In Situ Nucleosome Assembly for Single-Molecule Correlative Force and Fluorescence Microscopy

Htet Ng; Masuda Begum; Gabriella  N. L. Chua; Shixin Liu

doi:10.3791/66579

تجميع النيوكليوسوم في الموقع للقوة الترابطية أحادية الجزيء والفحص المجهري الفلوري

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

In Situ Nucleosome Assembly for Single-Molecule Correlative Force and Fluorescence Microscopy

تجميع النيوكليوسوم في الموقع للقوة الترابطية أحادية الجزيء والفحص المجهري الفلوري

Full Text

1,691 Views

05:58 min

September 6, 2024

DOI: 10.3791/66579-v

Htet Ng*¹, Masuda Begum*¹, Gabriella N. L. Chua*^1,2, Shixin Liu¹

¹Laboratory of Nanoscale Biophysics and Biochemistry,The Rockefeller University, ²Tri-Institutional PhD Program in Chemical Biology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

تقدم هذه المقالة إجراء تجريبيا مفصلا لإعادة تكوين حبال الحمض النووي المحتوية على النيوكليوسوم للقوة المترابطة أحادية الجزيء والفحص المجهري الفلوري. كما يصف العديد من التجارب النهائية التي يمكن إجراؤها لتصور سلوك الربط للبروتينات المتفاعلة مع الكروماتين وتحليل التغيرات في الخصائص الفيزيائية للنيوكليوسومات.

تقنيات الجزيء الفردي هي أدوات قوية لدراسة ميكانيكا وتنسيق وتكوين أنظمة الكروماتين. وبالتالي ، يبحث الباحثون دائما عن طرق أفضل لتوليد ركائز النيوكليوسوم. نصف هنا بروتوكولا لتكوين النيوكليوسومات عبر الحمض النووي في C2 في جزيء واحد القوة المترابطة والمجهر الفلوري.

عادة ما يتم تصنيع ركائز النيوكليوسوم عن طريق تجميع النيوكليوسومات على الحمض النووي الذي يحتوي على تسلسلات تحديد المواقع القوية عن طريق غسيل الكلى الملحي. على الرغم من أن هذا له مزايا ، إلا أنه يولد نيوكليوسومات مستقرة صناعيا وهو ثقيل مع الكواشف. يقوم بروتوكولنا بإعداد ركائز النيوكليوسوم للقوة المرتبطة بالجزيء الفردي والفحص المجهري الفلوري بدون تسلسل محدد للحمض النووي وبكواشف أقل بكثير في غضون دقائق.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos