تحليل السائل الزليلي لتحديد هشاشة العظام

يمكن أن يكشف تحليل السائل الزليلي عن درجة الالتهاب ووجود بلورات مسببة للأمراض أثناء التقييم الأولي للمريض الذي يعاني من أعراض الجهاز العضلي الهيكلي وانصباب المفاصل. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي بساطتها وموثوقيتها. في بضع خطوات ، يمكن للطبيب الحصول على معلومات تشخيصية مهمة عن مرض المريض.

يعد تحديد بلورات معينة أمرا حيويا للتشخيص والعلاج. تشير بلورات اليورات إلى النقرس ، بينما يشير بيروفوسفات الكالسيوم وبلورات الكالسيوم الأخرى إلى اعتلال المفاصل المرتبط بالكالسيوم أو شكل أكثر حدة من هشاشة العظام. للبدء ، خذ عينة السائل الزليلي التي تم جمعها أثناء بزل المفصل للمفاصل المتورمة للمرضى.

على حجم العينة بالملليلتر وانقلها بشكل منفصل إلى أنبوب يحتوي على مضاد للتخثر EDTA وأنبوب آخر بدون أي مادة مضافة. في الحالات المشتبه بها من العدوى ، قم بنقل بضعة ملليلتر من عينة السائل الزليلي إلى زجاجة مزرعة للاختبار الميكروبيولوجي. لفحص العينة مجهريا ، خذ أنبوبا يحتوي على العينة وحدد لون العينة ، والذي يمكن أن يتراوح من شاحب إلى أصفر غامق.

سجل وجود الدم ، إن وجد. تحديد درجة وضوح العينة من خلال مراقبتها في الإضاءة الخلفية وتحديد سهولة قراءة صفحة مطبوعة من خلال الأنبوب الذي يحتوي على العينة. ثم قم بتقييم لزوجة العينة عن طريق تقطيرها من ماصة يمكن التخلص منها.

في حين أن ظهور سلسلة طويلة من السائل يشير إلى لزوجة عالية ، فإن تكوين قطرات يدل على انخفاض اللزوجة. راقب العينة من خلال الأنبوب مع وجود ضوء في الخلفية لوجود أي مواد جسيمية بما في ذلك شظايا الأنسجة أو الفيبرين. لتحديد إجمالي عدد خلايا الدم البيضاء ، اسحب 0.5 ميكرولتر من العينة من الأنبوب الذي يحتوي على EDTAA باستخدام ماصة Malassez-Potain.

استخدم نفس الماصة لرسم 9.5 ميكرولتر من محلول الميثيلين الأزرق 0.1٪. امزج العينة ومحلول الميثيلين الأزرق في الماصة عن طريق الانعكاس اللطيف. تخلص من القطرات القليلة الأولى قبل صب الخليط في غرفة العد في مقياس الدم.

الآن عد الخلايا في مربعين متتاليين من أصل تسعة واضرب الرقم الذي تم الحصول عليه في 100. عبر عن إجمالي عدد خلايا الدم البيضاء على أنه عدد كريات الدم البيضاء لكل ملليمتر مكعب. استخدم عينة السائل الزليلي من الأنبوب بدون أي مادة مضافة لتحديد عدد خلايا الدم البيضاء التفاضلية لعينات السائل الزليلي.

لتحديد عدد الخلايا التفاضلية باستخدام تلطيخ فوق حيوي ، خذ شريحة جاهزة للاستخدام مطلية مسبقا باللون البنفسجي البلوري والأزرق الميثيلين وضع قطرة صغيرة واحدة من العينة في وسط الشريحة. بعد ذلك ، قم بتغطية قطرة العينة بغطاء وضع قطرة من زيت الغمر المجهري على قسيمة الغطاء. لاستخدام التلوين التقليدي لتقدير عدد الخلايا التفاضلية ، ابدأ بوضع قطرة صغيرة من العينة في نهاية شريحة نظيفة.

الآن استخدم شريحة ثانية أو غطاء لنشر القطرة على طول الشريحة بحركة أمامية. دع اللطاخة تجف في الهواء. افحص الشريحة التي تحتوي على اللطاخة المجففة بالهواء تحت هدف غمر الزيت 1،000X.

قدر عدد الخلايا التفاضلية عن طريق عد 100 خلية متتالية مع تمييز الخلايا متعددة الأشكال النووية والوحيدات والخلايا الليمفاوية عن بعضها البعض. قم بتنظيف شريحة زجاجية بورق بصري أو ناعم مشرب بالإيثانول. ضع قطرة صغيرة من العينة غير مختلطة مع أي مادة مضافة على الشريحة الزجاجية وقم بتغطيتها بغطاء قبل وضع الشريحة تحت المجهر.

ركز الشريحة تحت المجهر باستخدام هدف تكبير منخفض الطاقة وافحصها بعناية تحت مجال ساطع بهدف 40X. انظر داخل الخلايا وخارجها لتحديد البلورات وفقا لحجمها وشكلها ، والتي قد تكون معينية أو على شكل إبرة أو على شكل قضيب. ثم أدخل مرشح الاستقطاب بين مصدر الضوء والعينة.

لإنشاء خلفية داكنة ، قم بتدوير المستقطب حتى يصبح محوره البصري عموديا على المحلل. بمجرد تحديد بلورة ثنائية الانكسار ، أدخل المعوض بين المستقطب والعينة وحركه موازيا أو عموديا على المحور الأصلي للبلورة. مراقبة اللون الذي كشفت عنه البلورة.

بالنسبة لتلطيخ Alizarin Red ، امزج قطرة من عينة السائل الزليلي مع حجم متساو من محلول Alizarin Red المعد مسبقا على شريحة نظيفة. قم بتغطية الشريحة بغطاء وافحصها عند تكبير 400X تحت المجهر لتحديد البلورات. تشير الخصائص العيانية لعينات السائل الزليلي إلى درجة الالتهاب.

ترتبط العينة ذات اللون الأصفر الباهت والمزيد من الوضوح بشكل عام بالحالات غير الالتهابية مثل هشاشة العظام. من ناحية أخرى ، تشير العينة ذات اللون الأصفر الداكن والمظهر العكر إلى وجود خلايا وحطام وحمض الهيالورونيك وشظايا الفيبرين المرتبطة بالانصباب الالتهابي. كانت الكريات البيض التي لوحظت في عينات السائل الزليلي من مرضى هشاشة العظام في الغالب وحيدات وخلايا أحادية النواة أخرى مثل الخلايا الزليلية.

تم الكشف عن بلورات بيروفوسفات الكالسيوم في عينات السائل الزليلي مما يشير إلى مستويات أعلى نسبيا من السيتوكينات الالتهابية. علاوة على ذلك ، كشف تلطيخ Alizarin Red الإيجابي عن وجود بلورات فوسفات الكالسيوم الأساسية في العينات. من المهم جدا فحص الشريحة بعناية تحت الضوء العادي عند البحث عن البلورات.

تذكر أن بلورات البيروفوسفات غالبا ما تكون ثنائية الانكسار ضعيفة ويمكن تفويتها تحت الضوء المستقطب. أدى وجود بلورات الكالسيوم في السائل الزليلي وارتباطها بشكل أكثر حدة من المرض إلى قيام الباحثين باستكشاف آليات جديدة في التسبب في المرض وتطور هشاشة العظام.