نوفمبر 10, 2023
نقدم هنا بروتوكولا لدراسة معدل بدء موت الخلايا المبرمج عن طريق التصوير المستمر للأوراق الملقحة بعد تحريض موت الخلية.
للبدء ، انقل نباتات البطاطس المصابة بالفيروس إلى غرفة نمو يتم الحفاظ عليها عند 22 درجة مئوية. اختر نباتا للمراقبة واستخدم شريطا لاصقا لشل حركة الورقة الملقحة الثانية بالكامل. بعد ذلك ، قم بتوصيل المجهر الرقمي بالكمبيوتر وابدأ تشغيل برنامج التقاط الصور.
ضع الورقة تحت المجهر. ثم استخدم القرص للتركيز على سطح الورقة. لضبط إعدادات الكاميرا، انقر فوق زر الإعدادات.
الآن اضبط السطوع على 64 ، والتباين على 14 وتدرج اللون على الصفر. بعد ذلك ، اضبط توازن اللون الأبيض ، ثم اضبط التشبع على 47 ، والحدة على الصفر وجاما على خمسة. انقر على أيقونة التقاط الصورة وحدد خيار الفيديو المنقضي زمنيا.
بعد ذلك ، قم بتعيين التقاط الصور لكل 15 دقيقة لمدة 24 ساعة. اضغط على زر البدء لبدء التقاط الصورة. لحفظ الصور الملتقطة ، حدد جميع الصور وانقر فوق رمز الحفظ.
اختر الآن خيارات التصدير ، ثم اضبط النقاط في البوصة على الحد الأقصى. بمجرد الحفظ ، احذف جميع الصور من البرنامج. لتحرير الصور ، قم بتشغيل برنامج تحرير مثل ImageJ.
انقر فوق ملف ، ثم حدد استيراد ، واختر تسلسل الصور لاستيراد التسلسلات الزمنية للصور من مجال رؤية واحد. الصق مسار دليل الصور المحفوظة ، واضغط على موافق. بمجرد اكتمال التحويل ، ستقوم ImageJ تلقائيا بتشغيل مشغل فيديو داخلي يعرض الفيديو النهائي.
انقر فوق ملف ، ثم احفظ باسم وحدد تنسيق AVI لتصدير ملف الفيديو. عند فتح نافذة صغيرة ، اضبط معدل الإطارات على 0.3 إطارا في الثانية ، ثم اضغط على موافق لحفظ الفيديو كملف AVI. تم استخدام نباتات البطاطس الملقحة التي يبلغ عمرها ثلاثة إلى أربعة أسابيع مع ما لا يقل عن ثلاثة إلى أربعة أوراق مكتملة النمو للتحليل المجهري الرقمي.
لوحظت نفس المنطقة على الورقة الملقحة كل 15 دقيقة لتحديد حدوث الآفة وتمددها بمرور الوقت. في 14 ساعة من الملاحظة ، لم تكن هناك آفة مرئية. بعد حوالي 90 دقيقة ، تم تسجيل آفة مرئية.
بدأت الآفة في التوسع بعد ساعتين ، واستمرت في التوسع خلال الساعات الثماني والنصف التالية.
تبحث هذه الدراسة في معدل بدء الموت الخلوي المبرمج في نباتات البطاطس باستخدام بروتوكول تصوير مستمر لمراقبة الأوراق الملقحة. وتسمح هذه الطريقة بتحديد التوقيت الدقيق لتكون الآفات، مما يوفر رؤى حول ديناميكيات الاستجابة فائقة الحساسية للمقاومة الخفية.
يتيح التكميم الدقيق لبداية موت الخلايا في الأنظمة النباتية اختباراً قوياً للفرضيات المتعلقة بالمحددات الجينية والجزيئية للاستجابة فائقة الحساسية. كما يدعم المجهر الرقمي عالي الدقة الثقة التنبؤية في تحديد المكونات التي تعدل موت الخلايا المبرمج، مما يؤثر بشكل مباشر على الاكتشاف المبكر والتحقق من الأهداف في التكنولوجيا الحيوية النباتية. وتعزز هذه القدرة قرارات إدارة المحفظة البحثية من خلال تمكين التقييم السريع والقابل للتكرار لوظيفة الجينات المرشحة في الأنظمة ذات الصلة بالأمراض.
يدمج بروتوكول المجهر الرقمي هذا في التسلسل المبكر من مرحلة الاكتشاف إلى التحقق، مما يتيح الاختبار السريع للفرضيات والتقييم الوظيفي للجينات المرشحة أو العلاجات في الأنظمة النباتية.