April 14th, 2023
يصف هذا البروتوكول نموذج تراكم الليبوفوسين في الثقافات الظهارية الصبغية الشبكية البشرية شديدة التمايز والاستقطاب (RPE) ومقايسة البلعمة المحسنة للجزء الخارجي (OS) للكشف عن إجمالي سعة استهلاك / تدهور نظام التشغيل ل RPE. تتغلب هذه الطرق على قيود نماذج ليبوفوسين السابقة ومقايسات البلعمة الكلاسيكية لمطاردة النبض.
في حين أن الليبوفوسين يتراكم عالميا في RPE مع تقدم العمر ، إلا أن تمييز سميته كان صعبا. هنا ، نقوم بتطوير بروتوكولات تسمح لنا بتطوير تراكم شبيه بالليبوفوسين في ثقافات RPE شديدة الاستقطاب والنضج للمساعدة في تمييز تأثيرات ليبوفوسين على فسيولوجيا RPE. إن دراسة سمية الليبوفوسين في البشر مرتبكة بسبب حقيقة أن الليبوفوسين يتناقص مع موت RPE.
كان للنماذج الحيوانية لسمية الليبوفوسين نتائج متباينة على نطاق واسع. لقد أنشأنا بعناية نماذج في المختبر لتراكم المواد الشبيهة بالليبوفوسين لتسهيل دراسة سمية الليبوفوسين. مفتاح نجاح نماذجنا هو الحفاظ على ثقافات متباينة للغاية مع تحفيز نشأة ليبوفوسين عبر نفس العملية التي تحفز ليبوفوسين في الجسم الحي ، وهي البلعمة للأجزاء الخارجية للمستقبلات الضوئية.
بروتوكولنا في المختبر فريد من نوعه من حيث أن المواد الشبيهة بالليبوفوسين تتراكم في ثقافات RPE المتباينة للغاية لتقليد RPE بأمانة في الجسم الحي. في هذه الظروف ، وجدنا أن ثقافة RPE مقاومة للغاية لتراكم الليبوفوسين والتأثير السام من ليبوفوسين. بالإضافة إلى ذلك ، في عملية فحص الأنماط الظاهرية التي يسببها التراكم الشبيه بالليبوفوسين في ثقافات RPE الخاصة بنا ، أنشأنا نوعا جديدا من مقايسة البلعمة يسمى القدرة الاستهلاكية الكلية.
يسمح لنا هذا الفحص بتحديد السعة الكاملة ل RPE على الأجزاء الخارجية البلعمية مع تجنب بعض التفسيرات المربكة التي تأتي مع مقايسات البلعمة الكلاسيكية لمطاردة النبض. نحن متحمسون لاستخدام هذا النموذج من تراكم المواد الشبيهة بالليبوفوسين لفهم أفضل لضغوط RPE التي قد تأخذ ليبوفوسين الخامل عادة إلى دور أكثر مرضية في وفيات خلايا RPE.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تركز هذه الدراسة على تأثيرات تراكم الليبوفوسسين في ثقافات الظهارة الصباغية لشبكية العين البشرية (RPE) عالية التمايز، مما يوفر رؤى حول سمية الليبوفوسسين وعلاقته بفيزيولوجيا RPE. يقدم هذا الدراسة بروتوكولات جديدة تعزز دراسة تأثيرات الليبوفوسسين مع استخدام اختبار بلعمة مبتكر لتقييم قدرة استهلاك الجزء الخارجي الكلي لـ RPE.