التصوير الكيميائي عالي الدقة المكانية للعدوى المرتبطة بالزرع بالأشعة السينية التصوير الكيميائي المتحمس للتلألؤ من خلال الأنسجة

ستسمح لنا هذه التقنية بتصوير ورسم خريطة للتغيرات الكيميائية الحيوية للعدوى المرتبطة بالزرع من خلال العظام والأنسجة. يمكننا الحصول على صور عالية الدقة للتغيرات في التركيزات الكيميائية بالقرب من أسطح الزرع. سيسمح لنا ذلك بمراقبة البيئة الكيميائية المحلية بالقرب من العدوى المرتبطة بالزرع.

ستوضح عملية زراعة البكتيريا إيرين ليفون ، طالبة دراسات عليا من قسم العلوم البيولوجية. للبدء ، قم بتشغيل مبرد PMT وقم بتنفيذ بقية خطوات التهيئة قبل تشغيل PMTs. ثم افتح برنامج التحكم في نظام التصوير وانقل المحور السيني للمرحلة والمحور ص إلى موضع البدء المطلوب.

ضع العينة على مرحلة xyz المتحركة وضع ارتفاع العينة بحيث يكون جهاز الإنارة الراديوية من 5 إلى 5.5 سم تحت بصريات التركيز الشعري المتعدد عن طريق رفع أو خفض مصدر الأشعة السينية و / أو المرحلة. أيضا ، ضع العينة في المستوى x-y بمساعدة رأس الليزر وإزالة بصريات التركيز للحصول على الصورة الشعاعية العادية للعينة. قم بتأمين قفل زر الضغط عند الباب الأمامي لحاوية التصوير.

ثم قم بتشغيل الطاقة لمصدر الأشعة السينية. بعد ذلك ، افتح برنامج التحكم بالأشعة السينية. اضبط طاقة الأشعة السينية وافتح غالق الأشعة السينية باستخدام برنامج التحكم بالأشعة السينية.

ثم افتح البرنامج الخاص بكاميرا الأشعة السينية واضغط على زر التعرض لأخذ الصورة الشعاعية العادية. قم بإيقاف تشغيل التعرض والأشعة السينية ، ثم افتح باب العلبة. قم بتوصيل البصريات الشعرية المتعددة مرة أخرى بمصدر الأشعة السينية.

ثم أغلق العلبة ، وقم بتأمين التعشيق ، وقم بتشغيل مصدر طاقة PMT. بعد ذلك ، افتح برنامج التحكم في نظام التصوير وحدد حجم الخطوة وسرعة المسح ومنطقة المسح. بمجرد تعيين جميع المعلمات ، ابدأ الفحص بالضغط على زر التشغيل.

قم بإجراء مسح ضوئي للخلفية مع إيقاف تشغيل الأشعة السينية لتحديد الأعداد المظلمة من أي ضوء موجود في العلبة بخلاف العينة. بعد التأكد من أن العينة في الموضع الصحيح باستخدام رأس الليزر ، أغلق العلبة وقم بتأمين التعشيق. ثم افتح برنامج التحكم في نظام التصوير وأدخل قيم حجم الخطوة وسرعة المسح ومنطقة المسح.

بمجرد تعيين جميع المعلمات ، اضغط على يجري زر لبدء الفحص والحصول على المسح الضوئي للعينة مع الأشعة السينية. أولا ، قم بإجراء فحص منخفض الدقة بأحجام خطوات أكبر وسرعة مسح أعلى للحصول على صورة أولية للهدف. بعد الحصول على مسح منخفض الدقة للمنطقة المطلوبة من العينة ، احصل على مسح عالي الدقة بحجم خطوة أصغر وسرعة مسح أقل.

لتحضير ثقافة جديدة من المكورات العنقودية الذهبية 1945 ، استخدم مستعمرة واحدة من صفيحة أجار الصويا التربتي ، مخططة في غضون أسبوع واحد لتلقيح ثلاثة ملليلتر من مرق الصويا التريبتيك المعقم. ثم هز الثقافة البكتيرية بلطف عند 37 درجة مئوية لمدة 16 إلى 18 ساعة حتى المرحلة الثابتة. بعد ذلك ، قم بإذارة الثقافة من مرق الصويا tryptic عبر الطرد المركزي عند 4،000 جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة وغسل الحبيبات مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني.

حدد التركيز البكتيري باستخدام الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر باستخدام النطاق الخطي ، وهو نطاق الكثافة الضوئية حيث يتم التحقق من قانون بير لامبرت. ثم تمييع العينة 200،000 خلية لكل ملليلتر باستخدام PBS معقمة. تعقيم أجار الصويا tryptic عن طريق التعقيم ، ثم تبرد عن طريق الخلط حتى تصل درجة الحرارة إلى 45 درجة مئوية.

بعد ذلك ، تلقيح البكتيريا في أجار الصويا tryptic. بعد ذلك ، قم بسحب المزرعة البكتيرية المخففة على سطح المستشعر القابل للزرع و 100 ميكرولتر من أجار الصويا التربتي غير الملقح على غرسة معقمة أخرى كعنصر تحكم. أضف 100 ميكرولتر إضافية من أجار الصويا التربتي غير الملقح فوق المستشعر القابل للزرع قبل تحضينه عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة قبل الزرع.

بعد الانتهاء من المسح ، تم إنشاء الصور عند 620 نانومتر و 700 نانومتر ونسبة على التوالي في MatLab ، وكان التغيير في اللون مؤشرا على التغيرات في الرقم الهيدروجيني. نظرا لأن منطقة الأس الهيدروجيني الأساسية تمتص الضوء المنبعث بشكل كبير من منطقة الأس الهيدروجيني الحمضي ، تظهر منطقة الأس الهيدروجيني المنخفضة كإشارة أكثر إشراقا عند 620 نانومتر. يعمل انبعاث الوميض عند 700 نانومتر كمرجع طيفي للتناقضات في فيلم الوميض ، وتغيرات تكوين الأنسجة ، وأي تغييرات تحدث في موضع بصريات الكشف من المسح إلى المسح.

يجب وضع العينة بشكل صحيح على المسرح. يجب إيقاف تشغيل مصدر الطاقة PMT قبل تشغيل ضوء الغرفة أو فتح العلبة ، ويجب إجراء مسح منخفض الدقة قبل التصوير عالي الدقة. بدلا من مصدر الأشعة السينية ، يمكننا استخدام مصدر الموجات فوق الصوتية لإجراء التصوير الكيميائي للتلألؤ بالموجات فوق الصوتية لمراقبة تغيرات الأس الهيدروجيني المرتبطة بالأجهزة الطبية المزروعة.

نعم ، بعد تحسين النظام ، تمكنا من اكتشاف اختلافات الأس الهيدروجيني في التجويف داخل النخاع للعظم مقارنة بسطح العظم الذي يمكن استخدامه لدراسة التهاب العظم والنقي.