Name: التعرض المتقطع المزمن لبخار الإيثانول مقترنا باختيار زجاجتين لنمذجة اضطراب تعاطي الكحول (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-23T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: اكتشف نموذج اختيار زجاجتين مع التعرض المتقطع المزمن للإيثانول لدراسة اضطراب تعاطي الكحول في الفئران. يتيح هذا البروتوكول مراقبة سلوك الشرب بدقة وتحليل التغيرات العصبية الحيوية المرتبطة بالاعتماد على الكحول.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا العمل من قبل منح المعاهد الوطنية للصحة (NIH) AA027301 و AA029985.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل لجنة رعاية واستخدام بجامعة بوردو. استخدمت الدراسة الحالية فئران C57BL / 6J البالغة من العمر 8 أسابيع. كان لدى مجموعة CIE 5 فئران (3 ذكور و 2 إناث) ، وكان لدى مجموعة الهواء 10 فئران (5 ذكور و 5 إناث). تم الحصول على من مصدر تجاري (انظر جدول المواد) وتم إيواؤها في دورة فاتحة وظلامية مدتها 12 ساعة مع إمكانية الوصول إلى الطعام. تم قياس أوزان جسم الفئران مرة واحدة في الأسبوع طوال التجربة.
1. التصميم التجريبي العام
ملاحظة: الاختيار من زجاجتين (2BC) / التعرض المتقطع المزمن لبخار الإيثانول (CIE) هو نموذج فأر قبل السريري لاستكشاف الاعتماد على الإيثانول < فئة sup = "xref" >51.
<ol>
	<li>خلال أسابيع 2BC ، تأكد من أن الفئران لديها إمكانية الوصول إلى زجاجة تحتوي على الإيثانول (15٪ وزن / حجم) وزجاجة تحتوي على الماء لمدة ساعتين يوميا (من الاثنين إلى الجمعة) ، بدءا من ساعتين في الدورة المظلمة.</li>
	<li>في البداية ، اسمح للفئران بما لا يقل عن أسبوعين من شرب 2BC الأساسي حتى يتم الوصول إلى مستوى مستقر من تناول الإيثانول. اعتمادا على الاحتياجات التجريبية ، قسم الفئران إلى مجموعتين (مجموعة CIE ومجموعة Air) أو أكثر إذا تم تضمين علاجات إضافية بناء على متوسط تناول الإيثانول الأساسي.</li>
	<li>بعد أسابيع خط الأساس 2BC ، قم بتعريض الفئران من مجموعة CIE لبخار الإيثانول (CIE) لمدة أربعة أيام متتالية (من الاثنين إلى الخميس) مع 16 ساعة متتالية من البخار و 8 ساعات متتالية من البخار. لضمان تركيزات الإيثانول في الدم مستقرة ومستدامة طوال فترة التعرض ، تم إعطاء البيرازول كمثبط لنازعة هيدروجين الكحول ، وبالتالي منع التمثيل الغذائي السريع للإيثانول وتعزيز مستويات الإيثانول الجهازية المتسقة><.
	ملاحظة: للتحكم في المتغيرات المحتملة الخاصة بالغرفة مثل الإضاءة والاهتزاز والضوضاء ودرجة الحرارة ، تم وضع الفئران في مجموعة الهواء في غرفة مماثلة تحت نفس الظروف البيئية مثل مجموعة CIE ، ولكن دون التعرض لبخار الكحول.</li>
	<li>خلال أسبوع CIE / Air ، تأكد من عدم حدوث 2BC. بعد أسبوع واحد من CIE / Air ، استأنف الفئران في 2BC من الاثنين إلى الجمعة التالية.</li>
	<li>اسمح للفئران بالتناوب بأسابيع من CIE / Air و 2BC لبقية الإجراء حتى يحدث تصاعد شرب الكحول في فئران CIE. اجمع الدم من الفئران مرة واحدة على الأقل في الأسبوع من CIE لتحديد تركيز الإيثانول في الدم (BEC) 52.</li>
</ol>
2. التحضير التجريبي
<ol>
	<li>احصل على جميع المستلزمات التالية قبل بدء الدراسة: الفئران ، والأقفاص / قمم الأقفاص المعدنية ، وزجاجات الشرب لتناسب اثنين لكل قفص جنبا إلى جنب ، والفراش ، والطعام ، والميزان ، وغرفة البخار المتقطعة المزمنة ، وآلة Analox أو طريقة أخرى لتحليل BECs (انظر جدول المواد).</li>
	<li>تأكد من أن جميع المواد الكيميائية المطلوبة جاهزة للتجربة: مياه الشرب ، 95٪ إيثانول ، بيرازول ، الهيبارين والمحلول الملحي المعقم.</li>
</ol>
3. التعود على
<ol>
	<li>إذا لم تكن الفئران موجودة بالفعل في نفس موقع التجارب ، فاترك أسبوعا واحدا على الأقل حتى تتأقلم مع البيئة الجديدة. 
	ملاحظة: خلال هذه الفترة ، يجب أيضا أن تعتاد الفئران على التعامل اللطيف لتقليل الارتباكات المرتبطة بالإجهاد وتحسين رفاهية. أجريت جلسات المناولة مرة واحدة يوميا لمدة خمسة أيام متتالية ، استمرت كل منها حوالي 2-3 دقائق لكل. تم تقطيع الفئران أو توجيهها برفق إلى أيدي المجرب دون رفع الذيل ، مما سمح لها باستكشاف يد المعالج طواعية. تسهل هذه التقنية التفاعل الروتيني ، وتقلل من التوتر أثناء الإجراءات التجريبية اللاحقة ، وتضمن بيانات سلوكية أكثر موثوقية. بالإضافة إلى ذلك ، تم نقل إلى منطقة التجربة لمدة 30 دقيقة يوميا لمزيد من التأقلم مع بيئة الاختبار.</li>
	<li>تأكد من إعطاء الفئران أسبوعا واحدا من خيارات زجاجتين مع ملء كلتا الزجاجتين بالماء للسماح لهم بالتكيف مع إعداد القفص المختلف ووضعهم في قفص فردي للشرب.</li>
</ol>
فئة 4. اختيار زجاجتين مع 15٪ وزن / حجم من الإيثانول والماء
<ol>
	<li>التعود على اختيار زجاجتين
	<ol>
		<li>نموذج اختبار الاختيار المكون من زجاجتين هو نفسه طوال الأسبوع لاختيار زجاجتين بالماء والاختبار اللاحق بالماء والإيثانول. انقل الفئران المقيمة في المجموعة إلى أقفاص الشرب الفردية الخاصة بها قبل 30 دقيقة من إطفاء الأضواء ، ثم اسمح للفئران بالشرب لمدة ساعتين.</li>
		<li>سجل أحجام كل زجاجة شرب قبل وبعد فترة الشرب 2 ساعة. تخضع كل مجموعة ل 2BC لمدة 5 أيام ، من الاثنين إلى الجمعة. 
		ملاحظة: الغرض من أسبوع التعود هو السماح للحيوانات بالتكيف مع زجاجتين في القفص لتقليل أي تحيز ناتج عن الوضع الجانبي الطبيعي لزجاجة واحدة. خلال هذا الأسبوع ، تمتلئ كلتا الزجاجتين بالماء. إذا كان القادوس المعدني المرفق مصمما لاستيعاب زجاجة واحدة فقط ، فاستخدم بعناية المسافة بين قضبانها المجاورة للزجاجة الأولى لتوفير مساحة للزجاجة الثانية. يتم تصنيع الزجاجات المستخدمة في تجارب الشرب خصيصا باستخدام ماصات سعة 10 مل و 25 مل مع قطع الأطراف للسماح بإدخال مشروب مستقيم مع محمل كروي للفئران للشرب منه. سيضمن استخدام مشابك الموثق لقص الزجاجات على الغطاء السلكي عدم تحرك الزجاجات أثناء فترة الشرب (الشكل التكميلي 1 والشكل التكميلي 2).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>اختيار الزجاجتين الأساسية
	<ol>
		<li>بعد التعود ، اسمح للفئران بالخضوع لمدة أسبوعين على الأقل من شرب خط الأساس 2BC لإنشاء كمية مستقرة من الإيثانول. أثناء الشرب الأساسي ، اختبر الفئران لمدة ساعتين في اليوم و 5 أيام في الأسبوع (من الاثنين إلى الجمعة) بزجاجة ماء واحدة وزجاجة ثانية تحتوي على 15٪ وزن / حجم من الإيثانول. سجل أحجام كل زجاجة شرب قبل وبعد فترة الشرب 2 ساعة. 
		ملاحظة: لإنشاء خط أساس مستقر لتناول الإيثانول ، كرر أسابيع 2BC حتى يكون لكل فأر أقل من 15٪ تقريبا من التباين في المدخول بين الأيام.</li>
		<li>بعد أن تحقق الفئران خط أساس مستقرا لتناول الإيثانول ، قسم الفئران بالتساوي بناء على تناولها للإيثانول إلى مجموعات غير معتمدة على الإيثانول (معالجة الهواء) وتعتمد على الإيثانول (علاج CIE). بمجرد تحديد تناول الإيثانول الأساسي ، تخضع الفئران ل CIE (أو التعرض للهواء) في الأسبوع التالي><.
		ملاحظة: لا تتطلب جميع التجارب تضمين مجموعة غير تابعة ، ويجب تحديد ذلك بناء على تركيز الدراسة. على سبيل المثال ، قد تكون الفئران المعتمدة على الإيثانول مع وبدون معالجة محددة مقارنة أكثر صلة.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>اختيار زجاجتين (2BC)
	<ol>
		<li>استأنف إجراء 2BC كما تم إجراؤه أثناء الشرب الأساسي بعد الأسبوع الأول من CIE. 
		ملاحظة: تركيبة شرب الفأر المكونة من زجاجتين عبارة عن خليط إيثانول بنسبة 15٪ وزن / حجم (1 لتر): 95٪ إيثانول (195 مل) ومياه شرب الفأر (805 مل).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
فئة 5. التعرض المزمن المتقطع لبخار الإيثانول (CIE)
<ol>
	<li>رتب المواد التالية: غرف بخار CIE المصنوعة حسب الطلب (الشكل التكميلي 3) ، 95٪ إيثانول ، محلول إيثانول بيرازول (68.1 مجم / كجم بيرازول ممزوج في 20٪ إيثانول) ، محلول ملحي بيرازول (68.1 مجم / كجم بيرازول ممزوج بالمحلول الملحي) ، محاقن (1 مل) ، وإبر.</li>
	<li>إجراء بخار الإيثانول المتقطع المزمن (CIE)
	<ol>
		<li>قبل وضعها في غرف البخار ل CIE ، قم بحقن الفئران داخل الصفاق بمحلول الإيثانول والبيرازول (0.0075 مل / جم) ، والذي يستخدم لإنشاء تسمم أولي بالإيثانول ، وتثبيط نازعة هيدروجين الإيثانول ، ومنع عملية التمثيل الغذائي للإيثانول < فئة سوب = "xref">53.</li>
		<li>حقن جميع أدوات التحكم في الهواء والمجموعات الأخرى بنفس جرعة البيرازول الممزوجة بالمحلول الملحي (0.0075 مل / جم) بدلا من الإيثانول. يوصى بإعطاء نصف جرعة (0.00375 مل / جم) من محاليل البيرازول في اليوم الأول واليوم الأخير من CIE كل أسبوع.</li>
		<li>بعد الحقن ، أعد فئران الهواء / التحكم إلى أقفاص منزلها ، وضع أقفاص مجموعة CIE داخل غرفة البخار. 
		ملاحظة: نظرا للمخاطر الصحية المحتملة المرتبطة بالتعرض المزمن لبخار الإيثانول ، تمت مراقبة عن كثب طوال البروتوكول لضمان رفاهيتها واكتشاف أي آثار ضارة. تم وزن الفئران مرتين على الأقل في الأسبوع ، وشملت التقييمات الصحية مراقبة العلامات السريرية للضائقة. تم اعتبار التي تظهر فقدان وزن الجسم الذي يتجاوز 20٪ من خط الأساس أو تظهر عليها علامات مثل الموقف المنحني أو الخمول أو الانتصاب أو الفراء غير المهذب قد وصلت إلى نقاط نهاية إنسانية وتم إزالتها على الفور من الدراسة وفقا للإرشادات المؤسسية المعتمدة لرعاية واستخدامها. خلال CIE ، تكون الفئران أكثر عرضة للنتائج الصحية السيئة في نهاية الأسبوع ، عندما تدخل فترة انسحاب ممتدة بعد التوقف عن التعرض للإيثانول. لتقليل شدة الانسحاب ، يتم إعطاء نصف جرعة من البيرازول في اليوم الأخير من التعرض للبخار كل أسبوع. بالإضافة إلى ذلك ، يتم إعطاء نصف جرعة في بداية كل دورة CIE جديدة لتسهيل تعرض مرة أخرى للإيثانول. يستخدم البيرازول ، وهو مثبط نازعة هيدروجين الكحول ، لتثبيت وإطالة تركيزات الإيثانول في الدم. تتراوح الجرعات عادة من 0.00375 مل / غرام إلى 0.0075 مل / غرام ويمكن تعديلها لتحقيق تركيز الإيثانول في الدم المطلوب.</li>
		<li>بمجرد وضع الفئران في غرف البخار ، أغلق الأبواب واضبط المضخة على مستوى البخار المناسب (على سبيل المثال ، 1-3). اضبط وقت تشغيل التجربة. بالنسبة للدراسة الحالية ، بدأت التجربة في الساعة 17:00 مساء وانتهت في الساعة 09:00 صباحا ، وتم استخدام إعداد المضخة من 1-2 (استخدم طوال الوقت).</li>
		<li>ثم اضغط على زر البدء على شاشة التحكم في غرفة بخار CIE لبدء التجربة. 
		ملاحظة: قد تختلف هذه الخطوة اعتمادا على الغرفة المستخدمة والاختلافات في الإعداد. هنا ، بمجرد حقن جميع الفئران ووضعها في غرفة الإيثانول ، يجب أن تبدأ الغرفة في ضخ 95٪ من الإيثانول في قارورة زجاجية وتسخين الإيثانول السائل إلى بخار. يتدفق البخار عبر الغرفة حيث يتم احتجاز الفئران لمدة 16 ساعة / يوم لمدة 4 أيام (مساء الاثنين حتى صباح الجمعة). كل يوم ، تعاني الفئران من توقف البخار لمدة 8 ساعات. ثم تتم إزالة الفئران من الغرفة في نهاية اليوم الرابع (صباح الجمعة) وتبدأ 2 قبل الميلاد يوم الاثنين التالي. اعتمادا على نظام غرفة البخار المحدد والإعداد ، قد تكون هناك اختلافات في BECs ناتجة عن الإعدادات / مستويات البخار المختلفة. يمكن أن تسبب عوامل مختلفة ، مثل الاختلافات الطفيفة في مكونات النظام ، وتدفق الهواء ، والعادم ، وما إلى ذلك. يعد ضبط مستوى بخار الإيثانول بدلا من جرعة البيرازول مناسبا للحفاظ على BEC في النطاق المستهدف. مع تطور التسامح ، قد تكون BECs منخفضة جدا ، وقد يحتاج مستوى البخار إلى تعديل. إذا كان التدرج بين مستويات البخار شديد الانحدار لزيادة BECs ، فمن المستحسن ضبط جرعة البيرازول وفقا لذلك لتغيير BECs.</li>
		<li>قم بقياس BECs (انظر الخطوة 5.3) للفئران مرة واحدة على الأقل في الأسبوع أثناء CIE. قم بجمع الدم قبل 30 دقيقة من توقف البخار للتأكد من أن BECs لم تبدأ في الانخفاض. 
		ملاحظة: قد يحتاج مستوى البخار إلى التعديل أثناء التجربة حيث يتراكم تحمل الإيثانول على مدار عدة أسابيع. يجب اختبار BECs قبل وبعد ضبط إعدادات البخار.</li>
		<li>أعد الفئران إلى اختبار 2BC في الأسبوع التالي ل CIE. كرر الخطوتين 4 والخطوة 5. حافظ على الفئران بالتناوب بين CIE و 2BC لمدة أربع إلى ثماني دورات (8-16 أسبوعا) حتى يتصاعد استهلاك الإيثانول بشكل كبير مقارنة بحجم الشرب الأساسي.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>قياسات الدم
	<ol>
		<li>رتب المواد التالية: معدات لقياس BECs ، مثل نظام Analox ، والشفرة ، والأنبوب (0.2 مل) ، والهيبارين / EDTA ، وجهاز الطرد المركزي (انظر جدول المواد).</li>
		<li>قص ذيل فئران CIE مرة واحدة خلال أسبوع CIE ، قبل 30 دقيقة من إيقاف تشغيل نظام البخار ، لجمع الدم لتحديد BEC. يمكن إجراء جمع الدم باستخدام عدة طرق اعتمادا على تفضيلات المختبر< فئة sup = "xref">54. 
		ملاحظة: يتم جمع الدم في أنابيب 0.5 مل هيبارين أو مغلفة ب EDTA (انظر جدول المواد).</li>
		<li>الحفاظ على عينات الدم التي تم جمعها عند 4 درجات مئوية حتى تتم معالجتها.</li>
		<li>لمعالجة العينات ، قم أولا بجهاز طرد مركزي عند 208 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية لفصل البلازما.</li>
		<li>حدد تركيزات الإيثانول في الدم باستخدام محلل الإيثانول بمعدل الأكسجين (انظر جدول المواد) أو أنظمة أخرى قادرة على تحديد BECs.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Modeling Alcohol Use Disorder Using Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure

موري كول هو مالك ومشغل شركة La Jolla Alcohol Research Inc.

يمثل اضطراب تعاطي الكحول مشكلة صحية عامة عالمية ذات انتشار مرتفع وتكلفة للمجتمع56. لدراسة AUD في النماذج الحيوانية قبل السريرية ، فإن الطريقة الشائعة في الفئران هي 2BC / CIE20،34،43،44،51،57،58،59. هنا ، تم استخدام هذا النموذج الراسخ...

اضطراب تعاطي الكحول (AUD) ، والذي ينطوي على استهلاك الكحول المفرط المزمن ، هو أحد أكثر الاضطرابات النفسية شيوعا وهو مشكلة عالمية. تتضمن أعراض AUD دورات متكررة من التسمم والانسحاب والرغبة الشديدة وتتميز بالاستهلاك المستمر للكحول دون اعتبار للعواقب الاجتماعية والمهنية والصحية1,2,3,4,5,6,7. غالبا ما يحدث اضطراب تعاطي الكحول بالتزامن مع الاضطرابات النفسية الأخرى المنتشرة والمستمرة والضعيفة < فئة الدعم = "xref" >8 ، مثل اضطراب فرط الحركة ونقص الانتباه < فئة الدعم = "xref" >9 ، أو فئة القلق 10 ، أو الاكتئاب < فئة الدعم = "xref">11 وهو مسؤول عن ما يقرب من 88,000 حالة وفاة سنويا في الولايات المتحدة وحدها< فئة الدعم = "xref">2. يمكن أن يؤثر تعاطي الكحول المفرط أو المتكرر على حالة عمل الشخص وعلاقاته الاجتماعية12 وقد يؤدي إلى زيادة العنف < فئة الدعم = "xref">13. جسديا ، يمكن أن يؤدي الانسحاب الحاد من الكحول إلى القلق والإثارة والرعشة والتعرق المفرط وتغير الوعي والهلوسة< فئة الدعم = "xref">14,15. علاوة على ذلك ، قد يشعر الأشخاص بأعراض الانسحاب عند التقليل من الشرب أو التوقف عنه ويصبحون سريعي الانفعال أو غريب الأطوار < فئة السوب = "xref">16. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يتسبب استهلاك الكحول المزمن في فقدان الذاكرة < فئة الدعم = "xref" >17 ويمكن أن يؤدي إلى نقص الثيامين ، المعروف أيضا باسم متلازمة فيرنيك كورساكوف (WKS) ، والذي يساهم بشكل كبير في الخرف الناجم عن الكحول < فئة الرفع = "xref">18.
لمزيد من النهوض بأبحاث AUD ، من الضروري أن يكون لديك نماذج حيوانية ذات صلة بالمرض من الناحية الترجمية. النموذج الأكثر شيوعا ل AUD في القوارض هو التعرض المتقطع المزمن لبخار الإيثانول (CIE) ، وهو نهج راسخ للحث على الاعتماد على الكحول من خلال الاستنشاق المتكرر لبخار الكحول 4،19،20،21،22،23,24 ، 25 ، < up class = "xref" > 26 ، 27 ، < up class = "xref" > 28 ، < up class = "xref" > 29 ، 30. تحفز إجراءات CIE القوارض أعراض الانسحاب مثل التشنجات التي يسببها التعامل < فئة sup = "xref" >31 ، فرط الاستثارة ، السلوك الشبيه بالتهيج ، السلوك الشبيه بالقلق ، واضطرابات النوم وتؤدي إلى تصعيد شرب الكحول < فئة الدعم = "xref" > 22 ، 32 ، 33 ، 34 ، 35. علاوة على ذلك ، يؤدي CIE إلى تصعيد كبير في الاستهلاك الطوعي للكحول ، مما يعكس المدخول القهري الذي لوحظ في AUD36. خلال مراحل التسمم ، تظهر الفئران علامات سلوكية وفسيولوجية تتفق مع تسمم الكحول لدى البشر ، بما في ذلك الرنح والتخدير وضعف انخفاض حرارة الجسم< فئة الدعم = "xref">37,38,39. تؤكد هذه النتائج على فائدة نموذج CIE في التقاط كل من الجوانب العصبية والسلوكية لإدمان الكحول ، مما يجعله أداة قيمة لتوضيح آليات AUD واختبار التدخلات العلاجية المحتملة. في النماذج قبل السريرية ل AUD ، مثل التعرض لبخار الإيثانول المتقطع المزمن (CIE) ، تظهر الفئران علامات سلوكية وفسيولوجية توازي تسمم الكحول البشري والاعتماد عليه. خلال مراحل التسمم ، قد تظهر على الفئران علامات بما في ذلك الرنح والتخدير وانخفاض السلوك الاستكشافي وضعف رد الفعل التصحيحي. بالنظر إلى هذه المخاطر ، تمت مراقبة عن كثب أثناء وبعد التعرض لبخار الإيثانول لتحديد علامات التسمم الشديد أو التدهور الصحي.
في الفئران ، غالبا ما يتضمن نموذج CIE الإدارة الذاتية الفعالة للكحول لقياس تصاعد المدخول 40،41 ، 42 ، في حين أن نموذج الماوس يتضمن CIE واختيار زجاجتين (2BC) للشرب < فئة الدعم = "xref" >43 ، 44. أظهرت النماذج قبل السريرية لإدمان الكحول باستمرار أن تزيد من تناولها للإيثانول بعد التعرض المزمن لبخار الإيثانول < فئة sup = "xref" > 23 ، 45 ، 46 ، 47. في الفئران على وجه التحديد ، ثبت أن الدورات المتكررة من CIE تصعد تناول الإيثانول الطوعي < فئة sup = "xref" >3 ، 21 ، 48 ، 49 ، 50. بشكل عام ، تظهر الدراسات السابقة أن نموذج CIE كاف لزيادة استهلاك الإيثانول ونموذج AUD في القوارض.
تهدف هذه الدراسة إلى تسليط الضوء على طريقة CIE لدراسة AUD ، وبشكل أكثر تحديدا ، التركيز على نموذج الماوس 2BC / CIE. نمر بعملية مفصلة للخطوات اللازمة لأداء 2BC / CIE ونقدم مثالا على تصاعد شرب الكحول بعد CIE.

<table><tbody><tr><td>500 أنابيب إيبندورف</td><td>إيبندورف</td><td>L203896J</td><td></td></tr><tr><td>95٪ إيثانول</td><td>مختبرات ديكون</td><td>2816</td><td></td></tr><tr><td>آلة Analox</td><td>Analox Instruments</td><td>Analox-AM1</td><td></td></tr><tr><td>مقياس وزن</td><td>كينت Scientific</td><td>SCL-4000</td><td></td></tr><tr><td>Binder Clips</td><td>Office</td><td>Depot 560394</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6J الفئران</td><td> مختبر جاكسون</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>جهاز طرد مركزي</td><td>Eppendorf</td><td>5418R</td><td></td></tr><tr><td>غرفة بخار متقطعة مزمنة</td><td>La Jolla Alcohol Research Inc</td><td></td><td>مواد مصنوعة حسب الطلب</td></tr><tr><td>Heparin / EDTA</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>TS / DRUGS / 2/2015</td><td></td></tr><tr><td>الفراش الفأر</td><td>Bed-o ' تملأ الكيزان</td><td>8B</td><td>بزجاجة</td></tr><tr><td></td><td></td><td>شرب فأر</td> عميقة 1/8 <td>بوصة مواد مصنوعة حسب الطلب</td></tr><tr><td>Pyrazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>bccc6397</td><td></td></tr><tr><td>Teklad global 18٪ بروتين (طعام الفأر)</td><td>Teklad global</td><td>Envigo 2018</td><td></td></tr></tbody></table>

التعرض المتقطع المزمن لبخار الإيثانول مقترنا باختيار زجاجتين لنمذجة اضطراب تعاطي الكحول

Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure Paired with Two-Bottle Choice to Model Alcohol Use Disorder

اضطراب تعاطي الكحول (AUD) هو اضطراب مزمن مرتبط بالكحول يظهر عادة على شكل شرب غير منضبط وانشغال بالكحول. يتمثل أحد المكونات الرئيسية لأبحاث AUD في استخدام نماذج ما قبل السريرية ذات الصلة الترجمة. على مدى العقود العديدة الماضية ، تم استخدام مجموعة متنوعة من النماذج الحيوانية لدراسة الدولار الأسترالي. أحد النماذج البارزة ل AUD هو نموذج التعرض المتقطع المزمن لبخار الإيثانول (CIE) ، وهو نهج راسخ للحث على إدمان الكحول في القوارض من خلال دورات متكررة من التعرض للإيثانول عن طريق الاستنشاق. لنمذجة AUD في الفئران ، يقترن التعرض ل CIE باختيار طوعي من زجاجتين (2BC) لشرب الكحول والماء لقياس تصاعد شرب الكحول. يتضمن إجراء 2BC / CIE أسابيع متناوبة من شرب 2BC و CIE ، والتي تتكرر حتى يتم تحقيق تصاعد شرب الكحول. في هذه الدراسة ، نحدد إجراءات أداء 2BC / CIE ، بما في ذلك الاستخدام اليومي لغرفة بخار CIE ، ونقدم مثالا على تصاعد شرب الكحول في الفئران C57BL / 6J باستخدام هذا النهج.

في هذه الدراسة التمثيلية الحالية، تم تسجيل تناول الإيثانول (g/kg) خلال 2BC أثناء فترة الشرب الأساسية وبعد أسابيع من CIE (ما بعد التبخير). وباختصار، وكما هو موضح في البروتوكول، كان لدى الفئران خلال 2BC إمكانية الوصول إلى زجاجتين: واحدة تحتوي على الماء والأخرى تحتوي على إيثانول بتركيز 15% (w/v). وبعد تحديد معدلات التناول الأساسية، تم تقسيم الخاضعين للدراسة وتوزيعهم بالتساوي على مجموعة CIE أو مجموعة الهواء. وقد استقر تناول الإيثانول الأساسي الأولي خلال فترة الثلاثة أسابيع عند 2.00 g/kg ± 0.21 g/kg (n = 15) قبل البدء في CIE ...

معروض هنا بروتوكول لنموذج 2BC / CIE لإدمان الكحول في الفئران لدراسة اضطراب تعاطي الكحول.

Alcohol use disorder (AUD) is a chronic alcohol-related disorder that typically presents as uncontrolled drinking and preoccupation with alcohol. A key ...

chronic-intermittent-ethanol-vapor-exposure-paired-with-two-bottle

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

اضطرابات استخدام الكحول (AUD) مشكلة صحية وطنية كبرى ومطلوب تطوير علاجات أكثر فعالية لمواجهة احتياجات السكان هذا المريض. وتحقيقا لهذه الغاية، تستخدم البروتوكول التالي نموذجين الشرب القوارض بسيطة لتقييم فعالية الإكلينيكية لمركبات الكحول المضادة الرصاص.

الفاري شرب النماذج في وضع فارماكوثيرابيس لإدمان الكحول: شرب في اختيار الظلام واثنين--زجاجة

يصف هذا البروتوكول نموذجا قياسيا لشرب القفص المنزلي المكون من زجاجتين للوصول المتقطع لنمذجة استهلاك الكحول في الفئران. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يوفر إرشادات خطوة بخطوة لزيادة البروتوكول القياسي باستخدام نظام الكشف عن اللعق DIY الذي يتيح التحليل المجهري لسلوك الشرب.

نمذجة استهلاك الكحول في القوارض باستخدام الشرب في القفص المنزلي المكون من زجاجتين وتحليل البنية المجهرية

وفحص بسيط لقياس الآثار المسكنة للإيثانول...

طريقة بسيطة لقياس حساسية الايثانول في الذباب

هذا التقرير يوضح تقنية لعزل الخلايا العصبية ميكانيكية قابلة للحياة الفردية الاحتفاظ حبات قبل المشبكي المرفقة. Vibrodissociated الخلايا العصبية لديها مزايا الإنتاج السريع ، ومراقبة الدوائية ممتازة وتحسين الفضاء المشبك دون تأثير من الخلايا المجاورة. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتصوير وتسجيل العناصر متشابك التصحيح ، المشبك.

Vibrodissociation من الخلايا العصبية من الدماغ القوارض شرائح لدراسة نقل صورة متشابك ومحطات قبل المشبكي

وهناك طريقة لتحديد مسار الوقت للتركيز الإيثانول في أدمغة الفئران من خلال الإيثانول فعال يوصف الإدارة الذاتية. يتم استخدام اللوني للغاز مع الكشف عن تأين اللهب لتحديد الايثانول في عينات ديالة، لأنه لديه حساسية المطلوبة لكميات صغيرة التي يتم إنشاؤها.

Microdialysis من الإيثانول خلال فعال الإيثانول الإدارة الذاتية والايثانول تقرير بواسطة جهاز الكروماتوجرافي الغازي

ووصف العمودي، T-متاهة olfactometer لمعايرة الاستجابة السلوكية للالمفصليات. وolfactometer يسمح للمجرب لقياس الخيارات التي يؤديها اختبار المواضيع عندما تتعرض لحقلين رائحة المحتملة. ويمكن قياس كل من الجذب والتنافر لمن odorants مع هذا الجهاز.

الفحص العمودي اختيار T-متاهة للاستجابة لالمفصلي Odorants

وقد برزت ذبابة الفاكهة كنظام نموذج كبير للتشريح الأسس الخلوية والجزيئية من الاستجابات السلوكية للكحول. هنا نقدم بروتوكول لجمع البيانات حساسية الكحول في سياق الإيقاعية التي يمكن تطبيقها بسهولة على التجارب الأخرى ومناسبة تماما للبحوث الجامعية.

وFlyBar: إدارة الكحول الذباب

التسجيلات الزوجية عبارة عن تسجيلات متزامنة لمشبك تصحيح الخلية بأكملها من خليتين خليتين عصبيتين متصلتين متشابكيا ، مما يتيح التوصيف الفيزيولوجي الكهربي والدوائي الدقيق للمشابك بين الخلايا العصبية الفردية. نصف هنا المنهجية التفصيلية والمتطلبات لإنشاء هذه التقنية في مزارع شرائح الحصين العضوية في أي مختبر مجهز للفيزيولوجيا الكهربية.

تقرن تسجيلات خلية كاملة في عضوي شرائح الحصين

المقايسات المباشرة لقياس حساسية الإيثانول والتسامح السريع في ذبابة الفاكهة تسهل استخدام هذا الكائن الحي النموذجي للتحقيق في هذه السلوكيات المهمة المتعلقة بالإيثانول. هنا ، يتم وصف اختبار بسيط نسبيا وقابل للتطوير لقياس حساسية الإيثانول والتسامح السريع في الذباب.

و، الفحص السلوكية قابلة غير مكلفة لقياس الإيثانول التخدير الحساسية والتسامح السريع في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

C. elegans هو نموذج مفيد لدراسة تأثيرات الإيثانول على السلوك. نقدم اختبارًا سلوكيًا يقيس تأثيرات الإيثانول على سرعة الحركة من الديدان الزاحفة؛ يمكن قياس كل من الحساسية الأولية وتطور التسامح الوظيفي الحاد للإيثانول مع هذا الاختبار.

على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

اكتشف نموذج اختيار زجاجتين مع التعرض المتقطع المزمن للإيثانول لدراسة اضطراب تعاطي الكحول في الفئران. يتيح هذا البروتوكول مراقبة سلوك الشرب بدقة وتحليل التغيرات العصبية الحيوية المرتبطة بالاعتماد على الكحول.

التعرض المتقطع المزمن لبخار الإيثانول مقترنا باختيار زجاجتين لنمذجة اضطراب تعاطي الكحول

استكشف المزيد من الفيديوهات