تقييم تأثير نظام معالج خلايا التبريد الجديد على مرفق عزل الخلايا الجزرية
أغسطس 11, 2023
يصف البروتوكول هنا نظام معالج خلية تبريد مخصص متوافق مع غرفة الأبحاث لممارسات التصنيع الجيدة (GMP) لتحسين قابلية الخلية للمعالجة اللاحقة.
مرحبا ، أنا دكتور جهاد ، مدير مختبر المركز P. الهدف اليوم من هذا الفيديو هو إظهار معالج خلية مبردة مكيف يستخدم في منشأة عزل العيينة دون أي تأثير في البيئة وكذلك في استعادة الخلايا. ابدأ بالتبريد المسبق لتدرجات الكثافة الخفيفة والثقيلة ومجموعة معالج الخلية عند أربع درجات مئوية.
بعد ذلك ، قم بإعداد معالج الخلية عن طريق التبريد المسبق لمدة 45 دقيقة. أدخل مجموعة معالج الخلية المبردة مسبقا في معالج الخلية لصانع التدرج المزدوج المبرد بالإيثانول القياسي. قم بتوصيل الغرفتين الزجاجيتين ووضعهما على تحريك مغناطيسي ، وقم بتثبيت الأنبوب بين الغرفتين. برد.
صانع التدرج مع مبرد دائري للإيثانول عند صفر درجة مئوية بعد التبريد. اضبط سرعة المضخة على 150 مل في الدقيقة لملء الغرفة ب 130 مل من تدرج الكثافة الثقيلة في الجزء السفلي من الكيس. بمجرد أن يكون التدرج الثقيل في الكيس ، أغلق الإرقاء بين غرفتين.
ثم أضف 130 مل من الكثافة العالية إلى الدورق الأمامي و 140 مل من التدرجات منخفضة الكثافة إلى الدورق الخلفي.Dec. قم بتثبيت الإرقاء بين الغرفتين ، ثم اضبط سرعة المضخة 50 مل في الدقيقة لإنشاء تدرج مستمر بين غرفتين. بعد ذلك ، قم بإعداد خلايا معطف مصفرة أحادية النواة للتنقية من العديد من معاطف بافي المجهولة التي تم جمعها من فضلات الدم الكاملة التي يوفرها بنك الدم.
بعد الفصل ، أضف خمسة ملليلتر من الثقل النوعي الذي يشبه تعليق الخلية أحادية النواة منخفض الكثافة إلى 95 مل من وسط التدرج عالي الكثافة في كيس نقل باستخدام مضخة تمعجية مضبوطة على 25 مل في الدقيقة. قم بتحميل التدرج المشكل مسبقا بسعة 30 مل من تعليق الخلية أحادية النواة باستخدام مسبار حراري معاير مسبقا. استمرار. قم بقياس درجة الحرارة داخل معالج الخلية باستخدام مزدوج حراري رقمي متصل بمسبار حراري معقم.
مراقبة درجة حرارة التدرجات والخلايا أثناء العملية. في نهاية تحميل التدرج ، اضبط معالج الخلية على 537 G لتقليل الحرارة الناتجة عن الدوار. قم بإيقاف تشغيل المعالج الخلوي للسماح للنظام الهيدروليكي بالعودة إلى مستويات ما قبل التشغيل وتحرير الهواء.
ثم أعد تشغيل معالج الخلية عند 537 جم وأضف 130 مل من التدرجات الثقيلة و 140 مل من التدرجات منخفضة الكثافة لإنشاء تدرج كثافة مستمر بمعدل تدفق 50 مل في الدقيقة و 4.3 درجة مئوية. بعد ذلك ، قم بتحميل 30 مل من تعليق خلية معطف بافي فوق تدرج كثافة الحمل بمعدل تدفق 25 مل في الدقيقة وست درجات مئوية. بعد تحميل الخلية ، أضف 50 مل من محلول الغسيل إلى معالج الخلية بعد خمس دقائق.
اجمع التدرج المغزول في 12 زجاجة بمعدل تدفق 100 مل في الدقيقة وخمس درجات مئوية أنبوب تعبئة ، واحد به 100 مل من وسائط الغسيل و 150 مل من الخلايا. ثم املأ الأنابيب من اثنين إلى 12 ب 225 مل من وسائط الغسيل و 25 مل من الخلايا. أظهر تقييم الجسيمات المحمولة جوا في بيئة الغرفة النظيفة والدرجة C والدرجة B أنه لم يكن هناك فائض من 0.5 وخمسة ميكرون من الجسيمات المحمولة جوا وفقا لمعايير الغرفة النظيفة ، GMP من الدرجة C ، الدرجة B و BSL الثلاثة.
لم يلاحظ أي اختلاف كبير في درجات حرارة التدرج خلال الخطوات الأربع الأولى مع الحفاظ على كلا المعالجين حوالي 4.5 درجة مئوية. ومع ذلك ، بعد الطرد المركزي وأثناء خطوات التجميع ، ارتفعت درجة الحرارة في بداية ونهاية خطوات التجميع لكلا المعالجين. علاوة على ذلك ، تؤثر معالجات الخلايا المبردة على تنقية الخلايا البشرية.
تم تحديد الكفاءة والجدوى بعد الطرد المركزي. ارتفعت درجة حرارة الخلايا التي تم جمعها قليلا إلى 8.5 درجة مئوية. لم يظهر أخذ عينات الهواء النشط وفحص العقم أي نمو.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
نظرة عامة
تركز هذه الدراسة على نظام مخصص لمعالجة الخلايا المبردة والمصمم للاستخدام في غرفة نظيفة متوافقة مع ممارسات التصنيع الجيد (GMP) لتعزيز حيوية الخلايا بعد المعالجة. توضح الطريقة خطوات تحضير واستخدام المعالج، مما يحسن استعادة الخلايا أحادية النواة البشرية المنقاة من منتجات نفايات الدم.
المكونات الرئيسية للدراسة
مجال البحث
- حيوية الخلايا
- بروتوكولات الغرف النظيفة
- معالجة الخلايا البشرية
خلفية علمية
- أهمية الحفاظ على درجات حرارة منخفضة أثناء معالجة الخلايا
- التحديات التي تواجه استعادة الخلايا الحية بعد المعالجة
- الامتثال لمعايير ممارسات التصنيع الجيد (GMP) في بيئات معالجة الخلايا
الطرق المستخدمة
- تجزئة بالكثافة المتدرجة*
- خلايا الطبقة الرغوية أحادية النواة البشرية
- مراقبة درجة الحرارة باستخدام مزدوجة حرارية رقمية
النتائج الرئيسية
- إثبات كفاءة استعادة الخلايا دون حدوث زيادات ملحوظة في درجة الحرارة
- الحفاظ على الظروف المعقمة مع عدم تجاوز الحد المسموح به من الجسيمات المنقولة جواً
- ضمان حيوية ونقاء الخلايا البشرية المعالجة بعد عملية الطرد المركزي
الاستنتاجات
- يعزز البروتوكول بفعالية من حيوية الخلايا البشرية ونتائج المعالجة
- يساهم هذا النظام في تطوير منهجيات معالجة الخلايا ذات الصلة بالتطبيقات السريرية
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
يعد الحفاظ على التحكم الأمثل في درجة الحرارة أثناء معالجة الخلايا أمراً بالغ الأهمية للحفاظ على حيوية الخلايا ووظائفها في تصنيع العلاج الخلوي. ويعالج إدخال نظام معالجة الخلايا المبرد بشكل مباشر مخاطر الإجهاد الحراري أثناء عملية الطرد المركزي، مما يدعم تحقيق معدلات استرداد وحيوية أعلى لمجموعات الخلايا العلاجية. وتعزز هذه القدرة من موثوقية سير عمل عزل الخلايا وتتماشى مع متطلبات الغرف النظيفة وفق ممارسات التصنيع الجيد (GMP) لإنتاج العلاجات المتقدمة.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية
الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف
- يتيح تقييماً قوياً لحيوية الخلايا ووظائفها بعد المعالجة من أجل الدراسات البيولوجية اللاحقة.
- يقلل من التأثيرات الحرارية المربكة، مما يدعم تفسيراً أكثر وضوحاً للمقاييس القائمة على الخلايا.
- يعزز الثقة في الصلة البيولوجية لمجموعات الخلايا المعزولة من أجل التحقق من الأهداف.
الفحص وتطوير المقايسة
- يسهل تحضير عينات خلوية ذات حيوية عالية لمنصات تطوير المقاييس والفحص.
- يدعم عزل الخلايا بشكل معياري وقابل للتكرار، مما يقلل من التباين بين الدفعات.
- يضمن مقاييس استعادة كمية لتقييم المركبات بشكل موثوق في المقاييس الخلوية.
الأبحاث الانتقالية وما قبل السريرية
- يوائم ظروف معالجة الخلايا مع معايير التصنيع السريري، مما يدعم الاستمرارية الانتقالية.
- يتيح التقدم المدروس والمعدل وفقاً للمخاطر لمرشحي العلاج الخلوي من خلال الحفاظ على السمات الوظيفية للخلايا.
- يوفر منصة للتحقق من تغييرات العمليات دون المساس بالامتثال لمتطلبات الغرف النظيفة وفق ممارسات التصنيع الجيد (GMP).
تكامل مسار العمل وسير العمل
يدمج نظام معالجة الخلايا المبرد هذا في مسار العلاج الخلوي بدءاً من العزل المبكر للخلايا وصولاً إلى الأبحاث قبل السريرية والترجمية، مما يدعم بيئات الاكتشاف والتصنيع على حد سواء.
- بيولوجيا الاكتشاف: تعزز من اختبار الفرضيات من خلال ضمان سلامة الخلايا أثناء عملية العزل.
- الفحص المسحي: توفر تحضيرات خلوية قابلة للتكرار وذات حيوية عالية لتكون جاهزة للاختبار.
- التحليلات: توفر قراءات كمية لدرجة الحرارة والحيوية لمراقبة العملية.
- الأبحاث الانتقالية: تحافظ على ظروف متوافقة مع ممارسات التصنيع الجيد (GMP) لسير عمل العلاج الخلوي في المراحل قبل السريرية والسريرية.
- إعادة الاستخدام المؤسسي: توفر حلاً للتبريد قابل للتوسع وبأقل قدر من التدخل، ويمكن تكييفه عبر منصات معالجة الخلايا المختلفة.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: تزيد من الثقة التنبؤية في المقايسات القائمة على الخلايا وتقلل من الغموض الميكانيكي الناتج عن الآثار الحرارية الاصطناعية.
- القيمة التشغيلية: توحد التحكم في درجة الحرارة، مما يدعم إمكانية إعادة الإنتاج والقابلية للتطوير في معالجة الخلايا.
- القيمة الاستراتيجية: تتيح اتخاذ قرارات أفضل بشأن المضي قدماً أو التوقف من خلال ضمان منتجات خلوية عالية الجودة للتطبيقات اللاحقة.
- التأثير على المحفظة: تدعم تحديد الأولويات للمرشحين للعلاج الخلوي بناءً على المخاطر المعدلة من خلال تحسين موثوقية العملية.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة في معالجة الخلايا وعمليات الغرف النظيفة.
- يتطلب التكامل مع أنظمة مراقبة درجة الحرارة وأجهزة المزدوجات الحرارية الرقمية.
- يستلزم الالتزام بمعايير الغرف النظيفة الخاصة بممارسات التصنيع الجيد (GMP) لضمان التعقيم والتحكم في الجسيمات.
- قابل للتكيف مع أنواع مختلفة من الخلايا وبروتوكولات تدرج الكثافة بأقل قدر من التعديلات.
- يتقيد بمدى توفر المواد المانحة لغرض التحقق في مناطق معينة.
