تصور البروتينات منخفضة الوفرة والتعديلات اللاحقة للترجمة في أجنة ذبابة الفاكهة الحية عن طريق حقن الأجسام المضادة الفلورية

يصف هذا البروتوكول وضع العلامات الفلورية المخصصة القائمة على الأجسام المضادة وحقنها في أجنة ذبابة الفاكهة المبكرة لتمكين التصوير المباشر للبروتينات منخفضة الوفرة أو التعديلات اللاحقة للترجمة التي يصعب اكتشافها باستخدام أساليب GFP / mCherry-tag التقليدية.

نحن نهدف إلى فهم كيفية ارتباط الإشارات الميكانيكية والكيميائية الحيوية بين التشكل الحيواني ، بما في ذلك الكشف عن القوى والاستجابة لها من قبل الخلايا والجزيئات. تم اكتشاف المزيد من الجزيئات لتكون حساسة ميكانيكيا ، وتعمل بشكل مختلف تحت مستويات متفاوتة من التوتر. ومع ذلك ، فإن السياق الفسيولوجي ووظيفة هذه الأحداث الحساسة للقوة لا تزال غير معروفة إلى حد كبير.

نظرا للطبيعة الديناميكية للأحداث الحساسة للقوة ، يعتمد مجالنا إلى حد كبير على التصوير الفلوري عالي السرعة وتسجيل الفاصل الزمني لالتقاط السلوكيات الجزيئية والخلوية. العديد من البروتينات الموسومة بالفلورسنت ليست ساطعة بما يكفي لتصويرها ، وتتطلب دقة مكانية وزمانية بدون مبيض كبير. من ناحية أخرى ، يمكن لطرق التألق المناعي التقليدية التقاط لقطة من التركيب الجزيئي والخلوي فقط بعد التثبيت.

تمهد هذه الطريقة الطريق لتتبع توطين العديد من مستقبلات البروتين منخفضة الوفرة لمسارات الإشارات الرئيسية ديناميكيا ، مثل Notch و Wnt ومسارات BMP. في النهاية ، بالإضافة إلى شلالات الإشارات الخطية التقليدية ، يمكننا تحديد ومكان حدوث أحداث الإشارات على المقاييس دون الخلوية.