Name: إنشاء عضويات بطانة الرحم 3D من رحم الفأر (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: تعلم عزل النسيج الطلائي الرحمي النقي من رحم الفأر لإنشاء أعضاء بطانة الرحم ثلاثية الأبعاد. تستخدم هذه الطريقة التفكيك الإنزيمي والميكانيكي لدراسة تجديد بطانة الرحم وعلاج الأمراض.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر الدكتورة ستيفاني بانجاس والدكتور مارتن إم ماتزوك (M.M.M.) على القراءة النقدية وتحرير مخطوطتنا. تم دعم الدراسات من قبل منح معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية R00-HD096057 (DM) و R01-HD105800 (DM) و R01-HD032067 (M.M.M.) و R01-HD110038 (M.M.M.) ، ومنحة دعم مركز السرطان NCI- P30 (NCI-CA125123). ديانا مونسيفيس ، دكتوراه حاصلة على جائزة الحمل من الجيل التالي من صندوق بوروز ويلكوم.

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

هنا ، نصف طرق توليد عضويات ظهارية بطانة الرحم من بطانة الرحم للفأر والبروتوكولات المستخدمة بشكل روتيني لتحليلها في المراحل النهائية. تعتبر عضويات بطانة الرحم أداة قوية لدراسة الآليات التي تتحكم في الأمراض المرتبطة ببطانة الرحم ، مثل التهاب بطانة الرحم وسرطان بطانة الرحم وفشل الزرع. ذكرت الدراسات التاريخية المنشورة في عام 2017 عن ظروف زراعة الثقافات طويلة الأجل والمتجددة من عضويات بطانة الرحم من الفئران والظهارة البشرية 4,5. على الرغم من أن المواد العضوية قد استخد...

بطانة الرحم - النسيج المخاطي المبطن الداخلي لتجويف الرحم - هي نسيج فريد وديناميكي للغاية يلعب أدوارا حاسمة في الصحة الإنجابية للمرأة. خلال العمر الإنجابي ، يحمل بطانة الرحم القدرة على الخضوع لمئات الدورات من الانتشار والتمايز والانهيار ، بتنسيق من العمل المتضافر لهرمونات المبيض - الاستروجين والبروجستيرون. كشفت الدراسات التي أجريت على الفئران المعدلة وراثيا عن آليات بيولوجية أساسية تدعم استجابة بطانة الرحم للهرمونات والتحكم في زرع الجنين ، ونزع الخلايا اللحمية ، والحمل1. ومع ذلك ، كانت الدراسات في المختبر محدودة بسبب الصعوبات في الحفاظ على أنسجة بطانة الرحم الأولية غير المحولة للفأر في مزارع الخلايا ثنائية الأبعاد التقليدية2،3. تقدم التطورات الحديثة في ثقافة أنسجة بطانة الرحم كأنظمة أعضاء 3D ، أو عضويات ، فرصة جديدة للتحقيق في المسارات البيولوجية التي تتحكم في تجديد خلايا بطانة الرحم والتمايز. تم تطوير أنظمة عضوية بطانة الرحم للفأر والإنسان من ظهارة بطانة الرحم النقية المغلفة في مصفوفات مختلفة4،5 ، في حين تم استزراع بطانة الرحم البشرية كمزارع ظهارية / انسجة خالية من السقالات6،7 ، ومؤخرا كمجموعات ظهارية / انسجة مغلفة بالكولاجين8 . يتم دعم النمو والإمكانات التجديدية للثقافات العضوية الظهارية من خلال مزيج محدد من عوامل النمو ومثبطات الجزيئات الصغيرة التي تم تحديدها تجريبيا لزيادة نمو وتجديد المواد العضوية4،5،9. علاوة على ذلك ، فإن القدرة على تجميد وإذابة عضويات بطانة الرحم تسمح بتخزين عضويات بطانة الرحم على المدى الطويل من الفئران والبشر للدراسات المستقبلية.
كشفت الفئران المعدلة وراثيا عن مسارات الإشارات المعقدة التي تتحكم في الحمل المبكر وإزالة الترسبات ، وقد تم استخدامها كنماذج لفقدان الحمل وسرطان بطانة الرحم وبطانة الرحم. تم تحقيق هذه الدراسات الجينية إلى حد كبير مع حذف خاص بالخلية للأليلات الجانبية loxP ("floxed") باستخدام cre recombinases التي تنشط بشكل خاص في الأنسجة التناسلية الأنثوية. تتضمن نماذج الفئران هذه مستقبلات البروجسترون10 المستخدمة على نطاق واسع ، والتي لها نشاط إعادة اتحاد قوي في الأنسجة الظهارية واللحمية البطانية ، اللاكتوفيرين i-cre ، الذي يحفز إعادة التركيب الظهاري البطاني الرحمي في الفئران البالغة11 ، أو Wnt7a-cre ، مما يؤدي إلى حذف خاص بالظهارة في الأنسجة المشتقة من مولريان12 . وفرت زراعة أنسجة بطانة الرحم من نماذج الفئران المعدلة وراثيا مثل الكائنات العضوية ثلاثية الأبعاد فرصة ممتازة للتحقيق في بيولوجيا بطانة الرحم وتسهيل تحديد عوامل النمو ومسارات الإشارات التي تتحكم في تجديد خلايا بطانة الرحم والتمايز13,14. يتم وصف طرق عزل وثقافة أنسجة بطانة الرحم للفأر في الأدبيات والإبلاغ عن استخدام استراتيجيات إنزيمية مختلفة لعزل ظهارة الرحم للزراعة اللاحقة للعضويات الظهارية البطانية4. بينما توفر الأدبيات السابقة إطارا نقديا لبروتوكولات الثقافة العضوية الظهارية البطانية4،5،6 ، توفر هذه الورقة طريقة واضحة وشاملة لتوليد هذه الكائنات العضوية وصيانتها ومعالجتها وتحليلها. توحيد هذه التقنيات مهم لتسريع التقدم في مجال البيولوجيا الإنجابية للمرأة. هنا ، نبلغ عن منهجية مفصلة للتنقية الأنزيمية والميكانيكية للأنسجة الظهارية البطانية للفأر للثقافة اللاحقة من عضويات بطانة الرحم في سقالة مصفوفة هلام. كما نصف منهجيات التحليلات النسيجية والجزيئية النهائية للعضويات الظهارية بطانة الرحم المغلفة بمصفوفة الهلام.

<table><tbody><tr><td><قوي>صياغة الوسائط العضوية< قوي></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>قوي<قوي>الاسم</قوي></td><td><قوي>الشركة</قوي></td><td><قوي>رقم الكتالوج</قوي></td><td><قوي>التركيز النهائي</قوي></td></tr><tr><td>مصفوفة غشاء القاعدة لعامل نمو Corning Matrigel (GFR) ، *</td><td>كورنينج</td><td>354230</td><td>100٪</td> خالية من LDEV</tr><tr><td>التربسين من البنكرياس البقري</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>T1426-1G</td><td>1٪</td></tr> <tr><td>Advanced DMEM / F12</td><td>Life Technologies</td><td>12634010</td><td>مكمل 1X</td></tr><tr><td>N2</td><td>Life Technologies</td><td>17502048</td><td>1X</td></tr><tr><td>B-27 & trade ؛ مكمل غذائي (50X) ، ناقص فيتامين أ</td><td>Life</td><td>Technologies 12587010</td><td>1X</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>ant-pm-1</td><td>100 & micro ؛ جم / مل</td></tr><tr><td>N-Acetyl-L-cysteine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9165-5G</td><td>1.25 ملي مولار</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Life Technologies</td><td>25030024</td><td>2 ملي</td></tr><tr><td>نيكوتيناميد</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>N0636-100G</td><td>10 نانومتر</td></tr><tr><td>ALK-4 ، -5 ، -7 مثبط ، A83-01</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>مؤتلف بشري EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>50 نانوغرام / مل</td></tr><tr><td>المؤتلف البشري Noggin</td><td>Peprotech</td><td>120-10C</td><td>100 نانوغرام / مل</td></tr><tr><td>مؤتلف الإنسان Rspondin-1</td><td>Peprotech</td><td>120-38</td><td>500 نانوغرام / مل</td></tr><tr><td>مؤتلف الإنسان FGF-10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td>100 نانوغرام / مل</td></tr><tr><td>مؤتلف HGF</td><td>Peprotech</td><td>100-39</td><td>50 نانوغرام / مل</td></tr><tr><td>WNT3a</td><td>R & أنظمة D</td><td>5036-WN</td><td>200 نانوغرام / مل</td></tr> <tr><td><قوي>الإمدادات والكواشف الأخرى < / قوي ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< قوي > الاسم < / قوي ></td> <td>< قوي > الشركة < / قوي ></td> <td>< قوي > رقم الكتالوج < / قوي ></td> <td>< قوي > التركيز النهائي < / قوي ></td></tr> <tr><td>كولاجيناز من المطثية الأنسجة</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>C0130-1G</td><td>5 مجم / مل</td></tr><tr><td>Deoxyribonuclease I من البنكرياس البقري</td><td>Sigma Aldrich</td><td>DN25-100MG</td><td>2 مجم / مل</td></tr><tr><td>DPBS ، خال من الكالسيوم ، خال من المغنيسيوم</td><td>ThermoFisher</td><td>14190-250</td><td>1X</td></tr><tr><td>HBSS ، بدون كالسيوم ، خال من المغنيسيوم</td><td>ThermoFisher</td><td>14170112</td><td>1X</td></tr><tr><td>Falcon & nbsp ؛ ألواح البوليسترين الدقيقة (24 بئر)</td><td>فيشر العلمي</td> <td># 08-772-51</td><td></td></tr><tr><td>فالكون &nbsp ؛ ألواح البوليسترين الدقيقة (12 بئر)</td><td>فيشر العلمية</td> <td># 0877229</td><td></td></tr><tr><td>مصافي خلايا الصقر ، 40 & ميكرو ؛ م</td><td>فيشر العلمي</td> <td># 08-771-1</td><td></td></tr><tr><td>Direct-zol RNA MiniPrep (50 & micro ؛ ز)</td> <td>Genesee Scientific</td><td>11-331</td><td></td></tr><tr><td>كاشف Trizol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F-12 ، HEPES ، لا يحتوي على الفينول الأحمر</td><td>ThermoFisher</td><td>11039021</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني ، تجريد الفحم</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6765-500ML</td><td>2٪</td></tr> <tr><td>Estratiol (E2)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>E1024-1G</td><td>10 نانومتر</td></tr><tr><td>الفورمالديهايد 16٪ في الماء الحل ، EM Grade</td><td>VWR</td><td>15710</td><td>4٪</td></tr> <tr><td>Epredia Cassette 1 أشرطة الأنسجة المشقوقة</td><td>فيشر Scientific</td><td>1000961</td><td></td></tr><tr><td>Epredia قوالب قاعدة التضمين المصنوعة من الفولاذ المقاوم</td> للصدأ <td>Fisher Scientific</td><td>64-010-15 &nbsp ؛</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول ، 200 دليل (100٪)</td><td>فيشر Scientific</td><td>22-032-601&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Histoclear</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-899-90147</td><td></td></tr><tr><td>Permount Mounting Medium</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-277-97</td><td></td></tr><tr><td>أكياس خزعة من النايلون Epredia</td><td>Fisher Scientific</td><td>6774010</td><td></td></tr><tr><td>HistoGel هلام معالجة العينات</td><td>VWR</td><td>83009-992</td><td></td></tr><tr><td>حل Hematoxylin Premium</td><td>VWR</td><td>95057-844</td><td></td></tr><tr><td>محلول Eosin Y (مصفر) Premium</td><td>VWR</td><td>95057-848</td><td></td></tr><tr><td>TBS Buffer ، 20X ، درجة الحموضة 7.4</td><td>GenDEPORT</td><td>T8054</td><td>1X</td></tr><tr><td>TBST (10X) ، درجة الحموضة 7.4</td><td>GenDEPORT</td><td>T8056</td><td>1X</td></tr><tr><td>حامض الستريك &nbsp ؛</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>C0759-1KG</td><td></td></tr><tr><td>سترات الصوديوم ثلاثية القاعدة ثنائي الهيدرات</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>S4641-500G</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>فيشر Scientific</td><td>BP337-500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ألبومين مصل الأبقار (BSA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2153-100G</td><td>3٪</td></tr> <tr><td>محلول DAPI (1 مجم / مل)</td> <td>ThermoFisher</td><td>62248</td><td>1: 1000 التخفيف</td></tr><tr><td>VECTASHIELD مضاد للتلاشي تصاعد مختبرات ناقلات متوسطة</td><td>H-1000-10</td><td></td><td></td></tr><tr><td>طلاء الأظافر الشفاف</td><td>فيشر NC1849418</td><td></td><td></td>علمي</tr><tr><td>فيشربراند سوبر فروست بلس شرائح مجهر</td><td>فيشر نظارات الغطاء الصغير Scientific</td><td>22037246</td><td></td></tr><tr><td>VWR</td><td>VWR</td><td>48393-106</td><td></td></tr><tr><td>SuperScript VILO Master Mix</td><td>ThermoFisher</td><td>11755050</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green PCR Master Mix</td><td>ThermoFisher</td><td>4364346</td><td></td></tr><tr><td>Krt8 الأجسام المضادة (TROMA-I) &nbsp;</td><td>DSHB</td><td>TROMA-I&nbsp;</td><td>1:50 التخفيف</td></tr>إشارات <tr><td>خلية</td> <td>Vimentin Antobody</td><td>5741S</td><td>1: 200 تخفيف</td></tr><tr><td>الحمار المضاد للفئران IgG (H + L) الجسم المضاد الثانوي عالي الامتصاص ، Alexa Fluor 594</td><td>ThermoFisher</td><td>A-21209</td><td>1:250 تخفيف</td></tr><tr><td>الحمار المضاد IgG (H + L) الجسم المضاد الثانوي عالي الامتصاص ، Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher</td><td>A-21206</td><td>1:250 التخفيف</td></tr><tr><td>ZEISS Stemi 508 ستيريو مجهر</td><td>ZEISS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ZEISS Axio Vert.A1 مجهر روتيني مقلوب مع كاميرا رقمية</td><td>ZEISS</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>Primer Sequence</td><td>Forward (5'-3')</td><td>Reverse (5'-3')</td><td></td></tr><tr><td>_Lipocalin 2 (Lcn2)</td><td>GCAGGTGGTACGTTGTGGG</td><td>CTCTTGTAGCTCATAGATGGTGC</td><td></td></tr><tr><td>لاكتوفيرين (Ltf)</td> <td>TGAGGCCCTTGGACTCTGT</td><td>ACCCACTTTCTCATCTCGTTC</td><td></td></tr><tr><td>البروجسترون (Pgr)</td> <td>CCCACAGGAGTTTGTCAAGCTC</td><td>TAACTTCAGACATTTCCGG</td><td></td></tr><tr><td>Glyceraldehyde 3 نازعة هيدروجين الفوسفات (Gapdh)</td> <td>CAATGTGTCCGTCGTGGATCT</td><td>GCCTGCTTCACCACCTTCTCTT</td><td></td></tr></tbody></table>

إنشاء عضويات بطانة الرحم 3d من رحم الفأر

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

تبطن أنسجة بطانة الرحم التجويف الداخلي للرحم وتخضع للسيطرة الدورية للإستروجين والبروجستيرون. وهو نسيج يتكون من ظهارة لمعية وغدية ، ومقصورة انسجة ، وشبكة أوعية دموية ، ومجموعة معقدة من الخلايا المناعية. كانت نماذج الفئران أداة قوية لدراسة بطانة الرحم ، وكشفت عن الآليات الحاسمة التي تتحكم في الزرع والمشيمة والسرطان. يقدم التطور الأخير للثقافات العضوية البطانية 3D نموذجا حديثا لتشريح مسارات الإشارات التي تكمن وراء بيولوجيا بطانة الرحم. يعد إنشاء عضويات بطانة الرحم من نماذج الفئران المعدلة وراثيا ، وتحليل نسخها ، وتصور مورفولوجيتها بدقة خلية واحدة أدوات حاسمة لدراسة أمراض بطانة الرحم. تحدد هذه الورقة طرق إنشاء ثقافات 3D لظهارة بطانة الرحم من الفئران وتصف تقنيات لتحديد التعبير الجيني وتحليل أنسجة الكائنات العضوية. الهدف هو توفير مورد يمكن استخدامه لإنشاء وزراعة ودراسة التعبير الجيني والخصائص المورفولوجية للعضويات الظهارية البطانية.

صور تباين المرحلة من عضويات بطانة الرحم الماوس أنشأنا عضويات من ظهارة بطانة الرحم للفأر WT ، كما هو موضح في البروتوكول المرفق (انظر الرسم البياني في الشكل 1). بعد التفكك الأنزيمي لظهارة بطانة الرحم للفأر ، تم فصل الصفائح الظهارية ميكانيكيا عن الخلايا اللحمية الرحمية وفصلها عن كولاجيناز لتوليد تعليق أحادي الخلية. إذا تم إجراؤها بشكل صحيح ، يجب أن تسفر طريقة فصل الخلايا الظهارية واللحمية هذه عن عينات ملوثة لا تزيد عن 10٪ -15٪ من نوع الخلية المعاكسة (انظر صور التألق المناعي ...

يصف هذا البروتوكول منهجيات إنشاء عضويات ظهارية بطانة الرحم للفأر للتعبير الجيني والتحليلات النسيجية.

إنشاء عضويات بطانة الرحم 3D من رحم الفأر

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

هذا البروتوكول مهم لأنه يظهر منهجية خطوة بخطوة لعزل ظهارة الرحم النقية للغاية من رحم الفأر لثقافة عضويات بطانة الرحم. تستخدم هذه الطريقة بكفاءة التفكك الأنزيمي والميكانيكي لعزل ظهارة الرحم. تم تبسيط التقنيات لإنشاء ومعالجة وتحليل عضويات ظهارة بطانة الرحم المشتقة من الظهارة المعزولة.ابدأ بإذابة مصفوفة الجل على الثلج لمدة ساعة إلى ساعتين تقريبا قبل الاستخدام. ثم قم بتشريح الفأر الرحيم عن طريق إجراء شق خط الوسط على البطن باستخدام المقص ، وتقشير الجلد برفق لفضح الطبقة البريتونية الأساسية. حدد موقع قرون الرحم عن طريق تحريك ضمادات الدهون في البطن جانبا برفق وأمسك قرون الرحم عند تقاطع عنق الرحم قبل قطعها على طول الدهون المساريقي.بعد تشريح رحم الفأر ، قم بإزالة الأنسجة الدهنية تماما من قرن الرحم بمقص صغير. بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بتقطيع كل قرن رحم إلى أجزاء صغيرة ، يبلغ قياس كل منها حوالي أربعة إلى خمسة ملليمترات. ضع جميع شظايا الرحم من رحم واحد في بئر واحد من صفيحة بئر 24 تحتوي على 0.5 ملليلتر من 1٪ تربسين.ثم احتضان لوحة البئر 24 في حاضنة زراعة الأنسجة المرطبة 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة تقريبا للفصل الأنزيمي لظهارة بطانة الرحم عن السدى الأساسي. بعد الحضانة ، انقل شظايا الرحم إلى صفيحة زراعة الأنسجة 35 ملم تحتوي على ملليلتر واحد من محلول دولبيكو المخزن بالفوسفات أو DPBS. بعد ذلك ، افصل ظهارة الرحم عن أنبوب الرحم تحت مجهر التشريح عن طريق إمساك أحد طرفي جزء الرحم بالملقط وتشغيل طرف الماصة برفق طوليا عبر الجزء ، والضغط على الظهارة من الطرف الآخر من أنبوب الرحم.ثم لاحظ الأوراق الظهارية المنفصلة عن جزء الرحم تحت مجهر التشريح. بعد ذلك ، انقل جميع الأوراق الظهارية برفق إلى نفس الأنبوب سعة 1.5 ملليلتر باستخدام ماصة ملليلتر. وبيليه الصفائح الظهارية المنفصلة عن طريق الطرد المركزي عند 375 × جم لمدة خمس دقائق.قم بإزالة المادة الطافية بعناية دون إزعاج حبيبات الخلية وأعد تعليق حبيبات الخلية في 0.5 ملليلتر من 2.5 ملليغرام لكل ملليلتر كولاجيناز بالإضافة إلى ملليغرام لكل ملليلتر من محلول الحمض النووي. ماصة صعودا وهبوطا حوالي 10 مرات أو حتى يتم تحقيق تعليق خلية واحدة. بعد ذلك ، أضف 0.5 ملليلتر من DMEM F / 12 بالإضافة إلى 10٪ مصل بقري جنيني أو FBS بالإضافة إلى المضادات الحيوية وطرد الخلايا بالطرد المركزي لمدة خمس دقائق عند 375 × جم.قم بإزالة المادة الطافية ، وأعد تعليق الخلايا في ملليلتر واحد DMEM / F12 بالإضافة إلى 10٪ FBS بالإضافة إلى المضادات الحيوية وأجهزة الطرد المركزي للخلايا. ضع مصفوفة الجل على الثلج حتى تصبح جاهزة. بعد ذلك ، قم بإزالة المادة الطافية من خلايا الطرد المركزي وأعد تعليق حبيبات الخلية باستخدام 20 ضعف حجم مصفوفة الهلام دون إدخال الفقاعات.اترك معلق خلية مصفوفة الهلام يستقر في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق تقريبا. بمجرد أن يصبح تعليق خلية مصفوفة الهلام هلاما شبه صلب ، استخدم ماصة صغيرة P200 مع طرف عريض التجويف 200 ميكرولتر واستنشاق 25 ميكرولتر برفق من تعليق خلية مصفوفة الهلام. قم بتوزيع ثلاث قباب منفصلة سعة 25 ميكرولتر لكل بئر من صفيحة 12 بئرا واترك مصفوفة الهلام تعالج لمدة 15 دقيقة وحاضنة زراعة الأنسجة المرطبة 37 درجة مئوية.بعد معالجة مصفوفة الهلام ، أضف 750 ميكرولترا من الوسط العضوي إلى كل بئر يحتوي على قبة مصفوفة هلام ، وحاضنة عند 37 درجة مئوية في حاضنة زراعة الأنسجة المرطبة. أظهرت صور تباين الطور لعضويات بطانة الرحم للفأر أن فصل الخلايا الظهارية واللحمية أسفر عن عينات لا تزيد عن 10٪ إلى 15٪ تلوث من نوع الخلية المعاكس. تم تجميع الخلايا الظهارية بطانة الرحم في المواد العضوية في غضون ثلاثة إلى أربعة أيام.تم تصور عضويات بطانة الرحم المضمنة في الفورمالين البارافين الثابت بواسطة بقع الهيماتوكسيلين والإيوزين ، والتي عرضت طبقة واحدة من الظهارة والمراكز المجوفة ، لومن المواد العضوية. أظهر التصوير المجهري الفلوري أن جميع الخلايا الموجودة في المواد العضوية كانت إيجابية Cytokeratin 8 وتحتوي على DAPI ، مما يشير إلى أن تثبيت وتضمين ومعالجة عضويات بطانة الرحم متوافق مع التلطيخ المناعي القائم على الأجسام المضادة. أظهر تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي أن التحفيز باستخدام 10 نانومولار استراديول زاد من التعبير عن ليبوكالين 2 ، لاكتوفيرين ، ومستقبلات البروجسترون في الكائنات العضوية الظهارية ، مما يشير إلى أنه يمكن استخدام الكائنات العضوية الظهارية البطانية بنجاح لقياس تغيرات التعبير الجيني استجابة للاستراديول.من المهم التأكد من الحصول على فصل واضح لظهارة بطانة الرحم أثناء خطوة التفكك الميكانيكي. يجب أن يكون المرء قادرا على مراقبة الظهارة الخارجة من أنبوب الرحم. تشمل الطرق الأخرى إنشاء المواد العضوية الظهارية عن طريق التغليف في مصفوفة هلامية.إذا رغبت في ذلك ، يمكن هضم المقصورة اللحمية لإنشاء ثقافات انسجة ظهارية 3D. يمكن أن تساعد الطريقة في الإجابة على أسئلة حول الإشارات التي تتحكم في تجديد بطانة الرحم. يمكن أن يساعد في علاج الأمراض لدى النساء ، مثل التهاب بطانة الرحم وفقدان الحمل والسرطان.

establishing-3d-endometrial-organoids-from-the-mouse-uterus

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

وصفا للتحريض الجراحي للبطانة الرحم في الفئران والجرذان التي زرع السيارات من نسيج الرحم إلى تتالي الشرايين من مساريق المعوية.

نموذج الفأر من بطانة الرحم جراحيا ، الناجمة عن زرع الذاتية لأنسجة الرحم

يتم تقديم بروتوكول لتوليد الهيكل الأساسي لبطانة الرحم البشرية الاوليه التي تتكون من الخلايا الظهاريه واللحمية والاحتفاظ بخصائص نسيج بطانة الرحم الأصلي. يصف هذا البروتوكول الطرق من اكتساب انسجه الرحم إلى المعالجة النسيجية لهيكل بطانة الرحم.

توليد العضوية متعددة الخلايا الإنسان الاساسيه بطانة الرحم

العديد من نماذج القوارض من بطانة الرحم محدودة بسبب التعقيد التقني ، والاستنساخ ، و / أو الحاجة إلى الحيوانات المنافقة المناعية أو الفئران مراسل خاص. نحن نقدم نظام مبسط من تحريض الآفات باستخدام أي فأر تجريبي مع نظام تسجيل موضوعي يمكن التحقق منه بشكل مستقل وبدون أي شرط لاستئصال المبيضين أو جراحة البقاء على قيد الحياة.

نموذج مورين Syngeneic من بطانة الرحم باستخدام الفئران ركوب الدراجات بشكل طبيعي

تقدم هذه الدراسة نموذجا جديدا للفأر مصمم خصيصا لمحاكاة ورم بطانة الرحم ، وهو نوع فرعي مهم سريريا من الانتباذ البطاني الرحمي. من خلال استخدام الفئران C57BL / 6J ، يهدف النموذج إلى توضيح الآليات الفيزيولوجية المرضية الكامنة وراء العقم المرتبط بورم بطانة الرحم ، مما يوفر أداة محسنة لسد الفجوة المعرفية الحالية في الطب التناسلي.

إنشاء نموذج تجريبي للفأر من ورم بطانة الرحم لدراسة العقم المرتبط به

هنا ، نقدم بروتوكولا لعزل واستزراع الخلايا الجذعية الظهارية لبطانة الرحم للفئران (reESCs) ، مما يؤدي إلى توليد عضيات بطانة الرحم للفئران. تسهل هذه الطريقة الدراسات المختبرية لأمراض بطانة الرحم ، مما يتيح تحرير الجينات والتلاعب الخلوي الآخر.

توليد وتوصيف عضيات الرحم في الفئران من الخلايا الجذعية الظهارية لبطانة الرحم للفئران

توضح هذه المقالة بروتوكولا مفصلا لإنتاج بطانة الرحم الرقيقة الموثوقة والقابلة للتكرار مع معدل وفيات منخفض للغاية والحد الأدنى من الالتصاقات داخل الرحم عن طريق حقن 95٪ من الإيثانول في رحم الفأر في غضون 1-3 دقائق.

إنشاء نموذج فأر لبطانة الرحم الرقيقة

يوضح هذا البروتوكول بالتفصيل تطوير نماذج الفئران المصلية عالية الجودة لسرطان المبيض المصلي (HGSOC) في المختبر وفي الجسم الحي. من اشتقاق عضيات قناة فالوب الفئران ، وتعديلها الجيني لتلخيص علم الوراثة البشرية HGSOC ، وإدخالها في الجراب المبيضي للفئران المتجانسة لتطور الأورام في الجسم الحي .

تطوير الخطوط العضوية المشتقة من الفئران من الخلايا الظهارية لقناة فالوب لنمذجة سرطان المبيض المصلي عالي الجودة

يصف هذا البروتوكول طريقة محددة تعتمد على الهيدروجيل لتوليد عضويات الثدي البشرية التي تعيد تلخيص السمات الرئيسية لتكوين الثدي في نظام زراعة ثلاثي الأبعاد محكم.

طريقة محددة قائمة على الهيدروجيل لتوليد عضويات الثدي ثلاثية الأبعاد في الإنسان تعيد تكوين الشكل الثدي

حقن Intravitreous هو التقنية المستخدمة على نطاق واسع في بحوث العلوم البصرية لأمراض العين أو التطبيق المباشر للعلاج المحلية. أثبت هذا الفيديو على بروتوكول للحقن intravitreous باستخدام المحاقن 1ml مع ماصة الزجاج. يتم إعطاء نصائح مفيدة حول تجنب نزيف حاد وتلف العدسة.

Intravitreous حقن لأمراض العين تأسيس النموذجي

توضح هذه المقالة بروتوكول للعزلة وصيانة الثقافات الليفية الأولية من الجلد وأنسجة الرئة من القوارض البرية.

إنشاء الابتدائية الثقافات الليفية الكبار من القوارض

تعلم عزل النسيج الطلائي الرحمي النقي من رحم الفأر لإنشاء أعضاء بطانة الرحم ثلاثية الأبعاد. تستخدم هذه الطريقة التفكيك الإنزيمي والميكانيكي لدراسة تجديد بطانة الرحم وعلاج الأمراض.

إنشاء عضويات بطانة الرحم 3D من رحم الفأر

استكشف المزيد من الفيديوهات