عزل اللمف المساريقي المتدفق في الفئران لتحديد حركية امتصاص الدهون الغذائية وإفراز الكيلوميكرون في الجسم الحي

يسمح لنا بروتوكولنا بقياس التمثيل الغذائي بعد الأكل مباشرة في الليمفاوية المساريقية المتدفقة. وهذا أمر قوي؛ لأنه يمكننا تحديد حركة المغذيات من الأمعاء الدقيقة إلى اللمف كميا. ويمكننا قياس السيتوكينات والليبيدات الغذائية والمكونات الغذائية الأخرى والخلايا الليمفاوية.

يمكن أن تساعدنا هذه التقنية في تشريح ديناميكيات الدهون الغذائية التي تنتقل إلى الليمفاوية ، وتوليف وإفراز الكيلوميكرون. نموذج اليوم الواحد المعروض هنا له العديد من المزايا. أولا ، يقلل من الوقت التجريبي.

ثانيا ، يقلل من إجهاد الحيوانات. يزيد من بقاء الحيوان. وبشكل عام ، يقلل العدد التجريبي.

سيوضح تقنيتنا اليوم كبير جراحي المختبر لدينا ، السيد ديدوسيس. وعالمنا البحثي ، الدكتور ليهونغ تنغ. بعد تحضير الماوس للجراحة ، أمسك الجلد بملاقط وقم بعمل شق في منتصف البطن بمقص صغير.

ثم ، قطع نحو القص وصولا إلى الدهون الأربية. باستخدام المبعدة ، حرك الأحشاء البريتونية بعيدا عن الطريق حتى تصبح القناة الليمفاوية مرئية. باستخدام Q-tip المنقوع بالمحلول الملحي ، حرك الكبد نحو الجانب الأيمن العلوي من الجسم والأمعاء والمعدة إلى يسار الحيوان.

ثم فضح الشريان المساريقي العلوي والقناة الليمفاوية المعوية عن طريق تمديد الاثني عشر بشكل عرضي نحو اليسار. قم بإعداد أنبوب قنية بطول 30 إلى 40 سم عن طريق إدخال إبرة حادة. ثم ، باستخدام حقنة واحدة ملليلتر ، اغسل كمية صغيرة من الهيبارين عبر الأنبوب وقطع شطبة عند طرف أنبوب القنية باستخدام المقص.

بعد ذلك ، قم بعمل شق ضحل وقناة ليمفاوية لاستخدام مقص القزحية كما هو موضح في المخطوطة. امسك أنبوب القنية بزوج من الملقط الناعم وأدخل الطرف المائل برفق في القناة. نظرا لأن القناة الليمفاوية هشة ، استخدم قطرة من cyanoacrylate للصق القنية الليمفاوية في الليمفاوية المساريقية بدلا من ربط القسطرة بخياطة.

الآن ، باستخدام إبرة قياس 18 ، قم بثقب ثقب عبر منطقة البواب في المعدة الخلفية إلى العضلة العاصرة البوابية ، وأدخل أنبوب ضخ الاثني عشر في المعدة من واحد إلى ملليمترين خلف العضلة العاصرة البوابية في الاثني عشر. بعد ذلك ، قم بتثبيت الأنبوب على المعدة برباط خيط المحفظة باستخدام خياطة حريرية 5/0 ومختومة بقطرة من غراء cyanoacrylate لمنع التسرب. بدء التسريب داخل الاثني عشر من الجلوكوز 5 ٪ و 0.9 ٪ المالحة.

استبدل الأعضاء الموجودة في تجويف الجسم وخيط شق خط الوسط. ضع الماوس برفق في قيد حاضن. تزويد الفئران بالتسريب المستمر داخل الاثني عشر من المياه المالحة والجلوكوز لمدة ساعة واحدة.

افحص القنية بحثا عن تدفق الليمفاوية وابدأ في حلب القنية الليمفاوية للحفاظ على تدفق الليمفاوية. قم بإجراء ضخ الدهون الكلاسيكي لبلعة مستحلب الدهون 0.3 ملليلتر عبر أنبوب التسريب داخل الاثني عشر. بعد ذلك ، قم بتبديل التسريب مرة أخرى إلى 5٪ جلوكوز و 0.9٪ محلول ملحي بمعدل 0.3 ملليلتر في الساعة بشكل مستمر حتى نهاية التجربة.

اجمع العينات الليمفاوية وأنابيب الطرد المركزي الدقيقة قبل الوزن لمدة 60 دقيقة واحتفظ باللمف على الجليد. وزن الأنابيب في المرة الثانية لتحديد وزن الليمفاوية التي تفرز كل 60 دقيقة. جمع المعدة والأعور والقولون ووضع كل عضو في أنبوب زجاجي 15 ملليلتر.

قسم الأمعاء الدقيقة إلى ثلاثة أو أربعة أجزاء. اقطعها مفتوحة طوليا وجمع محتويات اللمعية عن طريق شطف الأنسجة بملليلتر إلى ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني بارد. قم بإزالة الغشاء المخاطي المعوي الذي يتكون من الخلايا الظهارية والصفيحة المخصوصة المرتبطة بها من الطبقة العضلية عن طريق كشط كل قسم في ملليلتر إلى ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني بارد باستخدام ملقط منحني.

ضع جميع الأنسجة والعزلات اللمعية والمخاطية والطبقة العضلية في أنابيب زجاجية. زاد تركيز الدهون الثلاثية في الليمفاوية استجابة لبلعة داخل الاثني عشر تبلغ 300 ميكرولتر من SMOFlipid. يتم الوصول إلى ذروة تركيز الدهون الثلاثية في ساعتين إلى ثلاث ساعات بعد البلعة وينخفض بشكل مطرد خلال فترة الست ساعات.

يزداد معدل تدفق الليمفاوية من وقت صفر ضخ البلعة حتى نهاية التجربة. كان الهدف الرئيسي لهذا البروتوكول هو تقليل الإجهاد الحيواني وزيادة معدل البقاء على قيد الحياة وتقليل وقت التخدير. من أجل تحقيق ذلك ، قمنا بتبديل أقفاص التقييد Bollman للتحاضن ، وأضفنا الرطوبة والدفء وتجديد السوائل.

يسمح لنا بروتوكول الناسور العرج ليوم واحد بقياس ديناميكيات امتصاص الدهون في الوقت الفعلي ، في الجسم الحي. كما يسمح لنا بدراسة الحديث المتبادل بين أعضاء الأمعاء ، والتمثيل الغذائي ، وامتصاص المغذيات الغذائية ، والأنماط الظاهرية المناعية.