ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Proikas-Cezanne, T., Takacs, Z., Dönnes, P., Kohlbacher, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WIPI+proteins%3A+Essential+PtdIns3P+effectors+at+the+nascent+autophagosome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">WIPI proteins: Essential PtdIns3P effectors at the nascent autophagosome.</a> Journal of Cell Science. 128 (2), 207-217 (2015).</li>
<li>Proikas-Cezanne, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WIPI-1%CE%B1+%28WIPI49%29%2C+a+member+of+the+novel+7-bladed+WIPI+protein+family%2C+is+aberrantly+expressed+in+human+cancer+and+is+linked+to+starvation-induced+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">WIPI-1α (WIPI49), a member of the novel 7-bladed WIPI protein family, is aberrantly expressed in human cancer and is linked to starvation-induced autophagy.</a> Oncogene. 23 (58), 9314-9325 (2004).</li>
<li>Bakula, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WIPI3+and+WIPI4+%CE%B2-propellers+are+scaffolds+for+LKB1-AMPK-TSC+signalling+circuits+in+the+control+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">WIPI3 and WIPI4 β-propellers are scaffolds for LKB1-AMPK-TSC signalling circuits in the control of autophagy.</a> Nature Communications. 8 (1), 15637(2017).</li>
<li>Hayflick, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Propeller+protein-associated+neurodegeneration%3A+A+new+X-linked+dominant+disorder+with+brain+iron+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">β-Propeller protein-associated neurodegeneration: A new X-linked dominant disorder with brain iron accumulation.</a> Brain. 36, 1708-1717 (2013).</li>
<li>Wilson, J. A. -O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+clinical+management+guideline+for+beta-propeller+protein-associated+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Medicine+and+Child+Neurology%22%5BJournal%5D)">Consensus clinical management guideline for beta-propeller protein-associated neurodegeneration.</a> Developmental Medicine and Child Neurology. 63 (12), 1402-1409 (2021).</li>
<li>Gao, G., Li, J., Zhang, Y., Chang, Y. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+iron+metabolism+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular iron metabolism and regulation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1173, 21-32 (2019).</li>
<li>Mancias, J. D., Wang, X., Gygi, S. P., Harper, J. W., Kimmelman, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+proteomics+identifies+NCOA4+as+the+cargo+receptor+mediating+ferritinophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Quantitative proteomics identifies NCOA4 as the cargo receptor mediating ferritinophagy.</a> Nature. 509 (7498), 105-109 (2014).</li>
<li>Voss, P., Horakova, L., Jakstadt, M., Kiekebusch, D., Grune, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferritin+oxidation+and+proteasomal+degradation%3A+Protection+by+antioxidants%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Research%22%5BJournal%5D)">Ferritin oxidation and proteasomal degradation: Protection by antioxidants.</a> Free Radical Research. 40 (7), 673-683 (2006).</li>
<li>Schüssele, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+profiling+in+single+cells+with+open+source+CellProfiler-based+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy profiling in single cells with open source CellProfiler-based image analysis.</a> Autophagy. 19 (1), 338-351 (2023).</li>
<li>Goodwin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy-independent+lysosomal+targeting+regulated+by+ULK1%2F2-FIP200+and+ATG9%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Autophagy-independent lysosomal targeting regulated by ULK1/2-FIP200 and ATG9.</a> Cell Reports. 20 (10), 2341-2356 (2017).</li>
<li>Quiles del Rey, M., Mancias, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NCOA4-mediated+ferritinophagy%3A+A+potential+link+to+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">NCOA4-mediated ferritinophagy: A potential link to neurodegeneration.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 238(2019).</li>
<li>Zachari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+autophagy+of+mitochondria+on+a+ubiquitin-endoplasmic-reticulum+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Selective autophagy of mitochondria on a ubiquitin-endoplasmic-reticulum platform.</a> Developmental Cell. 50 (5), 627-643 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><خطوط الخلايا القوية > < / قوية ></td><td></td><td></td><td></td></tr> الخلايا <tr><td>الليفية البشرية المشتقة من الجلد &nbsp ؛</td><td>خزعة الجلد ، متبرع بشري سليم ، عيادة جامعة بيوبانك T&uuml. بينجن ، الموافقة الأخلاقية 389/2019BO2</td><td>F-CO-60 ، تمرير 9</td><td></td></tr><tr><td><قوي>علاجات زراعة الخلايا< / قوي ></td><td></td><td></td> <td>< قوي > التركيز النهائي (مركب) < / قوي ></td></tr> <tr><td>وسيط التحكم</td><td>DMEM 10٪ FCS</td><td></td> <td>(DMSO فقط) وسيط</td></tr> <tr><td>التحكم + بافيلومايسين A1</td><td>DMEM 10٪ FCS</td><td></td><td>100 نانومتر بافيلومايسين A1</td></tr><tr><td>وسيط التحكم + ديفيراسيوكس (DFX)</td><td>DMEM 10٪ FCS</td><td></td><td>30 & micro; متوسط التحكم M DFX</td></tr><tr><td>+ DFX + bafilomycinA1</td><td>DMEM 10٪ FCS</td><td></td><td>30 & micro; M DFX ، 100 نانومتر بافيلومايسين A1</td></tr><tr><td>وسيط التحكم + سترات الأمونيوم الحديديك (FAC) DMEM</td> <td>10٪ FCS</td><td></td><td>0.05 مجم / مل</td></tr><tr><td>FAC وسيط التحكم + FAC + بافيلومايسين A1</td><td>DMEM 10٪ FCS</td><td></td><td>0.05 مجم / مل FAC ، 100 نانومتر بافيلومايسين A1</td></tr> <tr><td><قوي>مادة < / قوي></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>الألبومين [BSA] الكسر الخامس</td><td>AppliChem</td><td>A1391</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 488 الماعز أ أرنب</td><td>Life Technologies</td><td>A-11008</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 546 الماعز الفأر</td><td>Life Technologies</td><td>A-11003</td><td></td></tr><tr><td>Bafilomycin A1</td><td>Sigma Aldrich</td><td>196000</td><td></td></tr><tr><td>BioLite Cell Culture أطباق 10 سم المعالجة</td><td>Thermo Scientific</td><td>130182</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>AppliChem</td><td>A4099</td><td></td></tr><tr><td>Deferasiox (ICL-670)</td> <td>Selleckchem</td><td>S1712</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Glutamax</td><td>Gibco</td><td>31966</td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>AppliChem</td><td>A3672</td><td></td></tr><tr><td>DPBS بدون كالسيوم ولا مغنيسيوم</td><td>جيبكو</td><td>14190094</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنينية (FCS)</td><td>جيبكو</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>سترات الأمونيوم الحديديك (FAC)</td><td>Merck</td><td>F5879</td><td></td></tr><tr><td>Anti-FERRITIN (الطحال البشري)</td><td>Rockland</td><td>200-401-090-0100</td><td></td></tr><tr><td>LAMP2 (H4B4)</td><td>سانتا كروز</td><td>SC-18822</td><td></td></tr><tr><td>بارافورمالدهايد (PFA)</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x Dulbecco s</td><td>AppliChem</td><td>A0965</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep (1،00U / مل بنسلين ، 100 مجم / مل ستربتومايسين)</td> <td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05٪) مع الفينول الأحمر</td><td>Gibco</td><td>25300</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>AppliChem</td><td>A4974</td><td></td></tr><tr><td>96 بئر زجاجي القاع # 0 لوحات</td><td>Cellvis</td><td>P96-0-N</td><td></td></tr> <tr><td>Solution</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.7٪ بارافورمالدهيد (PFA)</td><td></td><td></td> <td>PFA مذاب في PBS ، درجة الحموضة 7.5 &nbsp ؛</td></tr><tr><td>Bafilomycin A1 مخزون 100 ملي</td><td></td><td></td> من <td>Bafilomycin A1 مخفف في DMSO</td></tr><tr><td>سترات الأمونيوم الحديديك (FAC) 100 مجم / مل مخزون</td><td></td><td></td><td>FAC مخفف في الماء المقطر المزدوج المعقم</td></tr><tr><td>PBS / T</td><td></td><td></td><td>PBS ، مكمل بنسبة 10٪ Tween20 & nbsp ؛</td></tr><tr><td>PBS / T + BSA</td><td></td><td></td><td>PBS ، مكمل بنسبة 10٪ Tween20 ، 1٪ BSA & nbsp ؛</td></tr><tr><td><قوي>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellProfiler 4.2.4</td><td>https://cellprofiler.org/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>GraphPad Prism</td><td>Dotmatics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsoft Excel الإصدار 16.50</td><td>مايكروسوفت أوفيس بلس 365</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ferritinophagy: تقييم التدهور الانتقائي للحديد عن طريق الالتهام الذاتي في الخلايا الليفية البشرية

Ferritinophagy: Assessing the Selective Degradation of Iron by Autophagy in Human Fibroblasts

تم تحضير الخلايا الليفية الأولية المشتقة من جلد الإنسان (F-CO-60) من متبرعين أصحاء (الشكل 1 أ) لتقييم الفيريتينو فاجي باستخدام علاج بافلوميسين A1 متبوعا بالتلوين المناعي للفيريتين الداخلي و LAMP2 ، وتحليل الصور الآلي ، والتحليل القائم على CellProfiler (الشكل 1 ب).
زاد التمركز المشترك للفيريتين الداخلي و LAMP2 بعد أن تم حظر التدهور الليزوزومي للفيريتين عن طريق إضافة بافيلوميسين A1 ، بما يتفق مع قدرته على تثبيط إنزيمات V-ATPase الليزوزومية ، وبالتالي منع الفيريتينوفاجي7 (الشكل 2). بالإضافة إلى ذلك ، يتم عرض التعرف على الخلايا القائم على البرامج ، وكذلك التعرف على الفيريتين و LAMP2 ، كمثال (الشكل 2).
في هذا الصدد ، تجدر الإشارة إلى أن خط أنابيب CellProfiler الموضح هنا متعدد الاستخدامات للغاية ويمكن تكييفه مع قراءات إضافية و / أو بديلة ، مثل تقييم آثار بعض طفرات BPAN على نمو الخلايا أو الميتوكوندريا أو العضيات الأخرى في سياق أنظمة علامات الخلية المفردة الوظيفية.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65110/65110fig01.jpg"> الشكل 1: نظرة عامة تجريبية. تمثيل رسومي ل (أ) عملية الفيريتينوفاجي و (ب) سير العمل التجريبي لتقييم الفيريتينوفاجي في الخلايا الليفية البشرية الأولية المشتقة من الجلد ، كما هو موضح في هذا البروتوكول. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65110/65110fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65110/65110fig02.jpg"> الشكل 2: الصور التمثيلية. خضعت الخلايا الليفية البشرية الأولية المشتقة من الجلد في وسط التحكم (ظروف التغذية) في غياب (A) أو (B) وجود بافيلوميسين A1 لتحليل التألق المناعي غير المباشر باستخدام الأجسام المضادة المضادة للفيريتين والمضادة ل LAMP2 ، بينما تم تلطيخ نوى الخلية ب DAPI. يتم عرض صور مضان نموذجية تم الحصول عليها باستخدام أتمتة الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر (قضبان المقياس: 10 ميكرومتر). يمكن ملاحظة التغيرات في وفرة الفيريتين و LAMP2 والتمركز المشترك عند تثبيط الليزوزومات عند إعطاء بافيلوميسين A1. يتم أيضا عرض التحليل المستند إلى CellProfiler ، والذي يعرض تراكبات الصور المشتقة من البرامج للتعرف على الخلايا (أرجواني) ، ونوى (أزرق) ، وفيريتين (أخضر) ، و LAMP2 (أحمر) ، وتوطين مشترك ferritin / LAMP2 (أصفر) punكتا. (C) مقاطع الصورة المكبرة (شريط المقياس = 10 ميكرومتر). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65110/65110fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
الجدول 1: إعدادات الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر المستخدمة في هذه الدراسة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65110/JoVE65110_Table%201.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 2: إعدادات CellProfiler العددية المستخدمة في هذه الدراسة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65110/JoVE65110_Table%202.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الملف التكميلي 1: خط أنابيب CellProfiler المستخدم في هذه الدراسة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65110/JoVE65110_Supplemental%20File%201.zip" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.</a>
الملف التكميلي 2: عرض خط أنابيب CellProfiler (انظر الملف التكميلي 1) مع لقطات شاشة تم التقاطها بترتيب متتالي (انظر الجدول 2). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65110/JoVE65110_.Supplemental%20FIle%202.zip" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.</a>

Ferritinophagy: تقييم التدهور الانتقائي للحديد عن طريق الالتهام الذاتي في الخلايا الليفية البشرية

Mutations in the autophagy gene WDR45/WIPI4 are the cause of beta-propeller-associated neurodegeneration (BPAN), a subtype of human diseases known as ...

ferritinophagy-assessing-selective-degradation-iron-autophagy-human

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يتم تقديم بروتوكول لتخليق وتقطيع المغنطيسفوريتين المخدر بالكوبالت ، بالإضافة إلى طريقة لمغنطة الخلايا الجذعية بسرعة باستخدام المغناطيس الجريتين الكاتيوني.

توليف Cationized Magnetoferritin للمغنطة فائقة السرعة من الخلايا

هنا، يستخدم قياس التدفق الخلوي المتعدد الأطياف مع ميزة تحليلية يقارن الصور التفصيلية المشرقة لثلاثة علامات للبلعمة الذاتية ويحدد مدى مشاركتها في التعريب، جنبا إلى جنب مع عد بقعة LC3، لقياس التلقيح الذاتي بطريقة موضوعية وكمية وإحصائية قوية.

تقييم التمويه الذاتي عن طريق قياس LC3، p62، و LAMP1 المشاركة في التعريب باستخدام قياس التدفق المتعدد الأطياف الخلوي

ميتوفاجي، عملية إزالة تلف الميتوكوندريا، أمر ضروري لصيانة التوازن والصحة المتقدرية. تقدم هذه المقالة بعض ميتوفاجي أحدث أساليب الكشف في الخلايا البشرية، ايليجانس كاينورهابديتيسوالفئران.

في المختبر و في فيفو كشف ميتوفاجي في الخلايا البشرية، ايليجانس جيموالفئران

ويرد هنا بروتوكول بسيط وتم التحقق من صحتها جيدا لقياس النشاط تنحية أوتوفاجيك الأكبر في خلايا الثدييات. الأسلوب يستند على قياس نسبة اللاكتات نازعة (رابطة حقوق الإنسان) في سيديمينتابل خلية الكسور مقارنة بإجمالي المستويات الخلوية في رابطة حقوق الإنسان.

مقايسة تنحية نازعة لاكتات — طريقة بسيطة وموثوق بها لتحديد النشاط تنحية أوتوفاجيك الأكبر في خلايا الثدييات

يمثل محتوى هيدرو بيروكسيد الدهون المؤشر الأكثر استخداما لموت الخلايا الحديدية. توضح هذه المقالة تحليل قياس التدفق الخلوي خطوة بخطوة لمحتوى هيدرو بيروكسيد الدهون في الخلايا عند تحريض الفيروسات.

الكشف عن النمط الظاهري الحديدي للورم الأرومي النخاعي

يقدم هذا البروتوكول طرقا لتقييم توزيع وكمية ترسب الحديد في الأنسجة ، وخاصة الدماغ. يوضح البروتوكول تفاصيل إجراءات تحضير العينة ، وتلوين Perls / DAB ، والتقاط الصور ، وتحليل البيانات.

تقييم ترسب الحديد في أدمغة الفئران 5xFAD بواسطة تلطيخ Perls / DAB

تقدم هذه المقالة بروتوكول ليزوتراكر للخلايا الحية لقياس إعادة تشكيل الليسوسوم أثناء الشيخوخة في الخلايا الليفية البشرية IMR-90.

التحليل الليزوزومي باستخدام LysoTracker للتقييم الكمي لشيخوخة الخلايا في الخلايا الليفية البشرية

نبدي بروتوكول لجيل من الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها من الخلايا الجسدية البشرية باستخدام الفيروسة البطيئة بوساطة التسليم من العوامل البشرية Oct4 ، Sox2 ، Nanog وLin28. وأكد تعدد القدرات التي التشكل وجود الجذعية الجنينية (ES) بعلامات محددة الخلية.

تعيين جيل من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة عن طريق إعادة برمجة الخلايا الليفية الإنسان مع الإنسان الفيروسة البطيئة TF Stemgent

نقدم لبروتوكول لإعادة برمجة الخلايا الجسدية من كفاءة الإنسان في صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSC) باستخدام نواقل فيروس ترميز Oct3 / 4، Sox2، Klf4 و C-myc (OSKM) وتحديد hiPSC برمجتها بشكل صحيح عن طريق تلطيخ على الهواء مباشرة مع هيئة تنظيم الاتصالات 1-81 الأجسام المضادة.

اختيار وعزل المستعمرات من صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة برمجتها من الخلايا الليفية الكبار

يوصف تقنية لعزل الخلايا الليفية بوابة من كبد الفئران. وperfused الأكباد...

عزل الخلايا الليفية بوابة الجرذ من قبل<em&gt; في الموقع</em&gt; الكبد الإرواء

استكشف آلية الفيريتينوفاجي في الخلايا الليفية البشرية المشتقة من الجلد باستخدام تقنية التصوير المناعي عالي الإنتاجية. تتيح هذه الطريقة التحليل الكمي لتدهور الفيريتين في الجسيمات الحالة لفهم اضطرابات حديد الدماغ في مرض BPAN.

Ferritinophagy: تقييم التدهور الانتقائي للحديد عن طريق الالتهام الذاتي في الخلايا الليفية البشرية

استكشف المزيد من الفيديوهات