إجراء مزيد من تقييمات الحجم لضمان أن حماية الحاجز لا تزال تناسب مرتديها.

ووفرت هذه التقنية الأساس لتوسيع نطاق فعالية غسل الأموال واختبار المواد للملابس ومعدات الوقاية الشخصية على نطاق واسع. ويمكن أن يساعد أيضا في وضع إجراءات فعالة لغسل الأموال أثناء حدث عدوى آخر أو وباء آخر.