Name: نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر للسكتة الدماغية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: تعلم تقنية انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر في الفئران لتقييم إصابات السكتة الدماغية. يستخدم هذا البروتوكول التصوير بالرنين المغناطيسي والاختبارات السلوكية لتقييم فعالية العوامل العصبية الواقية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

دراسة مدعومة بالمنحة PID2020-113202RB-I00 الممولة من وزارة العلوم والابتكار (MCIN) / الوكالة الحكومية للتحقيق (AEI) ، Gobierno de España / 10.13039 / 501100011033 و "الصندوق الأوروبي للتنمية الإقليمية (ERDF). طريقة لصنع أوروبا". حصل NCC و MAR على زمالات ما قبل الدكتوراه (PRE2021-099481 و PRE2018-085737 ، على التوالي) بتمويل من MCIN / AEI / 10.13039 / 501100011033 ومن قبل "الصندوق الاجتماعي الأوروبي (ESF) الاستثمار في مستقبلك". ونشكر فرانسيسكا رويز - جيان وليوناردو ماركيز - كيسينوسكي على دعمهما التقني. نحن نقر بدعم مرفق التصوير بالرنين المغناطيسي التابع لمعهد التحقيقات الحيوية في أغسطس بي إي سونير (IDIBAPS). يدعم برنامج مراكز أبحاث كاتالونيا (CERCA) التابع ل Generalitat de Catalunya IDIBAPS.

تم إجراء العمل الحيواني وفقا للقوانين الكاتالونية والإسبانية (Real Decreto 53/2013) والتوجيهات الأوروبية ، بموافقة اللجنة الأخلاقية (Comité Ètic d'Experimentació Animal ، CEEA) بجامعة برشلونة ، والهيئات التنظيمية المحلية ل Generalitat de Catalunya. يتم الإبلاغ عن الدراسات وفقا لإرشادات ARRIVE. تم تصميم هذا الإجراء ليتم إجراؤه في الفئران البالغة ، بدءا من عمر 8 أسابيع ، بدون حد للسن. يتم توفير أمثلة على الإجراء الجراحي الذي تم تطويره في الفئران C57BL / 6 من عمر 10-12 أسبوعا هنا. يجب مراعاة الاختلافات التشريحية اعتمادا على سلالة الماوس.
1. إعداد
<ol><li>قبل البدء في العملية الجراحية ، قم بجمع وتعقيم جميع المواد والأدوات المطلوبة. قم بإعداد طاولة العمليات بجميع المواد الجراحية اللازمة (المدرجة في جدول المواد).</li>
	<li>تخدير باستخدام استنشاق الأيزوفلوران في خليط من الأكسجين وأكسيد النيتروز (30٪ / 70٪).</li>
	<li>يجب تطبيق البوبرينورفين (انظر جدول المواد) تحت الجلد بجرعة 0.05 ملغم/كغ من وزن الجسم لتوفير التسكين وتخفيف أي ألم أو إزعاج. ملاحظة: التسكين إلزامي ، ولكن يتم قبول بروتوكولات مختلفة. يجب أيضا التحكم في علامات الألم وعدم الراحة خلال الأيام الأولى بعد MCAo (انظر الخطوة 4). تطبيق الحلول التصحيحية عند الضرورة.</li>
	<li>ضع في صندوق تحريض التخدير (انظر جدول المواد) مع 5٪ إيزوفلوران حتى يصل إلى حالة التخدير العميق (فقدان المنعكس في ثقب المخلب ومنعكس العين).</li>
	<li>ضع الماوس على طاولة العمليات وقلل مستوى الأيزوفلوران إلى 1.5٪ ، ويتم تسليمه بواسطة قناع الوجه. ضع مرهم الطبيب البيطري لتجنب جفاف العين أثناء العملية.</li>
	<li>الحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 ± 0.5 درجة مئوية يتم التحكم فيها بواسطة مسبار مستقيمي متصل بوسادة تدفئة (انظر جدول المواد).</li>
	<li>حلق الجزء البطني من الرقبة والرأس (كالفاريا) بشفرة كهربائية. قم بإزالة حطام الفراء بعناية وتطهير مناطق الجلد ثلاث مرات في حركات دائرية باستخدام مطهر قائم على اليود و 70٪ كحول. .</li>
</ol>2. تقييم تدفق الدم الدماغي (CBF) باستخدام قياس تدفق دوبلر بالليزر (LDF)
<ol><li>باستخدام المقص ، قم بعمل شق على جلد الرأس ، في اتجاه الخيط السهمي ، من الأذنين إلى المنطقة الواقعة بين العينين.</li>
	<li>سحب الجلد وإزالة السمحاق على الجانب الأيمن من الجمجمة.</li>
	<li>ابحث عن الإحداثيات (2.5 مم جانبي من Bregma) وأرفق حامل دوبلر (انظر جدول المواد) باستخدام cyanoacrylate. بعد أن يجف الغراء ، قم بتوصيل مسبار دوبلر وتحقق من قراءة الإشارة الصحيحة.</li>
</ol>3. انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر (tMCAo)
<ol><li>اقلب الماوس إلى وضع ضعيف ، وقم بتثبيته على طاولة الجراحة بشريط طبي.</li>
	<li>جعل شق خط الوسط على الرقبة. اسحب الجلد والغدد اللعابية بشكل جانبي باستخدام المبعدات (انظر جدول المواد) لفضح المنطقة السباتية.</li>
	<li>تحديد تشريح الأوعية الدموية للشريان السباتي المشترك (CCA) ، و ICA ، و ECA ، وكذلك الشرايين المختلفة المشتقة منها (الفك العلوي واللساني ، الغدة الدرقية العلوية ، القذالي ، والظفرة الحنكية) (الشكل 1 أ).</li>
	<li>افصل الشرايين الرئيسية عن النسيج الضام المجاور بحيث يمكن التعامل معها. ملاحظة: احرص بشكل خاص على عدم إتلاف الأعصاب ، وخاصة العصب المبهم ، الذي يعمل بالتوازي مع CCA.</li>
	<li>لف خياطة حريرية 6-0 (انظر جدول المواد) حول ECA عند التشعب الفكي / اللساني. تأمين عقدة بإحكام لمقاطعة الدورة الدموية بشكل دائم.</li>
	<li>مرر خياطة ثانية حول نفس الشريان ، بين العقدة الأولى وتشعب CCA ، وحافظ على هذه العقدة فضفاضة.</li>
	<li>ضع خيطا ثالثا حول CCA واربط عقدة انزلاقية يمكن فكها بسهولة. ملاحظة: يمكن أيضا إجراء ذلك باستخدام مشبك الأوعية الدموية ، لكن الخيط يسمح بمزيد من الحركة والمرونة. في هذه المرحلة ، من الممكن ملاحظة أول انخفاض في CBF في إشارة LDF.</li>
	<li>ضع مشبك الأوعية الدموية (انظر جدول المواد) يقطع الدورة الدموية من ICA.</li>
	<li>قم بعمل شق صغير في ECA ، بالقرب من المنطقة التي توجد بها العقدة الضيقة.</li>
	<li>أدخل الشعيرات الأحادية حتى يدخل الطلاء السميك تماما إلى التجويف الشرياني.</li>
	<li>شد العقدة الثانية لتثبيت الشعيرات الأحادية داخل الشريان ومنع الضغط الذي يمارسه الدم من دفعه للخارج (الشكل 1 ب).</li>
	<li>قم بإزالة مقطع الأوعية الدموية من ICA.</li>
	<li>اقطع ECA أسفل العقدة الأولى وقم بتدوير الجذع لتوجيهه في اتجاه ICA (الشكل 1C).</li>
	<li>تقدم الشعيرات الأحادية عبر ICA حتى النقطة التي يتفرع فيها MCA. ملاحظة: ينعكس الانسداد في انخفاض مفاجئ في تدفق الدم في قراءات LDF. نحن نعتبر انسدادا ناجحا عندما يكون الانخفاض في CBF أكبر من 70٪ من القيمة القاعدية. إذا لم تكن أنظمة قياس CBF متوفرة ، يمكن ملاحظة نقطة الانسداد من خلال مقاومة التقدم ، والتي عادة ما تكون في الفئران البالغة حوالي 11 مم من تشعب CCA.<ol><li>إذا استمر التخدير خلال فترة الانسداد ، راقب الماوس واحتفظ به تحت المراقبة المستمرة لمدة 45 دقيقة.</li>
		<li>في حالة استيقاظ الماوس خلال فترة الانسداد ، قم بخياطة جلد الرقبة بعدة غرز. بدون فصل مسبار LDF ، ضع الماوس في الصندوق الذي يتم التحكم في درجة حرارته ، مما يسمح بالتعافي من التخدير. ملاحظة: من الشائع أن يظهر الفأر سلوكا دائريا عفويا خلال هذه الفترة ، مما يدل على الانسداد الناجح.</li>
		<li>بعد 40 دقيقة ، قم بتخدير الماوس مرة أخرى باتباع نفس إجراءات التخدير والتطهير كما هو موضح في النقاط 1.4 و 1.5 و 1.7. ضعه مرة أخرى على طاولة الجراحة ، وقم بإزالة الغرز من الرقبة.</li>
	</ol></li>
	<li>بعد 45 دقيقة من الانسداد، قم بفك العقدة التي تثبت الشعيرات الأحادية في مكانها. اسحب الفتيل ببطء ورفق وتحقق من حدوث إعادة استقناء الأنسجة.</li>
	<li>اسحب الفتيل وشد العقدة لمنع فقدان الدم.</li>
	<li>فك عقدة CCA. تأكد من عدم وجود تلف جدار الشرايين.</li>
	<li>قم بإزالة المبعدات وأعد وضع العضلات والغدد والجلد. خياطة الجلد (6-0) وتطبيق مطهر.</li>
	<li>افصل مسبار دوبلر وافصل الحامل. خياطة وتطهير جلد الرأس.</li>
	<li>خلال فترة الشفاء من التخدير ، اترك الماوس في قفص مزود بسخان للحفاظ على درجة الحرارة. احتفظ بها تحت الملاحظة المستمرة حتى يتم استردادها بالكامل من التخدير. بعد الشفاء ، يمكن إعادة الماوس إلى قفصه. ملاحظة: يوصى بشدة بالسكن مع الإثراء الاجتماعي. ومع ذلك ، لا تخلط أبدا الفئران التي تعمل مع الفئران غير المشغلة في نفس القفص دون أي فصل جسدي من أجل منع العدوان.</li>
</ol>4. رعاية ما بعد الجراحة
<ol><li>الإشراف الدوري على باتباع الإجراءات واللوائح الموضوعة وفقا للوائح المحلية. توفير العلاج المسكن في الجدول الزمني المناسب لتقليل الألم بعد الجراحة. ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم تطبيق نفس المسكن كما في بداية التدخل (البوبرينورفين 0.05 ملغم / كغم من وزن الجسم) في 6 ساعات و 24 ساعة بعد الجراحة.</li>
	<li>قم بإجراء القتل الرحيم عندما تشير معلمات الإشراف إلى ذلك ، باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا.</li>
	<li>مراقبة يومية لوزن. توفير الطعام اللين للحيوانات خلال الأيام القليلة الأولى بعد الجراحة. بالإضافة إلى ذلك ، قم بترطيبها عن طريق الحقن تحت الجلد من محلول ملحي (200 ميكرولتر) مباشرة بعد الجراحة وبشكل دوري بعد ذلك إذا لوحظ أن الفأر لا يرطب من تلقاء نفسه. رتب الطعام والماء بطريقة يسهل على الوصول إليها.</li>
	<li>بمجرد الانتهاء من الدراسة في الجسم الحي ، قم بتخدير الفئران ، والقتل الرحيم لها ، وإزالة أنسجة المخ لمزيد من التحليل النسيجي المرضي (إذا لزم الأمر).</li>
</ol>

نموذج لنقص التروية الدماغية العابرة عن طريق انسداد الشريان الدماغي الأوسط

<ol><li>Siddiqi, A. Z., Wadhwa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+acute+stroke%3A+current+practices+and+future+horizons%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Revascularization+Medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment of acute stroke: current practices and future horizons.</a> Cardiovascular Revascularization Medicine. 49, 56-65 (2023).</li>
<li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischemia+in+the+rat%3A+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 1, 53-60 (1981).</li>
<li>Koizumi, J., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Japanese Journal of Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, R., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia%3A+Models%2C+methods%2C+and+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia: Models, methods, and outcomes.</a> Neuropharmacology. 55, 257-270 (2008).</li>
<li>Seto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ischemic+stroke+in+awake+freely+moving+mice+reveals+that+isoflurane+anesthesia+can+mask+the+benefits+of+a+neuroprotection+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroenergetics%22%5BJournal%5D)">Induction of ischemic stroke in awake freely moving mice reveals that isoflurane anesthesia can mask the benefits of a neuroprotection therapy.</a> Frontiers in Neuroenergetics. 6, 1(2014).</li>
<li>Díaz-Marugan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poststroke+lung+infection+by+opportunistic+commensal+bacteria+is+not+mediated+by+their+expansion+in+the+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Poststroke lung infection by opportunistic commensal bacteria is not mediated by their expansion in the gut microbiota.</a> Stroke. 54 (7), 1875-1887 (2023).</li>
<li>Xie, L., Kang, H., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+transient+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+awake+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Sciences%22%5BJournal%5D)">A novel model of transient occlusion of the middle cerebral artery in awake mice.</a> Journal of Natural Sciences. 2 (2), e176(2016).</li>
<li>Arbaizar-Rovirosa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aged+lipid-laden+microglia+display+impaired+responses+to+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Aged lipid-laden microglia display impaired responses to stroke.</a> EMBO Molecular Medicine. 15 (2), e17175(2023).</li>
<li>Orsini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+mannose-binding+lectin+confers+long-lasting+protection+with+a+surprisingly+wide+therapeutic+window+in+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Targeting mannose-binding lectin confers long-lasting protection with a surprisingly wide therapeutic window in cerebral ischemia.</a> Circulation. 126 (12), 1484-1494 (2012).</li>
<li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31, 2707-2714 (2000).</li>
<li>Rogers, D. C., Campbell, C. A., Stretton, J. L., Mackay, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+motor+impairment+and+infarct+volume+after+permanent+and+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Correlation between motor impairment and infarct volume after permanent and transient middle cerebral artery occlusion in the rat.</a> Stroke. 28, 2060-2065 (1997).</li>
<li>Hedna, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+of+Laser+Doppler+flowmetry+in+predicting+outcome+in+murine+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+and+Interventional+Neurology%22%5BJournal%5D)">Validity of Laser Doppler flowmetry in predicting outcome in murine intraluminal middle cerebral artery occlusion stroke.</a> Journal of Vascular and Interventional Neurology. 8 (3), 74-82 (2015).</li>
<li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+speckle+contrast+imaging+for+blood+flow+monitoring+in+predicting+outcomes+after+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Laser speckle contrast imaging for blood flow monitoring in predicting outcomes after cerebral ischemia-reperfusion injury in mice.</a> BMC Neuroscience. 23, 80(2022).</li>
<li>Thakkar, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+relevance+of+elevated+blood+pressure+after+ischemic+stroke+in+the+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Therapeutic relevance of elevated blood pressure after ischemic stroke in the hypertensive rats.</a> Hypertension. 75 (3), 740-747 (2020).</li>
<li>Yu, X., Feng, Y., Liu, R., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermia+protects+mice+against+ischemic+stroke+by+modulating+macrophage+polarization+through+upregulation+of+interferon+regulatory+factor-4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">Hypothermia protects mice against ischemic stroke by modulating macrophage polarization through upregulation of interferon regulatory factor-4.</a> Journal of Inflammation Research. 14, 1271-1281 (2021).</li>
<li>Denorme, F., Portier, I., Kosaka, Y., Campbell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+exacerbates+ischemic+stroke+outcome+independent+of+platelet+glucose+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia exacerbates ischemic stroke outcome independent of platelet glucose uptake.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 19, 536-546 (2021).</li>
</ol>

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

إجراء tMCAo داخل اللمعة هو النموذج الأكثر استخداما لنقص تروية الدماغ البؤري مع إعادة التروية في الأبحاث الأساسية. حاليا ، الفئران هي النموذج الحيواني المفضل بسبب توافر السلالات المعدلة وراثيا. ومع ذلك ، من الضروري الاعتراف بأن الفئران المعدلة وراثيا وخلفياتها الجينية يمكن أن تؤثر على الأوعية الدموية في الدماغ. يمكن أن يؤثر وجود الدورة الدموية الجانبية والمفاغرة بين المناطق الشريانية المختلفة بشكل كبير على نتائج الإجراءات التجريبية11.
عند إجراء هذا الإجراء ، يجب مراعاة ب...

السكتة الدماغية هي مرض مدمر يصيب ما يقرب من 15 مليون شخص في جميع أنحاء العالم سنويا ، وفقا لمنظمة الصحة العالمية. حوالي ثلث المرضى يستسلمون لهذه الحالة ، بينما يعاني ثلث آخر من إعاقة دائمة. السكتة الدماغية هي أمراض معقدة تشمل أنواعا مختلفة من الخلايا ، مثل الخلايا المناعية العصبية والمحيطية ، والأوعية الدموية ، والاستجابات الجهازية1. لا يمكن حاليا تكرار الشبكة المعقدة من التفاعلات الناتجة عن السكتة الدماغية على مستوى الأنظمة باستخدام النماذج في المختبر . وبالتالي ، فإن النماذج الحيوانية التجريبية ضرورية للتعمق في آليات المرض وتطوير واختبار علاجات جديدة. حاليا ، إعادة تروية الأنسجة المبكرة هي التدخل الوحيد المعتمد ، إما من خلال انحلال الخثرة باستخدام منشط البلازمينوجين من نوع الأنسجة (tPA) أو استئصال الخثرة داخل الأوعية الدموية1.
انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCA) متكرر في مرضى السكتة الدماغية. وبالتالي ، تم تطوير نماذج القوارض من انسداد MCA العابر (tMCAo) في البداية في الفئران2،3،4. في الوقت الحاضر ، الفئران المعدلة وراثيا هي الأكثر استخداما في نماذج السكتة الدماغية التجريبية. في هذه الدراسة ، وصفنا نموذجا طفيف التوغل ل tMCAo داخل اللمعة في الفئران. يتم تنفيذ النهج عن طريق الشريان السباتي على مستوى الرقبة ، دون استئصال الجمجمة.
مدة فترة الانسداد هي عامل حاسم يحدد مدى الآفة الإقفارية. حتى الانسداد القصير لمدة 10 دقائق يمكن أن يسبب موتا عصبيا انتقائيا دون احتشاء واضح ، في حين أن الانسداد الطويل ، الذي يستمر عادة من 30 إلى 60 دقيقة ، يؤدي إلى درجة معينة من الاحتشاء الدماغي. على عكس الفروع القريبة والبعيدة من MCA التي تغذي القشرة ولها ضمانات ، فإن الشرايين العدسية المخططة التي توفر الدم للمخطط تفتقر إلى الضمانات5. نتيجة لذلك ، هناك انخفاض أكبر في تدفق الدم في المخطط منه في القشرة بعد tMCAo. وبالتالي ، فإن انسداد 30 دقيقة أو أقل يؤثر بشكل عام على المخطط ولكن ليس القشرة ، في حين أن الانسدادات الأطول ، من 45 دقيقة فصاعدا ، غالبا ما تولد آفة إقفارية في منطقة MCA بأكملها ، بما في ذلك المخطط والقشرة الظهرية الجانبية.
لضمان رفاهية الفئران ، نقوم بإدارة المسكنات قبل الإجراء واستخدام التخدير أثناء الجراحة. ومع ذلك ، يمكن للتخدير إدخال تغييرات اصطناعية في فسيولوجيا الفأر ويؤثر على بعض مقاييس النتائج6. عادة ما يستمر التدخل الجراحي ، عندما يتم إجراؤه من قبل موظفين ذوي خبرة ، حوالي 15 دقيقة لتحفيز MCAo. بعد ذلك ، يعتمد إجمالي الوقت تحت التخدير على فترة الانسداد. بالنسبة للتجارب التي يكون فيها تقليل التخدير أمرا بالغ الأهمية ، تتضمن الخطوة البديلة في الإجراء إيقاف التخدير خلال فترة الانسداد وقصره فقط على الخطوات الجراحية لإدخال وسحب الفتيل الذي يسد MCA. يقلل هذا النهج من مدة التخدير ويقلل من آثاره الأثرية المحتملة على النموذج التجريبي 7,8. لذلك ، يتم تقديم طريقة إحداث نقص التروية البؤري العابر عن طريق انسداد MCA داخل اللمعة مع نوعين مختلفين: مع تخدير الماوس خلال فترة الانسداد بأكملها أو مع استيقاظ الماوس خلال هذه الفترة. في كلتا الحالتين ، يجب إجراء جراحة وهمية بالتوازي مع التدخل الذي يتم إجراؤه على الفئران الإقفارية. بالإضافة إلى ذلك ، يتم توفير البيانات المتعلقة بتقييم النتائج كما تم قياسها بواسطة الاختبارات السلوكية والتصوير بالرنين المغناطيسي في نقاط زمنية مختلفة بعد إعادة التروية. أخيرا ، تتم مناقشة العوامل الرئيسية التي يجب مراعاتها عند تنفيذ الإجراء التجريبي.

<table><tbody><tr><td>6/0 خياطة&nbsp;</td><td>أربطة أراغو</td><td></td><td>الوعائية</td></tr><tr><td>6/0 خياطة بإبرة منحنية</td><td>خيوط أراغو</td><td></td><td>للجلد</td></tr><tr><td>9 مجم / مل محلول ملحي</td><td>فريسينيوس كابي</td><td>CN616003 EC</td><td>للترطيب</td></tr><tr><td>نظام التخدير</td><td>ضاعفات SurgiVet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blunt ، بعرض 1 مم</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>18200-09</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Buprex</td><td></td><td>ل مشبك تخفيف الآلام</td></tr><tr><td>تطبيق ملقط</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>S & T CAF4</td><td></td></tr><tr><td>Dumont ملقط صغير</td><td>أدوات العلوم</td><td>الدقيقة M3S 11200-10</td><td></td></tr><tr><td>ملقط</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>91106-12</td><td></td></tr><tr><td>Glue</td><td>Loctite</td><td></td><td>لإلصاق مسبار LDF بالجمجمة</td></tr><tr><td>مقياس قوة</td><td>قبضة IITC Life Science Inc.</td><td># 2200</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>B-Braun</td><td>CN571105.8</td><td></td></tr><tr><td>LDF Perimed</td><td></td><td>Perimed Periflux System 5000</td><td></td></tr><tr><td>LDF Probe Holders</td><td>Perimed</td><td>PH 07-4</td><td></td></tr><tr><td>شريط طبي</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>مغناطيس التصوير بالرنين المغناطيسي</td><td>Bruker BioSpin ، Ettlingen ، ألمانيا</td><td></td><td>BioSpec 70/30 ماسح ضوئي أفقي للحيوانات &nbsp ؛</td></tr><tr><td>حامل إبرة مع خياطة القاطع</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>12002-14</td><td></td></tr><tr><td>خيوط النايلون</td><td>Doccol</td><td>701912PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>قفص الاسترداد مع وسادة</td><td></td><td></td><td></td>التدفئة</tr><tr><td>مقص Sirgical</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>91401-12</td><td></td></tr><tr><td>طقم كي الأوعية الصغيرة</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>18000-00</td><td></td></tr><tr><td>مجهر مجسم و الضوء البارد</td><td>Leica</td><td>M60</td><td></td></tr><tr><td>ملقط ربط خياطة</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>18025-10</td><td></td></tr><tr><td>ترموستات ومسبار المستقيم ولوحة الماوس</td><td>Letica Science Instruments</td><td>LE 13206</td><td></td></tr><tr><td>مقص زنبركي Vannas (حافة القطع 4 مم)</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>15019-10</td><td></td></tr><tr><td>مشابك الأوعية الدموية</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>00396-01</td><td></td></tr></tbody></table>

نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر للسكتة الدماغية

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Stroke

تقف السكتة الدماغية كسبب رئيسي للوفاة أو الإعاقة المزمنة على مستوى العالم. ومع ذلك ، تقتصر العلاجات المثلى الحالية على علاجات إعادة التروية خلال المرحلة الحادة من السكتة الدماغية. لاكتساب نظرة ثاقبة في علم الأمراض الفسيولوجي للسكتة الدماغية وتطوير مناهج علاجية مبتكرة ، تلعب نماذج القوارض في الجسم الحي للسكتة الدماغية دورا أساسيا. وقد دفع توافر المعدلة وراثيا بشكل خاص استخدام الفئران كنماذج تجريبية للسكتة الدماغية.
في مرضى السكتة الدماغية ، يعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCA) أمرا شائعا. وبالتالي ، فإن النموذج التجريبي الأكثر انتشارا يتضمن انسداد MCA داخل اللمعة ، وهي تقنية طفيفة التوغل لا تتطلب استئصال الجمجمة. يتضمن هذا الإجراء إدخال خيوط أحادية من خلال الشريان السباتي الخارجي (ECA) ودفعها عبر الشريان السباتي الداخلي (ICA) حتى تصل إلى نقطة التفرع من MCA. بعد انسداد الشرايين لمدة 45 دقيقة ، تتم إزالة الشعيرات الأحادية للسماح بإعادة التروية. طوال العملية ، يتم مراقبة تدفق الدم الدماغي لتأكيد الانخفاض أثناء الانسداد والتعافي اللاحق عند إعادة التروية. يتم تقييم النتائج العصبية والأنسجة باستخدام الاختبارات السلوكية ودراسات التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI).

هناك طرق مختلفة لتقييم نتائج إجراء tMCAo. يتم استخدام طرق التصوير العصبي في الجسم الحي (MRI) والاختبارات السلوكية هنا.
تصاب الفئران بآفات إقفارية في الدماغ ، تؤثر بشكل رئيسي على المنطقة التي يوفرها MCA المماثل للانسداد ، مثل المخطط والقشرة الظهرية الجانبية. توجد عدة طرق لتحديد مدى الآفة ، بما في ذلك تلطيخ الأنسجة 2،3،5-ثلاثي فينيل تترازوليوم كلوريد (TTC) ، والتلوين النسيجي (الهيماتوكسيلين / يوزين ، أسيتات الثيونين) ، وطرق التصوير العصبي في الجسم الحي مثل التصوير بالرنين المغن...

يصف هذا البروتوكول نموذج نقص التروية الدماغية البؤري العابر في الفئران من خلال انسداد الشريان الدماغي الأوسط داخل اللمعة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم عرض أمثلة لتقييم النتائج باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي والاختبارات السلوكية.

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies ...

يستخدم نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط على نطاق واسع لمحاكاة السكتة الدماغية الإقفارية في الفئران. يسمح هذا النموذج بالتحقيق في التطور الزمني للتلف الإقفاري ، وتقييم فعالية عوامل الحماية العصبية ، واستكشاف دور جينات ومسارات محددة في أمراض السكتة الدماغية بهدف نهائي هو إيجاد علاجات محتملة جديدة. يسمح تنفيذ تقنيات التصوير العصبي مثل التصوير بالرنين المغناطيسي بإجراء تشخيص أفضل وتحسين تقييم النتائج وتقليل عدد اللازمة في كل دراسة.يقدم هذا البروتوكول شرحا واضحا ومفصلا للتقنية الأكثر استخداما لإحداث انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر. علاوة على ذلك ، فإنه ينفذ هذه التقنية من خلال إدخال التعديل الدقيق لانسحاب التخدير أثناء وقت الانسداد ، مما يقلل من التأثير الضار لوقت التخدير الطويل.

transient-middle-cerebral-artery-occlusion-model-of-stroke

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

الخيطية انسداد الشريان الدماغي الأوسط هو نموذج مشترك لدراسة السكتة الدماغية لدى الفئران.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران -- الشرق انسداد الشريان الدماغي مع نموذج الشعيرة

علينا أن نظهر في شريط الفيديو وسيلة لإنتاج وسط انسداد الشريان الدماغي في فئران بالغة باستخدام حيدة داخل اللمعة. علينا أن نبين كيفية تقييم مدى احتشاء الدماغ بواسطة 2،3،5 - triphenyltetrazolium تلطيخ (TTC) كلوريد.

نموذج الفأر من انسداد الشريان الدماغي الأوسط

يصف هذا الفيديو إجراء تطوير السكتة الدماغية العابرة في نموذج الفئران باستخدام انسداد الشريان الدماغي الأوسط القائم على الخيوط المطلية بالسيليكون ويحاكي النموذج المطور السكتة الدماغية البشرية ، مما يساعد على التحقيق في الاستراتيجيات العلاجية الجديدة لعلاج السكتة الدماغية.

نموذج السكتة الدماغية العابرة القائم على إدخال الفتيرة: إجراء جراحي لإجراء انسداد الشريان الدماغي الأوسط في دماغ الفئران

نحن تصف طريقة استنساخه للغاية لانسداد دائم من القوارض كبير الأوعية الدموية الدماغية. ويمكن تحقيق هذه التقنية مع الضرر القليل جدا الطرفية، والحد الأدنى من فقدان الدم، وارتفاع معدل البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل، وحجم احتشاء متناسقة تتناسب مع السكان السريرية البشرية.

الدائم انسداد الأوعية الدماغية<em&gt; عبر</em&gt; ضمد مزدوجة وعانى من قطع

وتستخدم على نطاق واسع نماذج مختلفة من الفئران وسط انسداد الشريان الدماغي (MCAO) في أبحاث الدماغ التجريبية. هنا، علينا أن نظهر نموذج عبر الجمجمة دائمة القاصي MCAO التي تنتج احتشاء القشرية ثابت من حجم الموافق الضرر الذي تفرضه غالبية السكتات الدماغية الإقفارية الإنسان.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران: التخثر الدائم من الشريان الدماغي الأوسط القاصي

من أجل فهم الفيزيولوجيا المرضية من السكتة الدماغية، فمن المهم استخدام نماذج يمكن الاعتماد عليها. هذه الورقة سوف تصف واحد من النماذج السكتة الدماغية الأكثر استخداما في الفئران، ويطلق عليه نموذج المتوسطة الدماغي انسداد الشريان (MCAo) (كما وصف خيوط داخل اللمعة أو نموذج خياطة) مع ضخه.

نهج الجراحي لانسداد الشريان الدماغي الأوسط وضخه المستحثة السكتة الدماغية في الفئران

السكتة الدماغية حديثي الولادة هي سبب مهم لإصابات الدماغ المبكرة التي تتطلب نموذجا انتقاليا مع أنماط إصابات بؤرية متسقة وقابلية عالية للتكاثر من أجل تمكين الدراسة. تصف هذه الدراسة الإجراء الجراحي التفصيلي لإحداث إصابة نقص تروية بؤرية أحادية الجانب غير نزفية في القوارض المكافئة لكامل المدة.

عابر الدماغي الأوسط الشريان انسداد نموذج من السكتة الدماغية حديثي الولادة في الفئران P10

تستخدم نماذج مختلفة من انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAo) في أبحاث السكتة الدماغية التجريبية. هنا ، يتم وصف نموذج السكتة الدماغية التجريبية من MCAo عابرة عبر الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، والذي يهدف إلى تقليد السكتة الدماغية البشرية ، والتي تتم إزالة خثرة الأوعية الدماغية بسبب تحلل الجلطة العفوية أو العلاج.

النمذجة السكتة الدماغية في الفئران: انسداد الشريان الدماغي الأوسط عابرة عن طريق الشريان السباتي الخارجي

يوضح هذا البروتوكول نموذجا فريدا لضربة الماوس مع احتشاء متوسط الحجم ومعدل بقاء ممتاز. يسمح هذا النموذج لباحثي السكتة الدماغية قبل السريرية بتمديد مدة نقص التروية ، واستخدام الفئران المسنة ، وتقييم النتائج الوظيفية طويلة الأجل.

نموذج معدل لانسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الجمجمة لدراسة نتائج السكتة الدماغية في الفئران المسنة

يصف البروتوكول الحالي نموذج الفئران لانسداد / إعادة تروية الشريان الدماغي الأوسط الذي يحافظ على البنية التشريحية للأوعية الدماغية دون التسبب في ضرر.

نموذج فئران لانسداد / إعادة تروية الشريان الدماغي الأوسط دون الإضرار بالتركيب التشريحي للأوعية الدماغية

يصف هذا البروتوكول عملية التحضير لإعادة تروية انسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الشريان السباتي المشترك.

إعداد نموذج معدل لإعادة تروية انسداد الشريان الدماغي الأوسط

تعلم تقنية انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر في الفئران لتقييم إصابات السكتة الدماغية. يستخدم هذا البروتوكول التصوير بالرنين المغناطيسي والاختبارات السلوكية لتقييم فعالية العوامل العصبية الواقية.

نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر للسكتة الدماغية

استكشف المزيد من الفيديوهات