إنشاء نموذج تجريبي للفأر من ورم بطانة الرحم لدراسة العقم المرتبط به

يركز نطاق بحثنا على فهم الآليات الكامنة وراء العقم المرتبط بالورم البطاني الرحمي. نهدف إلى معالجة الفجوة في المعرفة من خلال تطوير نموذج فأر يحاكي ورم بطانة الرحم والتحقيق في تأثيره على الخصوبة. في مجال أبحاث الانتباذ البطاني الرحمي ، تشمل التطورات الحديثة التقدم في فهم الآليات الجزيئية الكامنة وراء الانتباذ البطاني الرحمي ، وتحديد علامات جديدة للتشخيص والعلاج ، وتطوير نماذج مبتكرة لدراسة أنواع فرعية محددة مثل ورم بطانة الرحم. تساهم هذه التطورات في تحسين المعرفة والاستراتيجيات العلاجية المحتملة لبطانة الرحم. تشمل التحديات التجريبية الحالية في أبحاث ورم بطانة الرحم الافتقار إلى نموذج حيواني موثوق به ، وفهم محدود للتسبب في المرض وتأثير الخصوبة ، والحاجة إلى دراسات التكرار والاختبارات التشخيصية. يعالج نموذج فأر ورم بطانة الرحم ودمج النتائج هذه التحديات ويعزز المجال.

يقدم بروتوكولنا مزايا مميزة مقارنة بالتقنيات الأخرى. يركز بشكل خاص على تقليد ورم بطانة الرحم بينما لم يتم إنشاء أنواع فرعية أخرى بهذه الطريقة. مع معدل نجاح مرتفع ، فإنه يتيح التعديلات الجينية ويكرر الخصائص الإنجابية المشابهة للإنسان ، مما يجعله أداة قيمة لدراسة العقم المرتبط بورم بطانة الرحم. مهدت النتائج التي توصلنا إليها الطريق لعصر جديد من أبحاث الانتباذ البطاني الرحمي. من خلال سد فجوة طويلة الأمد ، يعد نموذجنا برؤى تحويلية ، مما يحدث ثورة في فهمنا وعلاجنا وربما الوقاية من ورم بطانة الرحم. من خلال دمج النتائج المستخلصة من الدراسات المتكررة والتشخيصية ، يعزز بحثنا السياق الأوسع لأبحاث الانتباذ البطاني الرحمي ورعاية المرضى.

[راوي] بعد جمع الفراش الذي يحتوي على الفيرومونات الذكرية ، أدخلها إلى قفص الفأر الأنثوي لمدة 48 ساعة. صب 10 ملليلتر من PBS في طبق بتري واغمر أحد طرفي قطعة قطن فيه لامتصاص السائل. أخرج فأرة واحدة برفق من قفصها وضعها على الغطاء. أدخل قطعة القطن المبللة برفق في المهبل وقم بتدوير المسحة برفق عند 45 درجة على المحور الطويل لجسم. بعد جمع الخلايا من جدران المهبل المضيئة ، اسحب المسحة بعناية. قم بلف طرف المسحة برفق على شريحة زجاجية نظيفة تحمل علامة مسبقة لنقل الخلايا المجمعة. افحص الشريحة تحت المجهر بحثا عن وجود خلايا ظهارية متقرنة تشير إلى مرحلة الشبق. للبدء ، قم بتطهير منطقة البطن من أنثى الفأر في مرحلة الشبق الرحيم من قبل المتبرع ب 70٪ إيثانول. استخدم مقصا جراحيا معقما لعمل شق بطول سنتيمتر واحد على طول خط الوسط من الصفاق ، مما يؤدي إلى تعريض الطبقة العضلية. بعد ذلك ، استخدم مقصا مختلفا لقطع طبقة العضلات والكشف عن تجويف الحوض. أغلق أطراف الملقط وارفع الأمعاء برفق باستخدام الجزء المركزي الحاد. بعد تحديد موقع الرحم ، قم بتشريح قرن الرحم بالكامل بشكل معقم ، مما يضمن إزالة قرني الرحم. ضع الأنسجة المستئصعة في طبق بتري يحتوي على PBS وقم بإزالة الأنسجة الدهنية الزائدة. باستخدام مشرط معقم ، قم بتشريح الأنسجة بدقة إلى قطع مكعبة بحجم ملليمتر واحد. أضف PBS بشكل دوري للحفاظ على رطوبة الأنسجة. ضع الفأر المتلقي المخدر في وضع ضعيف على لوح جراحي معقم. حدد موقع الجراحة عن طريق التلاعب برفق بالأرجل الخلفية للشعور ببروز عظمي تحت الجلد. تطهير المنطقة الجراحية بمسحة إيثانول بنسبة 70٪ ، ثم بالبيتادين. في الموقع المختار ، قم بعمل شق جانبي دقيق بين ثلاثة وخمسة ملليمترات. ثبت المبيض بملقط اليد غير المهيمن وحقن 100 ميكرولتر من PBS في جراب المبيض مع مراعاة الانفصال الطفيف. قم بعمل شق صغير في الجراب ، وباستخدام ملقط دقيق ، قم بزرع شظايا أنسجة الرحم المكعبة بمقدار ملليمتر واحد. بعد الجراحة ، قم بخياطة طبقات العضلات بخيوط قابلة للامتصاص والجلد بخيوط غير قابلة للامتصاص. بعد أربعة أسابيع ، قم بإزالة الفأر المتلقي المزروع من قفص السكن. قم بعمل شق خط الوسط على الفأر المتلقي الذي تم القتل الرحيم وفضح تجويف البطن لفحص الأعضاء. افحص تجويف البطن بدقة بحثا عن آفات بطانة الرحم الدخيلة. ثم ، استخراج المبايض مع الآفات المرئية للتصوير الفوتوغرافي. إصلاح المبايض مع الآفات في الفورمالين مخزنة محايدة 10٪. بعد تقسيم وتركيب أقسام الأنسجة على شريحة ، ضع محلول الزيلين المنزلق لإزالة البارافين. أعد ترطيب أقسام الأنسجة عن طريق وضع الشريحة في سلسلة من تركيزات الإيثانول المتناقصة. عالج أقسام الأنسجة بحمض دوري 1٪ لمدة خمس إلى 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم اشطف الشريحة جيدا بالماء المقطر لإزالة أي حمض دوري متبقي. الآن ، تلطيخ أقسام الأنسجة بمحلول التحول لمدة 15 دقيقة. اشطف الشريحة بماء الصنبور الساخن لإزالة البقع الزائدة ثم في الماء المقطر. قم بتلطيخ أقسام الأنسجة باستخدام هيماتوكسيلين ماير لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق. اشطف الشريحة بماء الصنبور الجاري قبل وضع كاشف الازرق لمدة 30 ثانية. بعد شطف الشريحة في الماء المقطر ، قم بتجفيف الأقسام بزيادة تركيزات الإيثانول. اغمر الأقسام في الزيلين لجعلها شفافة. ضع وسيط تثبيت على الأقسام وضع غطاء برفق لتجنب فقاعات الهواء. بعد التجفيف ، افحص الشريحة تحت المجهر الضوئي بحثا عن وجود غدد بطانة الرحم والسدى والخراجات النزفية التي تؤكد الانتباذ البطاني الرحمي في المبيض. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة الزائفة ، كان النمو الكيسي بطانة الرحم خارج الرحم مرئيا بالاشتراك مع مورفولوجيا المبيض بعد أربعة أسابيع من الزرع في مجموعة بطانة الرحم. أكد مزيد من التدقيق النسيجي المرضي نجاح الزرع الناجح لأنسجة بطانة الرحم خارج الرحم في مجموعة بطانة الرحم.