توليد نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر مع استئصال المبيض لأبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم
يوليو 27, 2022
هنا ، نصف طريقة توليد نموذج إزالة الترسبات الاصطناعي باستخدام الفأر المبيض ، وهي تجربة كلاسيكية لإزالة ترسبات بطانة الرحم في مجال أبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم.
ضعف اللامركزية يؤدي إلى فيروس من اضطرابات بطانة الرحم كما هو الحال في الوفيات ، والإجهاض المتكرر. توفر هذه الطريقة نموذجا حيوانيا جيدا وموثوقا لدراسة لامركزية بطانة الرحم. يمكن لنموذج اللامركزية الاصطناعي هذا مع استئصال المبيض تجنب تأثير أنجلينا على الهرمونات التي يمكن أن تؤدي في كثير من الأحيان إلى نتائج قابلة للتكرار بشكل كبير مع اختلافات طفيفة داخل المجموعة.
البدء بتعقيم الأدوات الجراحية بجهاز تعقيم بدرجة حرارة عالية وضغط مرتفع قبل العملية بيوم واحد. ضع مرهم العين الواقي على مقل العيون لمنع الجفاف أثناء التخدير. ابدأ العملية عندما يتم تخدير الفئران تماما.
ضع الفئران في وضعية الانبطاح على سطح التشغيل وحلق الشعر على الظهر بعد ترطيبها بالماء والصابون. تطهير الجلد مع 70 ٪ من الإيثانول. ابحث عن موقع شق العملية على بعد 0.5 سم على الحافة العلوية لجذر الفخذ لكلا الطرفين الخلفيين الموازيين للعمود الفقري.
خذ موقع الشق كمركز وقم بتطهير منطقة الشق باستخدام اليودوفور ثلاث مرات. قم بعمل شق طولي من حوالي 0.5 إلى سنتيمتر واحد باستخدام المقص. قطع اللفافة وفصل العضلات بشكل سلبي مع ملاقط.
ابحث عن قطعة من وسادة الدهون البيضاء في حقل الشق بالقرب من القطب السفلي للكلية من خلال طبقة العضلات الرقيقة. قم بتثبيت كتلة الدهون بمقاطع مرقئ واسحب المبيض الملفوف بواسطة وسادة الدهون من الشق. قم بتثبيت تقاطع قناتي المبيض وفالوب بملاقط منحنية وإزالة المبيض على طول عنيق المبيض بالمقص.
توقف عن النزيف باستخدام قلم التخثير الكهربائي أو إبرة من حقنة ملليلتر واحدة يتم تسخينها على مصباح الكحول. شطف الشق الجراحي بمحلول ملحي طبيعي لمنع التصاق الأنسجة. استخدم خياطة 4-0 لزرع العضلات والجلد على التوالي وتطهير الشق الجراحي باستخدام اليودوفور مرة أخرى.
ضع الفئران في وضعية الانبطاح في القفص وأنعشها في حاضنة 25 درجة مئوية. مجهزة بمصدر ضوء ونظام تهوية لمدة ساعتين تقريبا. انتبه للفئران بعد العملية.
ضعهم مرة أخرى في مكان التغذية الأصلي بمفردهم حتى يتعافوا تماما ويعطيهم ما يكفي من الماء والطعام. حقن تحت الجلد 100 نانوغرام من هرمون الاستروجين في 50 ميكرولتر من زيت السمسم في كل فأر لمدة ثلاثة أيام تليها يومين من الراحة. حقن ملليغرام واحد من هرمون البروجسترون و 10 نانوغرام من هرمون الاستروجين في 50 ميكرولتر من زيت السمسم في كل فأر لمدة ثلاثة أيام أخرى.
تشغيل الفئران للحث على نموذج البقايا الاصطناعية بعد ست ساعات من الحقن الثالث لهرمون الاستروجين البروجسترون مجتمعة. ابحث عن قرن الرحم في الطرف السفلي من قناة فالوب وحقن 20 ميكرولترا من زيت السمسم ببطء على طول قرن الرحم. ادفع الأنسجة للخلف ، وخيط الشق واسمح للفأر بالتعافي.
ثبت ثلاثة إلى خمسة ملليلتر من أنسجة الرحم مع 10٪ فورمالين مضمن في البارافين وقسمها. تلطيخ المقاطع مع الهيماتوكسيلين ويوزين لمراقبة التغيرات المورفولوجية. قم بتضمين ثلاثة إلى خمسة ملليمترات أخرى من أنسجة الرحم في درجة حرارة القطع المثلى تجميد مركب في النيتروجين السائل وتخزينها في الثلاجة ناقص 80 درجة مئوية.
قسم المجمدة الأنسجة في 10 ميكرومتر والكشف عن نشاط الفوسفاتيز القلوية في أنسجة الرحم عن طريق طريقة اقتران آزو. التشكل العام للرحم اللامركزي الاصطناعي للفئران الناجم عن الزيت أقرب إلى الرحم أثناء الحمل. يصبح جسم الرحم سميكا ويصبح تجويف الرحم أصغر من الجانب غير المستحث.
حجم ووزن قرن الرحم المستحث أعلى بكثير من الجانب غير المستحث. أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين لأنسجة الرحم أن الغدد تختفي وأن خلايا انسجة بطانة الرحم النهائية على الممزقة المستحثة متمايزة إلى خلايا سيتوبلازمية كبيرة مستديرة وخلايا نفضية متعددة النوى مع حدود خلايا غير واضحة. تظهر المقاطع الجانبية غير المستحثة مورفولوجيا أنسجة بطانة الرحم في حالة فسيولوجية طبيعية.
أظهرت نتيجة طريقة اقتران Azo أن محتوى الفوسفاتيز القلوي للجانب المستحث بالزيت كان أعلى بكثير من الجانب غير المستحث. أظهرت نتائج QPCR أن تعبير mRNA ل PRL-8-A-2 و ALPL و IGFBP-1 في القرن المستحث كان أعلى بكثير من التعبير في القرن غير المستحث ، مما يشير إلى أن الزيت يمكن أن يحفز اللامركزية الاصطناعية في الفئران. مكملات هومو هي عملية طويلة تتطلب اهتماما خاصا التلوث بين هوموس وهو مفتاح النجاح.
على أساس هذا النموذج يمكن إجراء حقن قرن الرحم من الفيروس الغدي الذي يمكن دراسة الآلية ذات الصلة لجزيئات محددة تنظم التبقية.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
النظرة العامة
تصف هذه المقالة طريقة لتوليد نموذج تكلس صناعي باستخدام الفئران بعد استئصال المبيض. هذا النموذج مهم لدراسة تكلس بطانة الرحم والاضطرابات المرتبطة به.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- علم الأعصاب
- علم الأحياء التناسلية
- نماذج حيوانية
الخلفية
- التكلس ضروري لنجاح الانغراس والحمل.
- الضعف في هذه العملية يمكن أن يؤدي إلى اضطرابات بطانة الرحم.
- تعمل الفئران بعد استئصال المبيض كنموذج موثوق لدراسة هذه الحالات.
- يساعد هذا النموذج في فهم التأثيرات الهرمونية على التكلس.
هدف الدراسة
- لإنشاء نموذج حيواني يمكن تكراره لأبحاث بطانة الرحم.
- للتحقيق في تأثيرات التغيرات الهرمونية على التكلس.
- لتقديم رؤى حول الآليات الكامنة وراء حالات الإجهاض المتكررة.
الطرق المستخدمة
- تعقيم جراحي للأدوات قبل العملية.
- استخدام مرهم العيون الواقي لمنع الجفاف أثناء التخدير.
- تحريض التخدير في الفئران قبل الإجراءات الجراحية.
- إنشاء نموذج تكلس صناعي من خلال استئصال المبيض.
النتائج الرئيسية
- يسمح النموذج بدراسات خاضعة للرقابة على استجابات بطانة الرحم.
- تظهر النتائج قابلية عالية للتكرار مع اختلافات طفيفة داخل المجموعة.
- تتجنب هذه الطريقة التأثيرات الهرمونية من العوامل الخارجية.
- يوفر إطارًا موثوقًا لأبحاث المستقبل على اضطرابات بطانة الرحم.
الاستنتاجات
- النموذج الصناعي للتكلس فعال لدراسة صحة بطانة الرحم.
- يمكن أن يساعد في توضيح آليات اضطرابات بطانة الرحم.
- قد يؤدي هذا النهج إلى فهم وعلاج محسنين للإجهاض المتكرر.
الأسئلة الشائعة
Executive Industry Relevance
Highly reproducible artificial decidualization models in ovariectomized mice enable precise investigation of endometrial differentiation, eliminating confounding ovarian hormone effects. This model supports robust target validation and mechanistic de-risking for endometrial biology, facilitating translational research on infertility and pregnancy disorders. Its reliability and quantitative outputs strengthen early discovery and preclinical decision-making across reproductive health portfolios.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables rigorous interrogation of endometrial differentiation pathways under controlled hormonal conditions.
- Supports functional target validation by isolating uterine responses from ovarian influences.
- Facilitates mechanistic de-risking for candidate targets implicated in endometrial disorders.
- Provides quantitative benchmarks for portfolio triage in reproductive health research.
Screening & Assay Development
- Establishes a standardized, reproducible in vivo system for evaluating endometrial responses.
- Delivers quantitative outputs such as uterine horn weight, morphology, and gene expression.
- Enables assay readiness for downstream molecular or pharmacological screening.
- Supports platform reuse for comparative studies of candidate interventions.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant models for infertility, miscarriage, and endometrial dysfunction.
- Provides continuity from mechanistic discovery to preclinical validation of therapeutic hypotheses.
- Enables risk-adjusted advancement decisions based on robust, reproducible phenotypes.
- Supports biomarker development through quantitative molecular and histological readouts.
Pipeline & Workflow Integration
This model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for reproductive health, supporting hypothesis testing, target validation, and translational research on endometrial disorders.
- Discovery Biology: Isolates uterine-specific mechanisms by removing ovarian hormone confounders.
- Screening: Provides reproducible, quantitative endpoints for assay development and compound evaluation.
- Analytics: Enables statistical comparison of induced versus non-induced uterine horns using weight, morphology, and gene expression.
- Translational Research: Bridges mechanistic findings to disease-relevant preclinical models for infertility and miscarriage.
- Enterprise Reuse: Offers a validated, scalable platform for ongoing reproductive biology and therapeutic studies.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in endometrial research.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible, and scalable in vivo workflows.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by minimizing biological variability.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of reproductive health programs.
Implementation Considerations
- Requires surgical expertise in ovariectomy and uterine horn manipulation.
- Needs access to animal facilities, histology, and molecular analysis infrastructure.
- Demands strict cross-team standardization to ensure reproducibility and minimize contamination.
- Adaptable to various mouse strains but may require protocol optimization for different genetic backgrounds.
- Dependent on careful hormone supplementation and timing to achieve consistent decidualization.
