Immunostaining-Based Detection of Dynamic Alterations in Red Blood Cell Proteins

Marijke Grau; Lennart Kuck

doi:10.3791/64843

الكشف القائم على التلوين المناعي للتغيرات الديناميكية في بروتينات خلايا الدم الحمراء

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Immunostaining-Based Detection of Dynamic Alterations in Red Blood Cell Proteins

الكشف القائم على التلوين المناعي للتغيرات الديناميكية في بروتينات خلايا الدم الحمراء

Full Text

2,473 Views

10:07 min

March 17, 2023

DOI: 10.3791/64843-v

Marijke Grau¹, Lennart Kuck²

¹Department of Molecular and Cellular Sports Medicine,German Sport University Cologne, ²Biorheology Research Laboratory, Menzies Health Institute,Griffith University Gold Coast

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

يشكل التقاط التغيرات الديناميكية في تنشيط البروتين لخلايا الدم الحمراء المنزوعة النواة تحديات منهجية ، مثل الحفاظ على التغييرات الديناميكية للمنبهات الحادة لتقييمها لاحقا. يصف البروتوكول المقدم تقنيات تحضير العينات وتلطيخها التي تمكن من حفظ وتحليل تغيرات البروتين ذات الصلة والكشف اللاحق.

تجعل طريقتنا التحقيقات تحت الخلوية الآلية ممكنة في مجال البيولوجيا الميكانيكية سريع الحركة عن طريق تثبيت تعديلات البروتين المؤقتة في مكانها ثم اكتشافها بأجسام مضادة محددة. هذه الطريقة سهلة التطبيق من الناحية الفنية. النتائج صالحة للغاية وقابلة للتكرار.

أيضا ، بالمقارنة مع التقنيات الأخرى ، يمكن حقا استخدام طريقتنا بشكل فعال في المجال الناشئ لإشارات خلايا الدم الحمراء بعد الترجمة ، والتي تعتمد على تعديلات البروتين المؤقتة ، وخاصة الإشارات الميكانيكية للخلايا الحمراء. لإجراء تثبيت بروتين كرات الدم الحمراء ، قم بتخفيف الدم الكامل بنسبة واحد إلى اثنين في محلول بارافورمالدهايد 4٪ لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. جهاز طرد مركزي محلول الدم عند 132 جم لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة ، وإزالة المادة الطافية بعناية.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos