الظروف التجريبية المعدلة لفقدان السمع الناجم عن الضوضاء في الفئران وتقييم وظيفة السمع وتلف خلايا الشعر الخارجية

على الرغم من وجود دراسات حول فقدان السمع الناجم عن الضوضاء ، إلا أن أيا منها لم يسجل الطريقة بمثل هذه التفاصيل ، مما يجعل هذا الإجراء مهما. تسببت هذه الطريقة بشكل فعال في فقدان السمع الناجم عن الضوضاء في الفئران ، وتلاحظ التغييرات الفعلية في عتبة السمع بواسطة ABR. يعد النموذج الحيواني لفقدان السمع الناجم عن الضوضاء مفيدا للعلماء لفهم آلية فقدان السمع الناجم عن الضوضاء تماما ، وبالتالي تحسين استراتيجيات العلاج المقابلة.

سيوضح الإجراء ديان شيو لي ، وهو طالب موهوب للغاية من مختبري. لتحضير القفص للفئران التجريبية ، استخدم قفص مصيدة الفئران وقطع أربع قطع من الألواح البلاستيكية المموجة إلى أحجام مناسبة ، مما يجعلها تتناسب مع القفص. لمنع الفئران من قطع أقدامها بواسطة الشبكة الشبكية ، ضع قطعتين في الأسفل وعلى الجانب الخلفي ، على التوالي.

ضع القطعتين الأخريين متشابكتين بشكل عمودي مع بعضهما البعض ، لتقسيم المساحة داخل القفص إلى أرباع افتح برنامج تطبيق CLIO. حرك المؤشر إلى أيقونة مكبر الصوت ، وانقر على TwoSin. أدخل وقم بتغيير قيمة التردد من 1 إلى 1 ، 000 هرتز ، التردد من 2 إلى 6 ، 000 هرتز ، وانقر فوق موافق لبدء تشغيل الصوت.

ضمن علامة التبويب Leq ، قم بتغيير dBV إلى dBSPL. بعد ضبط الوقت على واجهة البرنامج ، انقر فوق زر المثلث الأخضر لتشغيل الصوت. ضع ميكروفونا أمام السماعة على مسافة 8.5 سم لمعايرة مستوى الضوضاء.

اضبط مستوى الضوضاء على 125 ديسيبل SPL-A ، وراقب باستمرار لمدة ثلاث دقائق على الأقل لضمان استقرار مستوى الضوضاء بشكل كاف. استخدم مولدا ومحللا ومضخما لإنشاء الضوضاء والتحكم فيها. ضع أربعة ذكور من الفئران السوداء C57 6J في القفص ، واحد لكل ربع سنة ، للتعرض للضوضاء.

قم بتعيين الفئران بشكل عشوائي لكل ربع سنة أثناء التعرض للضوضاء. ضع ميكروفونا أعلى القفص لمراقبة مستوى الضوضاء أثناء التعرض للضوضاء. ضع القفص أمام السماعة داخل صندوق عازل للصوت ، مع التأكد من وضع السماعة على بعد 8.5 سم من القفص.

تعريض الفئران للضوضاء بترددات كيلو هرتز واحد وستة كيلوهرتز بشكل مستمر لمدة ست ساعات في اليوم ، لمدة خمسة أيام متتالية. قياس عتبات السمع للفئران في 6 و 13 أيام عن طريق قياس ABR. استخدم نظام اختبار ABR التجاري ، المصمم خصيصا للحيوانات الصغيرة لقياسات ABR ، وحافظ على الحيوان تحت التخدير العام.

ضع أقطاب إبرة تحت الجلد مقاس 12 ملم عند الرأس خلف صيوان الأذن اليسرى ، والظهر بالقرب من الذيل ، لقياس عتبة السمع. بعد وضع السماعة على بعد سنتيمتر واحد من الأذن اليسرى للحيوان ، قدم محفزات صوتية باستخدام السماعة. اختر موجة جيبية للمحفزات ، و 10 كيلو لمقياس النافذة.

أدر مقبض التردد للحصول على التردد المطلوب للمحفزات الصوتية. اضبط شدة التحفيز عن طريق تدوير مقبض AMLP على مولد الوظائف. احصل على شدة التحفيز المطلوبة عن طريق تحويل مقبض AMLP إلى جهد مناسب محسوب من المعايرة.

اجمع قياسات ABR تحت سلسلة من شدة التحفيز من 10 إلى 100 ديسيبل SPL ، بحجم خطوة 10 ديسيبل. حدد الحد الأدنى لمستوى شدة التحفيز الذي يمكن أن يؤدي إلى ظهور موجة V واضحة كعتبة ABR. التضحية بالفئران بعد قياسات ABR ، وحصاد القوقعة من الفئران التي تم قتلها رحيما.

مباشرة بعد حصاد الأنسجة ، اغمرها في 10٪ فورمالديهايد للتثبيت ، واتركها ترتاح لمدة ثماني ساعات على الأقل عند أربع درجات مئوية. استخدم EDTA لإزالة الكلس ، كما هو موضح في النص. ضع القوقعة في طبق بتري مملوء ببرنامج تلفزيوني.

لتلطيخ الأنسجة ، قم بقطع العضو الحلزوني الشكل لكورتي ، أو OC ، إلى ثلاثة أقسام: المنعطف القاعدي ، المنعطف الأوسط ، والمنعطف القمي. تحت مجهر تشريح عند تكبير من 8x إلى 35x ، قم بإزالة الهياكل العظمية التي تشمل سكالا الدهليز ، سكالا تيمباني ، و modiolus من القوقعة منزوعة الكلس ، والحصول على الأنسجة الرخوة ، بما في ذلك OC. لوحظت زيادة كبيرة في عتبة السمع عند 12 كيلو هرتز و 24 كيلو هرتز و 32 كيلو هرتز بعد يوم واحد من التعرض للضوضاء. حدث التعافي الجزئي للسمع بعد أسبوع واحد من التعرض للضوضاء ، لكن عتبات السمع كانت لا تزال مرتفعة بأكثر من 30 ديسيبل في جميع الترددات مقارنة بالمجموعات الضابطة.

في هذه الدراسة ، كان السمع أكثر تضررا عند الترددات العالية. لوحظ اختلاف كبير في عتبة السمع بين المجموعة الضابطة والتجريبية في كل من اليومين 6 و 13 ، عند 12 كيلو هرتز و 32 كيلو هرتز. لوحظ فقدان خلايا الشعر الخارجي باستمرار في الصور المجهرية التي تم الحصول عليها من فئران NIHL ، مقارنة بتلك المأخوذة من الفئران الضابطة.

بينما ظلت خلايا الشعر الداخلية سليمة في جميع الصور ، تضررت خلايا الشعر الخارجية في المنعطفات القاعدية والوسطى من OC بشدة. في المقابل ، كانت خلايا الشعر الخارجية في المنعطف القمي سليمة تقريبا. تتضمن الخطوة الأكثر أهمية في هذا البروتوكول التعرض للضوضاء وقياس ABI وحصاد القوقعة.

يمكن تطبيق هذا الإجراء للتحقيق في تأثير التعرض للضوضاء عند ترددات مختلفة على فقدان السمع باستخدام أنواع مختلفة من الصوت.