October 6th, 2023
لقد طورنا تقنية معالجة الأنسجة باستخدام أنسجة الرئة الاهتزازية والأغاروز المدمجة لتوليد أقسام الرئة ، مما يسمح بالحصول على صور عالية الدقة لبنية الرئة. استخدمنا تلطيخ التألق المناعي لمراقبة تعبير البروتين المكاني باستخدام علامات هيكلية محددة للرئة.
هذا البروتوكول مفيد بشكل خاص في النماذج الحيوانية الكبيرة لزراعة الرئة وتجديدها ، مثل الخنازير ، حيث يمكننا أخذ عينات من القطع الصغيرة بمرور الوقت. يمكن أن تساعدنا هذه التقنية في فهم البيولوجيا المكانية بشكل أفضل في هذه النماذج. تنتج هذه التقنية شرائح رئة معالجة بالحد الأدنى مناسبة للتصوير المناعي دون الحاجة إلى استرجاع المستضد ، وكانت فعالة مع جميع الأجسام المضادة التي تم اختبارها حتى الآن.
يمكن تكييف هذا الإجراء لقطع أقسام أكثر سمكا قليلا ، على سبيل المثال حوالي ملليمتر واحد ، والتي يمكن استخدامها بعد ذلك في الفحص المجهري الفلوري للصفائح الضوئية لدراسة تعبير البروتين المكاني في حجم ثلاثي الأبعاد أكثر. يبحث بحثنا في العوامل التي تؤثر على رفض زراعة الرئة ، ويطور علاجات لتقليل الرفض باستخدام نموذج الخنازير الخاص بنا. تساعد هذه التقنية على فهم تغيرات البروتين المكانية التي تؤثر على نتائج الزرع بعد الجراحة.
نستخدم هذه التقنية حاليا لاستكشاف مشهد التعبير المكاني للبروتين في نموذج زراعة رئة الخنازير. نأمل أن يساعدنا ذلك على فهم الآليات الكامنة وراء علاجاتنا التجريبية بشكل أفضل. يكمن مفتاح النجاح هنا في مشاهد الاهتزاز ، وسعات الشفرة العالية ، وسرعات القوة المنخفضة هي الأشياء الأساسية التي يجب النظر إليها إذا سارت الأمور بشكل سيء.
تقدم هذه الدراسة تقنية مبتكرة لمعالجة الأنسجة باستخدام جهاز القطع بالذبذبات وأنسجة الرئة المدمجة في الأغاروز لتكوين شرائح رئوية عالية الدقة. تسمح هذه الطريقة بصبغة المناعة الضوئية لملاحظة التعبير المكاني للبروتين في بنية الرئة.
Automated vibratome sectioning of agarose-embedded lung tissue enables reproducible, minimally processed lung slices for multiplex fluorescence imaging across species. This workflow addresses the challenge of preserving native lung architecture and antigenicity, supporting high-content spatial protein analysis critical for translational lung research. The approach enhances predictive confidence in preclinical lung models and informs mechanistic studies of injury, regeneration, and transplant outcomes.
This method integrates from early discovery through preclinical validation, supporting workflows in lung injury, regeneration, and transplantation research.