Name: مورين اليسار الرئوي هيلار المشبك نموذج من إصابة نقص تروية الرئة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: تعلم تقنية مشبك اليسار الرئوي الهيلاري لدراسة إصابة نقص التروية-إعادة التروية في رئة الفئران. يُساعد هذا النموذج على فهم آليات الخلايا المناعية وتطوير استراتيجيات علاجية محسّنة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

لم يتلق هذا العمل أي منحة محددة من أي وكالة تمويل في القطاعات العامة أو التجارية أو غير الربحية.

نموذج الفأر لدراسة إصابة نقص تروية الرئة

<ol><li>Bharat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+link+between+primary+graft+dysfunction+and+chronic+lung+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Immunological link between primary graft dysfunction and chronic lung allograft rejection.</a> Ann Thorac Surg. 86 (1), 189-195 (2008).</li>
<li>Daud, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+immediate+primary+lung+allograft+dysfunction+on+bronchiolitis+obliterans+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of immediate primary lung allograft dysfunction on bronchiolitis obliterans syndrome.</a> Am J Respir Crit Care Med. 175 (5), 507-513 (2007).</li>
<li>Halazun, K. J., Al-Mukhtar, A., Aldouri, A., Willis, S., Ahmad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+ischemia+in+transplantation%3A+search+for+a+consensus+definition%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Warm ischemia in transplantation: search for a consensus definition.</a> Transplant Proc. 39 (5), 1329-1331 (2007).</li>
<li>Warnecke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+or+cold+ischemia+in+animal+models+of+lung+ischemia-reperfusion+injury%3A+is+there+a+difference+%5BTitle%5D)+AND+%22Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Warm or cold ischemia in animal models of lung ischemia-reperfusion injury: is there a difference .</a> Thorac Cardiovasc Surg. 52 (3), 174-179 (2004).</li>
<li>Hasenauer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cold+or+warm+ischemia+and+ex-vivo+lung+perfusion+on+the+release+of+damage+associated+molecular+patterns+and+inflammatory+cytokines+in+experimental+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effects of cold or warm ischemia and ex-vivo lung perfusion on the release of damage associated molecular patterns and inflammatory cytokines in experimental lung transplantation.</a> J Heart Lung Transplant. 40 (9), 905-916 (2021).</li>
<li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+warm+versus+cold+ischemic+donor+lung+preservation+on+the+underlying+mechanisms+of+injuries+during+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of warm versus cold ischemic donor lung preservation on the underlying mechanisms of injuries during ischemia and reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li>
<li>Santos, P., Teixeira, P. J. Z., Moraes Neto, D. M., Cypel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donation+after+circulatory+death+and+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bras+Pneumol%22%5BJournal%5D)">Donation after circulatory death and lung transplantation.</a> J Bras Pneumol. 48 (2), e20210369(2022).</li>
<li>Moskowitzova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transplantation+enhances+murine+lung+viability+and+recovery+after+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transplantation enhances murine lung viability and recovery after ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 318 (1), L78-L88 (2020).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+blockage+of+S100A8%2FA9+ameliorates+ischemia-reperfusion+injury+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Functional blockage of S100A8/A9 ameliorates ischemia-reperfusion injury in the lung.</a> Bioengineering (Basel). 9 (11), 673(2022).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+anti-HMGB1+monoclonal+antibody+on+lung+ischemia+reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Protective effects of anti-HMGB1 monoclonal antibody on lung ischemia reperfusion injury in mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 573, 164-170 (2021).</li>
<li>Wang, Q., Li, Y., Wu, C., Wang, T., Wu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-1+inhibition+exacerbates+ischemia-reperfusion-induced+lung+injury+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-1 inhibition exacerbates ischemia-reperfusion-induced lung injury in mouse.</a> Am J Med Sci. 365 (1), 84-92 (2023).</li>
<li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury%3A+tricks+of+the+trade%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> J Surg Res. 194 (2), 659-666 (2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogen-activated+protein+kinases+regulate+HO-1+gene+transcription+after+ischemia-reperfusion+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitogen-activated protein kinases regulate HO-1 gene transcription after ischemia-reperfusion lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 283 (4), L815-L829 (2002).</li>
<li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+A2A+receptor+activation+on+CD4%2B+T+lymphocytes+and+neutrophils+attenuates+lung+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Adenosine A2A receptor activation on CD4+ T lymphocytes and neutrophils attenuates lung ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 139 (2), 474-482 (2010).</li>
<li>Yang, Z., Sharma, A. K., Linden, J., Kron, I. L., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+lymphocytes+mediate+acute+pulmonary+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">CD4+ T lymphocytes mediate acute pulmonary ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 137 (3), discussion 702 695-702 (2009).</li>
<li>Sayah, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+are+pathogenic+in+primary+graft+dysfunction+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps are pathogenic in primary graft dysfunction after lung transplantation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (4), 455-463 (2015).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 6 (7), 1672-1679 (2007).</li>
<li>Hsiao, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> J Clin Invest. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li>
<li>Sharma, A. K., Mulloy, D. P., Le, L. T., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidase+mediates+synergistic+effects+of+IL-17+and+TNF-alpha+on+CXCL1+expression+by+epithelial+cells+after+lung+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidase mediates synergistic effects of IL-17 and TNF-alpha on CXCL1 expression by epithelial cells after lung ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (1), L69-L79 (2014).</li>
<li>Zanotti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+critical+role+of+Toll-like+receptor+4+in+lung+ischemia-reperfusion+injury+and+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Novel critical role of Toll-like receptor 4 in lung ischemia-reperfusion injury and edema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (297), L52-L63 (2009).</li>
<li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals%22">Guide for the care and use of laboratory animals</a>. , The National Academies Press. Washington, DC. (2011).</li>
<li>Saito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pirfenidone+alleviates+lung+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Pirfenidone alleviates lung ischemia-reperfusion injury in a rat model.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 158 (1), 289-296 (2019).</li>
<li>Tanaka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Imatinib+on+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rat+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Imatinib on ischemia/reperfusion injury in rat lung.</a> Ann Thorac Surg. 102 (5), 1717-1724 (2016).</li>
<li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li>
<li>Koletsis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+cooling+in+a+lung+hilar+clamping+model+of+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">In situ cooling in a lung hilar clamping model of ischemia-reperfusion injury.</a> Exp Biol Med (Maywood). 231 (8), 1410-1420 (2006).</li>
<li>Hermsen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+landscape+of+rat+strain+and+substrain+variation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Genomic landscape of rat strain and substrain variation.</a> BMC Genomics. 16 (1), 357(2015).</li>
<li>Beck, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genealogies+of+mouse+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Genealogies of mouse inbred strains.</a> Nat Genet. 24 (1), 23-25 (2000).</li>
<li>Liao, W. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orotracheal+intubation+and+ventilated+lung+ischemia+reperfusion+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orotracheal intubation and ventilated lung ischemia reperfusion surgery.</a> J Vis Exp. (187), 64383(2022).</li>
<li>Murata, T., Nakazawa, H., Mori, I., Ohta, Y., Yamabayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+after+a+two-hour+period+of+pulmonary+artery+occlusion+causes+pulmonary+necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Reperfusion after a two-hour period of pulmonary artery occlusion causes pulmonary necrosis.</a> Am Rev Respir Dis. 146 (4), 1048-1053 (1992).</li>
<li>Ukita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+animal+model+for+pulmonary+hypertension+and+right+ventricular+failure%3A+Left+pulmonary+artery+ligation+and+progressive+main+pulmonary+artery+banding+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A large animal model for pulmonary hypertension and right ventricular failure: Left pulmonary artery ligation and progressive main pulmonary artery banding in sheep.</a> J Vis Exp. (173), 62694(2021).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+right+ventricular+failure+by+pulmonary+artery+constriction+and+evaluation+of+right+ventricular+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of right ventricular failure by pulmonary artery constriction and evaluation of right ventricular function in mice.</a> J Vis Exp. (147), 59431(2019).</li>
<li>Welbourn, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+ischaemia+reperfusion+injury%3A+central+role+of+the+neutrophil%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of ischaemia reperfusion injury: central role of the neutrophil.</a> Br J Surg. 78 (6), 651-655 (1991).</li>
</ol>

لم يبلغ المؤلفون عن أي إفصاحات ذات صلة.

وصفنا تقنية المشبك النقيري التي تنطوي على تطبيق عقدة منزلقة على الهيلوم الأيسر الذي يسد الشريان الرئوي والأوردة والشعب الهوائية للحث على نقص التروية الدافئ متبوعا بإعادة التروية. بعد لقط النقيض ، يمكن حصاد الرئة اليسرى لمجموعة متنوعة من التقنيات التجريبية مثل علم الأنسجة ، وقياس التدفق الخلوي ، وتسلسل الخلية السائبة أو الخلية المفردة ، وتفاعل البلمرة الكمي المتسلسل. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام الدم والطحال لدراسة الآثار الجهازية ، في حين أن الرئة اليمنى غير الإقفارية قد تكون بمثابة تحكم داخلي. في هذا البروتوكول ، نصف أيضا طرقا مفصلة للحصول على قياسات ABG و / أو تحديد تسرب الخلايا.
تعد تقنية تثبيت فرسان الفئران أمرا بالغ الأهمية لدراسة IRI للرئة والمجال الأوسع لزراعة الرئة. على سبيل المثال ، باستخدام نموذج المشبك النقيضي هذا ، وجدت مجموعتنا أن الخلايا الوحيدة الكلاسيكية المشتقة من الطحال CCR2 + تتوسط تسرب العدلات إلى الرئة بعد IRI18. أظهرت مجموعة أخرى أن الخلايا الظهارية السنخية من النوع الثاني تنتج CXCL1 (جاذب كيميائي للعدلات) بطريقة تعتمد على NADPH oxidase-IL-17-TNFα باستخدام نموذج مشبك النقيض19. تم العثور على TLR4 للعب دور في تطوير وذمة في نموذج الفئران من لقط الهيلار20.
في حين أن زرع رئة الفئران التقويمي أكثر قابلية للتطبيق سريريا ويمكن أن يحاكي نقص التروية الدافئ والبارد ، فإنه يقدم أيضا صدمة جراحية من مفاغرة الأوعية الدموية والشعب الهوائية والمحفزات الخيفية من عدم تطابق المتبرع والمتلقي. وبالتالي ، فإن الميزة الرئيسية لتقنية المشبك النقيري هي قدرتها على عزل تأثيرات IRI الرئوية عن هذه العوامل الأخرى. بالإضافة إلى ذلك ، بالنسبة للجراح المجهري للفأر عديم الخبرة ، فإن إجراء المشبك النقيري أقل تطلبا من الناحية الفنية ويمكن إتقانه بسرعة أكبر مقارنة بزراعة الرئة. أحد قيود نموذج المشبك النقيضي هو أنه من الصعب تحقيق نقص التروية الباردة. تم إجراء نقص التروية الباردة في الموقع في الخنازير مع نضح تدفق من الدرجة الأولى عبر الشريان الرئويالأيسر 25 ، ولكن هذا يمثل تحديا أكبر بكثير في الفأر نظرا لصغر حجمه والحاجة إلى الحفاظ على الحرارة الطبيعية أثناء الجراحة. ومع ذلك ، فإن دراسة نقص التروية الدافئة المعزولة مهمة لأنها بشكل عام أكثر ضررا لوظيفة الأعضاء من نقص التروية الباردة4،5،6. علاوة على ذلك ، تتبنى مراكز زراعة الأعضاء بشكل متزايد عمليات زرع الرئة DCD ، والتي تصاحبها أوقات إقفارية دافئة أطول بكثير من عمليات زرع الرئة DBD التقليدية7. وبالتالي ، فإن الدراسة التفصيلية للأحداث أثناء نقص التروية الدافئة وفترة التروية اللاحقة أمر بالغ الأهمية ويمكن تحقيقه باستخدام نموذج المشبك النقيضي هذا.
تم إنشاء العديد من الاختلافات في تقنية المشبك النقيري على مدار العقدين الماضيين. وتشمل هذه استخدام مشبك الأوعية الدموية الدقيقةالرضحية 8،9،10،11،12،13 ، عاصبة روميل14،15 ، وربطة عنق مع عقدة منزلقة حول هيلوم16. وصفنا تكيفنا مع تقنية العقدة الانزلاقية في الفئران. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على تقنيات المشبك النقيري الأخرى هي أنها تسمح بإغلاق الصدر خلال فترة نقص التروية ، مما يقلل من فقدان السوائل غير المعقول خاصة في البروتوكولات ذات فترات أطول من نقص التروية. لا يمكن تحقيق ذلك عند وضع مشبك أو عاصبة على الهيلوم.
فيما يتعلق باختيار ، اخترنا تطوير هذا النموذج في الفئران بدلا من الفئران أو النماذج الحيوانية الكبيرة ، مثل الخنازير. المنطق ذو شقين - مختبرنا لديه خبرة واسعة في الجراحة المجهرية للفئران مع زرع رئة الفأر التقويمي17. ثانيا ، في حين أن الفئران أصغر حجما وأكثر تحديا من الناحية الفنية للعمل عليها من الفئران ، إلا أن هناك حاليا سلالات فئران معدلة وراثيا متاحة تجاريا أكثر من سلالات الفئران26،27. تتكاثر الفئران أيضا بسرعة أكبر ، مما يسمح بتطوير سلالات جديدة بشكل أسرع ، وهو أمر مفيد بشكل خاص عند التحقيق في آليات المناعة في IRI. لهذه الأسباب ، اخترنا تطوير هذه التقنية في الفئران.
على حد علمنا ، هذه هي أول مقالة تعتمد على الفيديو باستخدام تقنية مشبك الرئة اليسرى في الماوس مع عقدة منزلقة. نشر سايتو وآخرون مقالا قائما على الفيديو يوضح المشبك النقيضي في الفئران باستخدام مشبك الأوعية الدموية الدقيقة22. في الفأر ، نشر Liao et al نموذج IRI للرئة مع لقط الشريان الرئوي (PA) مع عقدة منزلقة ، ومع ذلك تظل الرئة مهواة في هذا النموذج حيث يتم استبعاد القصبات الهوائية من المشبك28. تم استخدام تقنية تثبيت PA كنموذج لدراسة الانسداد الرئوي29 وارتفاع ضغط الدم الرئوي و / أو فشل البطين الأيمن30,31. نظرا لأن مجال الدراسة هو IRI الرئوي في عملية الزرع ، فقد اخترنا تثبيت الهيلوم بالكامل بما في ذلك القصبات الهوائية لتقليل الرضح الضغطي فوق الإصابة الإقفارية.
تجدر الإشارة إلى أنه تم اختيار 30 دقيقة من نقص التروية الدافئ متبوعة ب 1 ساعة من إعادة التروية لأننا مهتمون بديناميكيات الخلايا المتسللة للرئة في الفترة المبكرة جدا بعد IRI. على سبيل المثال ، أبلغت الدراسات عن تنظيم الجينات الواقية للخلايا ، مثل الهيم أوكسيجيناز 1 ، بعد 30 دقيقة فقط من نقص التروية تليها 2 ساعة من التروية13. كان يعتقد سابقا أن العدلات هي نوع الخلية المركزية التي تتسلل إلى الرئة بعد IRI32 ، لكننا أظهرنا أن الخلايا الوحيدة تسبق العدلات في وصولها إلى الرئة18,24. في الآونة الأخيرة ، وجدنا أن الخلايا البائية تسبق حتى الخلايا الوحيدة وتدخل الرئة في غضون 1 ساعة من التروية (بيانات غير منشورة). عند تكييف هذه التقنية ، يمكن تعديل فترات نقص التروية الدافئة وإعادة التروية وفقا لسؤال الدراسة والفرضية. من الممكن حدوث فترات أطول من نقص التروية الدافئة دون القلق من فقدان السوائل والحرارة المفرط حيث يمكن إغلاق الصدر خلال هذه الفترة.
يمكن أن تحدث العديد من المضاعفات حول الرحم ، مع النتيجة النهائية المشتركة هي الوفاة المحيطة بالجراحة. لقد لاحظنا أن معدل وفاة أثناء الجراحة يتناقص مع تكرار التقنية من قبل الجراح. نقدر أن الجراحين يحتاجون إلى شهرين على الأقل من الممارسة و / أو 20 حالة على الأقل للوصول إلى هضبة في المهارة. في هذه المرحلة ، نقدر أن الوفيات أثناء العملية تحدث في حوالي 1 من كل 50 حالة. غالبا ما يتم الإعلان عن الموت في الفأر المخدر من خلال أنفاس مؤلمة تنطوي على تقلصات قوية في الحجاب الحاجز وعضلات جدار الصدر. عند بداية هذه الأنفاس المؤلمة ، سيحدث الموت في غضون 3-5 دقائق إذا لم يتم اتخاذ أي تدخل. هناك العديد من الأسباب التي يمكن أن تعجل بالوفاة أثناء العملية ، وكثير منها يمكن التعرف عليه ويمكن الوقاية منه. سنسلط الضوء أدناه على الخطوات الحاسمة لهذه الجراحة وتقنيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها لتحقيق نتيجة ناجحة.
تنبيب الخطوة الأولى الحاسمة هي التنبيب الدقيق وتأمين مجرى الهواء لمنع نزع الأنبوب غير المقصود. في جراحة البقاء على قيد الحياة ، من المهم بشكل خاص التأكد من عدم تلف الحبال الصوتية أثناء التنبيب الأولي ، حيث لن يتمكن الفأر من التنفس بعد نزع الأنبوب. يجب أن يتم تقدم ETT بعد الحبال تحت التصور المباشر من خلال المجهر. إذا تم استيفاء المقاومة أثناء التنبيب ، فلا ينبغي أن يتقدم ETT بشكل أعمى. مع الحفاظ على البلعوم الفموي مفتوحا باستخدام مشبك البعوض ، يجب توخي الحذر لعدم اختراق الغشاء المخاطي للفم لأن الدم سيحجب رؤية مجرى الهواء. يجب أن يقتصر عدد محاولات التنبيب على أقل من خمس.
نزع الأنبوب العرضي إذا لم تظهر الرئتان في أي وقت أثناء العملية بشكل مناسب ، فمن المحتمل أن يكون ETT قد انفصل. مظهر آخر من مظاهر نزع الأنبوب العرضي الذي يمر دون أن يلاحظه أحد لفترة طويلة هو تطور الفأر فجأة في التنفس الناهض. بعد التنبيب الأولي ، يجب توخي الحذر لتأمين ETT جيدا للأنف بشكل محيطي بشريط حريري ، ويجب أن يكون ضبط رقبة الفأر وجذعه محدودا. إذا لم تكن الرئة اليسرى أو اليمنى منتفخة ، فقد يكون ETT قد خرج من القصبة الهوائية. يمكن إجراء محاولات لدفع ETT مرة أخرى ، ولكن قد يحتاج الفأر إلى إعادة التنبيب بطريقة سريعة لتجنب الموت المبكر للحيوان. إذا كانت رئة واحدة فقط تنتفخ عندما يتوقع أن يكون كلاهما كذلك ، فقد يكون ETT عميقا جدا ويجب سحبه بعناية وإعادة تأمينه.
تعبئة الرئة يجب أن يتم تحريك الرئة اليسرى باستخدام أدوات تطبيق ذات رؤوس قطنية مع ضغط لطيف على حمة الرئة ، لأن إصابة الانضغاط قد تلحق الضرر بالحويصلات الهوائية وتقلل من امتثال الرئة. لا ينبغي إمساك الرئتين بالملقط أو المشابك لأن ذلك سيؤدي إلى تلف حمة الرئة.
تطبيق المشبك hilar يجب وضع مشبك الظهيرة الأيسر تحت التصور المباشر ، مع الحرص على عدم وضع العقدة بشكل مركزي للغاية (حتى لا يمسك الأذين الأيسر) أو بشكل محيطي جدا (حتى لا يلتقط أي حمة رئوية). من المحتمل أن يؤدي اصطياد الأذين الأيسر بمشبك النقيض إلى التعجيل بالرجفان الأذيني والموت اللاحق. يمكن تحسين تصور الهيلوم من خلال ضمان تراجع الضلع الكافي لتوسيع مجال الرؤية. بعد ربط العقدة المنزلقة ، من المفيد التأكد من أن المشبك مسدود تماما عن طريق إجراء مناورة توظيف - عن طريق إغلاق أنبوب التدفق الخارجي الذي يربط ETT بجهاز التنفس الصناعي يدويا والتأكد من أن الرئة اليسرى لا تتوسع بضغط إيجابي. يفترض انسداد الأوعية الدموية مع تأكيد انسداد الشعب الهوائية ، بالنظر إلى زيادة انهيار الشريان الرئوي والأوردة مقارنة بالقصبات الهوائية الغضروفية. بالإضافة إلى ذلك ، لا ينبغي ربط المشبك النقيري بقوة مفرطة لأنه سيسحق الأجزاء الغضروفية من القصبات الهوائية الرئيسية اليسرى ويمنع تمدد الرئة اليسرى بعد إطلاق مشبك النقيضة. بمجرد تحرير المشبك النقيضي ، من المهم التحقق من أن الرئة لا تزال قادرة على التهوية عن طريق إجراء مناورة توظيف أخرى.
إغلاق الصدر عند إغلاق الصدر ، يجبتجميع الأضلاع4 و 5 معا عندما تكون الرئة في أقصى قدر من الإلهام. سيؤدي ذلك إلى تقليل كمية الهواء المتبقية في التجويف الجنبي ، مما قد يؤدي إلى استرواح الصدر بمجرد إغلاق الأضلاع. يجب إغلاق طبقات العضلات والجلد بطريقة محكمة الإغلاق لتجنب تطور استرواح الصدر التوتري.
الحصول على ABGs أخيرا ، عند الحصول على ABGs ، من المهم أولا تثبيت الهيلوم الأيمن بحيث يكون قياس ABG انعكاسا لوظيفة الرئة اليسرى فقط22,23. بدون المشبك النقيري الأيمن ، فإن الرئة اليمنى ذات التهوية الطبيعية ستعوض أكثر من الرئة اليسرى الإقفارية التالفة وستظهر قياسات ABG طبيعية.
باختصار ، تعد تقنية المشبك النقيري التي وصفناها أعلاه أداة قيمة لدراسة زراعة الرئة ، والأهم من ذلك أنها يمكن أن تعزل دراسة IRI الدافئ دون إدخال التخلق ، أو الصدمة الجراحية المرتبطة بالمفاغرة ، أو التخزين الإقفاري البارد. والجدير بالذكر أن هذه التقنية الموصوفة لربط الهيلار يتم تدريسها بسهولة ويمكن اعتمادها على نطاق واسع ويمكن أن تؤدي إلى نتائج موثوقة وقابلة للتكرار.

<a href="https://app.jove.com/t/6603">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/66232">10.3791/66232</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/66232">Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury</a>. The Protocol and Representative Results&#160;sections were&#160;updated.

Erratum: Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

IRI أثناء زرع الأعضاء هو عامل خطر رئيسي لخلل الكسب غير المشروع الأولي والحلقات اللاحقة من رفض الكسب غير المشروع 1,2. أثناء الزرع ، يتم تعريف وقت نقص التروية الدافئ على أنه الفترة الزمنية من المشبك الأبهري المتبرع إلى بدء التروية الباردة ومن إزالة الأعضاء من الثلج إلى زرع الأعضاء. يتم تعريف وقت التخزين البارد على أنه الفترة الزمنية من بداية التروية الباردة إلى إزالة العضو من الجليد3. نقص التروية الدافئ أكثر ضررا لوظيفة الأعضاء اللاحقة من نقص التروية الباردة4،5،6 ، وآلياته الأساسية تتطلب مزيدا من الدراسة في النماذج قبل السريرية. بالإضافة إلى ذلك ، يرتبط زرع الأعضاء من التبرع بعد الموت القلبي (DCD) بأوقات إقفارية دافئة أطول من التبرع التقليدي بعد الموت الدماغي (DBD)7. في حين أن استخدام المتبرعين بأمراض DCD يمكن أن يوسع مجموعة المتبرعين ويزيد من استخدام الرئة ، إلا أن هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات قبل السريرية لتقييم آثار نقص التروية الدافئ على وظائف الرئة بعد الزرع. أدناه ، وصفنا نموذجا ل IRI الدافئ في الفئران عبر مشبك النقيض الرئوي الأيسر.
تم تطوير العديد من النماذج الحيوانية لقط الهيلار الرئوي وتكييفها على مدى السنوات العديدة الماضية وقد تشمل استخدام مشبك الأوعية الدموية الدقيقة الرضحية8،9،10،11،12،13 ، عاصبة روميل14،15 ، أو ربط خياطة16 كما المشبك هيلار. جوهر المشبك النقيري هو أنه يجب أن يكون قابلا للانعكاس ويسبب ضررا ضئيلا أو معدوما لهياكل النقيض بحيث يمكن تحقيق التروية. هنا ، نصف تقنية المشبك النقيري في الفئران التي تتضمن ربط خياطة عكسية للهيلوم الرئوي الأيسر مع عقدة منزلقة. تسد هذه الطريقة تدفق الشرايين الرئوية والتدفق الوريدي وتدفق الهواء داخل وخارج القصبات الهوائية الرئيسية. الفائدة الرئيسية للعقدة المنزلقة فوق مشبك الأوعية الدموية أو المشبك أو العاصبة هي أنه يمكن إغلاق الصدر خلال فترات طويلة من نقص التروية ، وبالتالي تقليل السوائل غير المعقولة وفقدان الحرارة في الماوس. نحن نقدم بروتوكولا للحصول على قياسات موثوقة لغازات الدم الشرياني (ABG) ولقياس تسرب الخلايا بعد تثبيت النقيري.
تحتل تقنية المشبك النقيري هذه مكانة مهمة في الدراسة الأوسع لزراعة الرئة. بالمقارنة مع النماذج الحيوانية الصغيرة لزراعة الرئة التقويمية ، يمكن لتقنية المشبك النقيضي عزل آثار IRI دون إضافة صدمة مفاغرة جراحية أو خيفية17. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إتقان تقنية المشبك النقيضي بسهولة وسرعة أكبر من عملية زرع رئة الفأر. في الواقع ، باستخدام تقنيات المشبك النقيضي ، تم تحديد العديد من الآليات المهمة في التسبب في IRI في العقد الماضي ، مثل TLR4 و NADPH oxidase ومستقبلات الأدينوزين A2A14،18،19،20. في البروتوكول التالي ، نقدم طريقة موثوقة وقابلة للتعليم وقابلة للتكرار لقط النقيض كأداة لدراسة IRI للرئة.

<table><tbody><tr><td><قوي > أدوية < / قوي > 10</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>٪ محلول بوفيدون اليود</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>لمطهر</td></tr><tr><td>بوبرينورفين 1.3 مجم / مل</td><td>فيديليس صحة</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>للسيطرة على الألم</td></tr><tr><td>كاربروفين</td><td>كرونوس فارما</td><td>NDC 69043-027-18</td><td>للسيطرة على الألم</td></tr><tr><td>الهيبارين 1000 وحدة / مل</td><td>Sagent</td><td>NDC 25021-404-01</td><td>للحصول على الدم الشرياني</td></tr><tr><td>Isoflurane 1٪ -1.5٪</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>للتخدير</td></tr><tr><td>الكيتامين هيدروكلوريد 100 مجم / مل</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>للتخدير</td></tr><tr><td>مرهم العين Puralube Vet</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>لمنع جفاف العين</td></tr><tr><td>زيلازين 20 مجم / مل</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>للتحكم في الألم</td></tr> <tr><td><قوي > أدوات وأدوات < / قوي ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Argent عالي الحرارة طرف غرامة قلم كوتيري</td><td>McKesson</td><td>231</td><td>لتخثر الأوعية</td></tr><tr><td>الدموية المشبك البعوض المنحني</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>13009-12</td><td>للإجراء</td></tr><tr><td>الجراحي ملقط منحني ناعم</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11274-20</td><td>للجراحة إجراء</td></tr><tr><td>مقص ناعم</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>15040-11</td><td>للإجراء الجراحي</td></tr> إعداد <tr><td>مشبك التنبيب</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>18374-44 ، 18144-30</td><td>لإمساك الماوس عموديا باللسان أثناء التنبيب. انظر الشكل التكميلي 1A.&nbsp;</td></tr><tr><td>مباعدات الضلع المغناطيسية</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>18200-01 ، 18200-10</td><td>لسحب بضع الصدر. يجب توصيل المثبت المغناطيسي والضام بواسطة أنابيب اللاتكس الدقيقة أدناه.</td></tr>الألياف <tr><td>البصرية البلاستيكية الصف غير مغلفة ، 500 مو ؛ م</td><td>إدموند للبصريات</td><td>02-532</td><td>لعمل مقدمة للأنبوب الرغامي. انظر الشكل التكميلي 1 ب. يجب أن يحتوي طول 1.5 بوصة من هذه الألياف الضوئية على قطعة من الشريط الحريري مثبتة في أحد طرفيها. يمكن بعد ذلك استخدامه كمدخل للأنبوب الرغامي. يجب أن تكون نهاية المقدمة منحنيات قليلا.</td></tr><tr><td>ماكينة قص باور برو الترا</td><td>أوستر</td><td>078400-020-001</td><td>لقص الشعر</td></tr><tr><td>مقص</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>14370-22</td><td>للإجراء الجراحي</td></tr><tr><td>وسادة تسخين الصغيرة</td><td>K & H منتجات الأليفة</td><td>Thermo-Peep وسادة ساخنة</td><td>للحفاظ على normothermia</td></tr><tr><td>جهاز التنفس الصناعي للحيوانات الصغيرة</td><td>هارفارد</td><td>55-0000</td><td>للتهوية (تلفزيون 0.35 سم مكعب ، PEEP 1 سم H2O ، RR 100-105 / دقيقة ، FiO2 100٪)</td></tr> أنابيب <tr><td>مطاطية من Spearit Micro Latex (1/8 بوصة القطر الخارجي ، 1/16 بوصة القطر الداخلي)</td><td>Amazon.com</td><td>https://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1</td><td>لسحب بضع الصدر</td></tr><tr><td>إحصائية الملف الشخصي رئيس محلل غازات الدم للعناية الحرجة</td><td>نوفا بيوميديكالي</td><td>https://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33 2aM8WGPiUVhicPQZ Wj2AaAqhDEALw_wcB&nbsp; &nbsp;</td><td>لتراجع بضع الصدر</td></tr>أدوات <tr><td>العلوم</td> <td>الدقيقة المشبك المستقيم</td><td>13008-12</td><td>للإجراء الجراحي</td></tr><tr><td>ملقط مستقيم</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>91113-10</td><td>للإجراء</td></tr><tr><td>الجراحي لم يعد المجهر الجراحي</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>ينتج</td><td>للتنبيب والإجراءات الجراحية ؛ يوصي بالاستبدال بمجاهر Leica الجراحية</td></tr> <tr><td>< قوية > مستلزمات < / قوية></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&frac12; حقنة cc مع &frac12; بوصة 29G إبرة</td><td>McKesson</td><td>942665</td><td>لحقن الكيتامين / الزيلازين داخل الصفاق</td></tr> <tr><td>&frac12; بوصة 31G إبرة على حقنة 1 سم مكعب توبركولين</td><td>McKesson</td><td>16-SNT1C2705</td><td>لشفط الدم الشرياني من البطين الأيسر</td></tr><tr><td>1 بوصة 20G قسطرة IV</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>لأنبوب القصبة الهوائية (ETT)</td></tr> <tr><td>1 بوصة الحرير الشريط</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>للصق ETT على الأنف وتأمين الأطراف</td></tr><tr><td>حقنة 3/10 سم مكعب بإبرة 5/16 بوصة 31G</td><td>McKesson</td><td>102-SN310C31516P</td><td>لحقن الأجسام المضادة في خياطة الوريد الأجوف السفلي</td></tr><tr><td>6-0 على إبرة P-10</td><td>McKesson</td><td>S697GX</td><td>لإغلاق بضع الصدر وطبقة العضلات والجلد</td></tr><tr><td>6-0 ربطة عنق حريرية</td><td>التخصصات الجراحية Look</td><td>SP102</td><td>لعمل عقدة منزلقة لمشبك السقف</td></tr><tr><td>أدوات تطبيق ذات رؤوس قطنية مدببة</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>لمعالجة الرئة والتشريح الحاد</td></tr></tbody></table>

مورين اليسار الرئوي هيلار المشبك نموذج من إصابة نقص تروية الرئة

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

تعد إصابة نقص التروية (IRI) أثناء زراعة الرئة عامل خطر رئيسي لمضاعفات ما بعد الزرع ، بما في ذلك خلل الكسب غير المشروع الأولي والرفض الحاد والمزمن والوفيات. أدت الجهود المبذولة لدراسة أسس IRI إلى تطوير نموذج فأر موثوق به وقابل للتكرار لقط الهيلار في الرئة اليسرى. يتضمن هذا النموذج إجراء جراحيا يتم إجراؤه في فأر مخدر وتنبيب. يتم إجراء بضع الصدر الأيسر ، يليه تعبئة الرئة بعناية وتشريح الهيلوم الرئوي الأيسر. يتضمن المشبك النقيري ربط خياطة عكسية للهيلوم الرئوي مع عقدة منزلقة ، مما يوقف التدفق الشرياني والتدفق الوريدي وتدفق الهواء عبر القصبات الهوائية الرئيسية اليسرى. يبدأ التروية عن طريق الإزالة الدقيقة للخياطة. يستخدم مختبرنا 30 دقيقة من نقص التروية و 1 ساعة من التروية للنموذج التجريبي في التحقيقات الحالية. ومع ذلك ، يمكن تعديل هذه الفترات الزمنية اعتمادا على السؤال التجريبي المحدد. مباشرة قبل التضحية ، يمكن الحصول على غازات الدم الشرياني من البطين الأيسر بعد فترة 4 دقائق من تثبيت الظهيرة اليمنى لضمان أن قيم PaO2 التي تم الحصول عليها تعزى إلى الرئة اليسرى المصابة وحدها. كما وصفنا طريقة لقياس تسرب الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي ، والذي يتضمن الحقن في الوريد لجسم مضاد يحمل علامة الفلوروكروم خاص بالخلية (الخلايا) المراد دراستها قبل التضحية. يمكن بعد ذلك حصاد الرئة اليسرى لقياس التدفق الخلوي ، وتجميدها أو تثبيتها ، والكيمياء الهيستولوجية المناعية المضمنة في البارافين ، وتفاعل البلمرة المتسلسل الكمي. تسمح تقنية المشبك النقيري هذه بدراسة مفصلة للآليات الخلوية والجزيئية الكامنة وراء IRI. تكشف النتائج التمثيلية عن انخفاض أكسجة الرئة اليسرى والأدلة النسيجية لإصابة الرئة بعد لقط النقيري. يمكن تعلم هذه التقنية بسهولة واستنساخها من قبل الأفراد ذوي الخبرة في الجراحة المجهرية أو بدونها ، مما يؤدي إلى نتائج موثوقة ومتسقة ويعمل كنموذج يمكن اعتماده على نطاق واسع لدراسة IRI للرئة.

بعد لقط الظهيرة اليسرى ، يكون الضغط الجزئي للأكسجة في الدم الشرياني (PaO2) المنسوب إلى الرئة اليسرى ~ 100 مم زئبق ، وهو أقل بكثير مقارنة ب ~ 500 مم زئبق بعد بضع الصدر الوهمي (الشكل 7 أ ، ن = 6-7). وتجدر الإشارة إلى أنه تم إجراء عمليات استئصال الصدر الوهمية في الفئران B6 مع قياس ABG المأخوذ بعد 4 دقائق من لقط النقيرة اليمنى ، وهو ما يمثل القيم المنسوبة إلى الرئة اليسرى وحدها. أظهر تلطيخ H&amp;E للرئة اليسرى المثبتة بالنقيرية تسلل الخلايا الالتهابية التي تملأ الشعب الهوائية واحتقان الأوعية الدموية بكيات الدم الحمراء ، في حين أن هذه النتائج غائبة في الرئة اليسرى الساذجة (الشكل 7B ، ن = 2). توضح هذه النتائج إصابة الأنسجة الفورية وتسلل الخلايا بعد فترة من نقص التروية وإعادة التروية.
كما تمت مناقشته في الخطوة 6 ، يمكن تمييز العدلات داخل الأوعية الدموية والخلالية عن طريق الحقن في الوريد للأجسام المضادة المضادة ل Ly6G المسمى FITC قبل 5 دقائق من التضحية ، متبوعا بوضع العلامات على جميع العدلات بالأجسام المضادة APC-Ly6G18,24. تظهر المخططات التمثيلية أن ~ 75٪ من العدلات داخل الأوعية الدموية (APC-Ly6G + FITC-Ly6G +) و ~ 25٪ خلالي (APC-Ly6G + FITC-Ly6G-) بعد لقط النقيض في الرئة اليسرى (الشكل 7C ، n = 4). توضح هذه النتائج طريقة موثوقة لتقييم تسرب العدلات ويمكن تكييفها مع أنواع الخلايا الأخرى اعتمادا على الأجسام المضادة المستخدمة (على سبيل المثال ، مضاد Ly6C للوحيدات ، مضاد CD19 للخلايا البائية). هذه التقنية مفيدة لدراسة ديناميات الخلايا بعد IRI.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2.jpg"> الشكل 1: التنبيب بالماوس. أ: فأر محلوق الصدر الأيسر والبطن. ب: أنبوب القصبة الهوائية المتصل بأنبوب جهاز التنفس الصناعي. (ج) بمجرد تأكيد التنبيب، قم بلصق الأنبوب محيطيا على مقدمة الفأر. (د) فأر التنبيب مع أنابيب التدفق الداخلة والخارجة من وإلى جهاز التنفس الصناعي للحيوانات الصغيرة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig02.jpg"> الشكل 2: بضع الصدر الأيسر. (أ) شق الجلد على 4عشر الفضاء الوربي (ICS). (ب) طبقات العضلات مقسمة على 4th الفضاء الوربي. (ج) عمل شق صغيرفوق الضلع 5 بقليل. (د) تمديد شق الأمامي والخلفي في 4عشر ICS . (ه) الرئة تصور في 4عشر ICS . (ف-ز) وضعت مبعدات الضلع. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig03.jpg"> الشكل 3: مشبك الهيلار الأيسر. أ: الرئة اليسرى معبأة بمسحات قطنية. ب: تصوير الرباط الرئوي السفلي (IPL). (ج) مع قلب الرئة اليسرى من الأمام، توضع ربطة عنق حريرية خلف الهيلوم. (د) مع قلب اليسار للخلف فوق ربطة عنق حريرية، يظهر الهيلوم الأمامي. (ه) ربطة أداة من عقدة منزلقة فوق الهيلوم الأيسر. (و) عقدة على هيلوم. (G) مع الانسداد اليدوي للتدفق الخارجي ، لا تنتفخ الرئة اليسرى ، مما يشير إلى نجاح مشبك النقيري. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig04.jpg"> الشكل 4: تحرير مشبك الظهارة الأيسر وإغلاق الصدر الأيسر. (أ) عند تحرير العقدة المنزلقة، يعاد نفخ الرئة اليسرى. (ب) إغلاق الضلع مع لدغة واحدة أعلى بقليل منالضلع 4 و (ج) لدغة واحدة فوقالضلع 6 بقليل. (د-هاء) الصدر مغلق بغرزة واحدة مربوطة في نهاية الإلهام. (F) إغلاق الجلد مع غرز متقطعة (بعد إغلاق طبقة العضلات مع غرزة الجري). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig04large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig05.jpg"> الشكل 5: فتح البطن، وبضع الصدر الصدفي الثنائي، وتجمع الدم الشرياني. (أ) الفأر مضبوط على وضع الاستلقاء. ب: شق جلدي على خط منتصف البطن. ج: بضع البطن الممتد من الخنجري إلى العانة، مع الامتداد إلى اليسار واليمين على طول الضلع السفلي. (د-هاء) فتح الحجاب الحاجز لدخول تجويف الصدر ، مع تمديد شق الحجاب الحاجز يسارا ويمينا على طول معظم الضلع السفلي (الخط المنقط). (و) بضع الصدر الصدفي الثنائي مع شقوق في الخطوط الإبطية الأمامية (الخط المنقط) نحو قمة الصدر. (ز) الفص الملحق للرئة اليمنى الممتد إلى الصدر الأيسر الخلفي للوريد الأجوف السفلي. (ح) تحريك الفص الملحق وإعادته إلى الصدر الأيمن. (I) شفط الدم الشرياني من البطين الأيسر (أقحم: فرق اللون بين البطينين الأيمن والأيسر). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig05large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig06.jpg"> الشكل 6: الحقن الوريدي في الوريد الأجوف السفلي. أ: الدوران الحشوي الإنسي الأيمن لكشف الوريد الأجوف السفلي. ب: حقن المحلول في الوريد الوريدي. ج: الضغط على الوريد الوريدي لتحقيق الإرقاء. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig06large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig07.jpg"> الشكل 7: النتائج التمثيلية لأكسجة الرئة والأنسجة وتسرب العدلات بعد مشبك النقيض الأيسر. أ: الضغط الجزئي للأكسجين في الدم الشرياني للفأر C57BL/6 الذي خضع لبضع الصدر الوهمي مقابل المشبك النقيري. يتم عرض النتائج كمتوسط ± SEM ، ن = 6-7. قيم p محسوبة بواسطة اختبار Mann-Whitney U . ** ص &lt;0.01. (ب) تلطيخ H&amp; E لقسم الرئة المثبت بالفورمالين والمضمن بالبارافين لفأر C57BL / 6 الذي خضع لبضع الصدر الوهمي مقابل المشبك النقيري. يمثل شريط المقياس 250 ميكرومتر. (C) الشكل التمثيلي لتوزيع العدلات داخل الأوعية (APC-Ly6G + FITC-Ly6G +) مقابل العدلات خارج الأوعية الدموية (APC-Ly6G + FITC-Ly6G-) في فأر C57BL / 6 بعد مشبك النقية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig07large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
الشكل التكميلي 1: مقدم للأنبوب الرغامي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/Supplemental_Figure_1_updated.pdf" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.</a>

يحدد البروتوكول طريقة مجدية وموثوقة وقابلة للتكرار لقط النقيض الرئوي الأيسر والتي يمكن استخدامها لدراسة إصابة نقص تروية الرئة في نماذج الفئران.

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft ...

نحن مهتمون بدراسة آثار إصابة نقص التروية على النتائج بعد زراعة الرئة بهدف فهم الآليات الخلوية والجزيئية الأساسية. تساهم العدلات التي تدخل الرئة في إصابة نقص التروية أو IRI. لقد اكتشفنا مؤخرا أن الخلايا البائية تدفع العدلات إلى دخول الرئة، وتلعب دورا في تجنيد العدلات بعد IRI.يمثل زرع الرئة اليسرى في الفأر تحديا تقنيا ، ويتطلب تدريبا مخصصا بدوام كامل على مدار عدة أشهر لتحقيق نتائج متسقة. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يقدم الحساسية والصدمات المفاغرة الجراحية. وبالتالي ، نحن بحاجة إلى تقنية يسهل الوصول إليها يمكنها عزل دراسة إصابة نقص التروية.باستخدام نموذج المشبك النقيضي الخاص بنا ، وجدنا أن الخلايا البائية تدخل الرئة مبكرا بعد إصابة نقص التروية ، وأنها تجند الخلايا الوحيدة الكلاسيكية في مستقبلات الخلايا البائية بطريقة تعتمد على TLR4. هذا يؤدي في النهاية إلى زيادة تسرب العدلات في الرئة. يتضمن بروتوكولنا ربط خياطة عكسية للهيلوم الرئوي الأيسر مع عقدة منزلقة.تسمح الطبيعة المرنة وغير المزعجة للخياطة بإغلاق الصدر ، وهو أمر مفيد لدراسة فترات أطول من نقص التروية الدافئة ، حيث يقلل إغلاق الصدر من الحرارة وفقدان السوائل غير الحساس في الماوس.

murine-left-pulmonary-hilar-clamp-model-lung-ischemia-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

صدمة جراحية يدفع استجابة التهابية. ومن المعروف السيتوكينات ويغاندس الذاتية لتعديل حجم عضلة القلب بعد احتشاء الإسكيمية وضخه. نحن تقديم تعديل المغلقة الصدر نموذج من نقص التروية الفئران وضخه باستخدام أوزان شنقا للحد من آثار بضع الصدر.

والفئران مغلقة الصدر نموذج نقص التروية القلبية وإعادة إشباع الخلايا

ونحن نقدم طريقة جراحية للحث التجريبية نقص التروية / ضخه (I / R) إصابة لمحاكاة احتشاء عضلة القلب (MI) في نماذج الماوس التي تسمح لمزيد من الوضوح في تحديد المواقع للربط على الشريان الأمامي الأيسر تنازلي (LAD) لزيادة التكاثر من التجارب MI في الفئران.

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

وقد تم وضع فريد كبد الفئران نموذج المشبك نقيري لدراسة تأثير الجزيئات الدوائية في تخفيف إصابة نقص التروية ضخه. يتضمن هذا النموذج إقناء؛ إدخال القنية المباشر لتوريد المدخل إلى الجزء الكبد الدماغية عن طريق أحد فروع الوريد البابي، والسماح للتسليم الكبدي المباشر.

طريقة التسليم المباشر القطاعي البينية الكبد باستخدام نموذج الفأر الكبد نقيري المشبك

هنا نقوم بوصف إجراء جراحي يوضح كيفية تحقيق الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر في الفئران. هذا النموذج ذو أهمية كبيرة للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب والعمليات البيولوجية المصاحبة.

نموذج احتشاء عضلة القلب Murine باستخدام الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر

نحن نصف بالتفصيل نموذج ورم سرطان القولون والمستقيم (CRLM) تأثير إعادة إقفاريالكبد (I/R) في نمو الورم والانبثاث. هذا النموذج يمكن أن تساعد على فهم أفضل للآليات الكامنة وراء الجراحة الناجمة عن تعزيز نمو الكبد النقيلي.

نموذج مورين من أورام الكبد النقيلي في وضع إصابة نقص تروية التسريب

تم تحسين نموذج نقص تروية عضلة القلب لقلب الفئران باستخدام متراجع ذاتي الصنع ، وأنبوب كلوريد البولي فينيل ، وطريقة عقد فريدة من نوعها. أظهر مخطط كهربية القلب وكلوريد ثلاثي فينيل تترازوليوم والتلطيخ النسيجي ونتائج تحليل البقاء على قيد الحياة في المئة أن مجموعة النماذج المحسنة لديها معدلات نجاح وبقاء أعلى من مجموعة النماذج الموجودة بالفعل.

تحسين نموذج القوارض من نقص تروية عضلة القلب وإصابة التروية

نموذج جراحي للفأر لإنشاء إصابة نقص تروية الرئة اليسرى (IR) مع الحفاظ على التهوية وتجنب نقص الأكسجة.

نموذج فأر للتنبيب الرغامي وجراحة نقص تروية الرئة المهواة

يظهر هنا إجراء جراحي للربط الدائم للشريان التاجي الأيسر في الفئران. يمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية والاستجابة الالتهابية المرتبطة بها بعد احتشاء عضلة القلب.

ربط الشريان التاجي الأيسر: نموذج الفئران الجراحي لاحتشاء عضلة القلب

تصف هذه الدراسة نموذجا لإصابة الرئة الحادة بعد إعادة تروية نقص التروية الحشوية أثناء التصلب الأبهري فوق الاضطرابات الهضمية عن طريق شق البطن في الفئران. إنه يتيح التحقيق في كل من الآثار السريرية والبيولوجية لقط الأبهر بالإضافة إلى تأثير نقص التروية وإعادة التروية على الأعضاء الأساسية وإصابات الرئة البعيدة.

نموذج لإصابة الرئة الحادة بعد إعادة تروية التروية الحشوية عن طريق التصفير الأبهري فوق الاضطرابات الهضمية في الفئران

نحن تصف نماذج من إصابة الكلى نقص التروية-ضخه التي يسببها المعتدلة والشديدة والتي الفئران الخضوع من جانب واحد الكلوي عنيق لقط تليها في وقت واحد أو تأخر استئصال الكلية المقابل، على التوالي. هذه النماذج تعطي باستمرار يؤدي إلى الفشل الكلوي وتليف بعد الاصابه، ولكن شدة الإصابة والبقاء على قيد الحياة تعتمد على خلفية والعمر والمعدات الجراحية الماوس.

نقص التروية-ضخه نموذج من إصابة الكلى الحاد والتليف آخر الاصابات في الفئران

تعلم تقنية مشبك اليسار الرئوي الهيلاري لدراسة إصابة نقص التروية-إعادة التروية في رئة الفئران. يُساعد هذا النموذج على فهم آليات الخلايا المناعية وتطوير استراتيجيات علاجية محسّنة.

مورين اليسار الرئوي هيلار المشبك نموذج من إصابة نقص تروية الرئة

استكشف المزيد من الفيديوهات