عزل نخاع عظم الفأر الوليدي وإعداد الضامة المشتقة من نخاع العظم
May 24th, 2024
يصف هذا البروتوكول طريقة غير إنزيمية ومباشرة لعزل خلايا نخاع عظم الفأر الوليدي البالغة من العمر 7-9 أيام وتوليد بلاعم متباينة باستخدام طاف من خلايا L929 كمصدر لعامل تحفيز مستعمرة المحببات (M-CSF). تم تحليل الضامة المشتقة من نخاع العظم بشكل أكبر للمستضدات السطحية F4 / 80 و CD206 و CD11b والكفاءة الوظيفية.
نطاق هذه الدراسة هو فهم بعض القيود في الاستجابة المناعية المبكرة للعدوى البكتيرية. من أجل تحقيق ذلك ، نحتاج إلى تطوير واستخدام نماذج بحثية خاصة بحديثي الولادة. يعد عزل نخاع العظم عن جرو يبلغ من العمر سبعة أيام أمرا صعبا وغير راسخ.
تعتبر البلاعم المشتقة من نخاع العظم الوليدي حساسة وعرضة للإجهاد عند مقارنتها ب BMDM الأخرى. التقنية المستخدمة في هذا البروتوكول بسيطة وقابلة للتكرار. توجه هذه الطريقة المستخدمين في عزل نخاع العظم من الفئران حديثي الولادة البالغة من العمر سبعة إلى تسعة أيام دون استخدام أي إنزيمات.
توفر هذه الدراسة استراتيجية موحدة لتوليد البلاعم المشتقة من نخاع العظم من الفئران حديثي الولادة والتي يمكن استخدامها لمعالجة الأسئلة حول علم المناعة الوليدي. توفر هذه الطريقة القابلة للتكرار نموذجا خاصا بالعمر لتقدم أبحاث المناعة لحديثي الولادة عبر العديد من مجالات الخبرة.
النظرة العامة
يحدد هذا البروتوكول طريقة غير إنزيمية لعزل خلايا نخاع العظام من الفئران المولودة حديثاً وتوليد البلاعم المتمايزة. يركز الدراسة على تحديات العمل مع الفئران المولودة حديثاً بعمر 7-9 أيام وحساسية البلاعم المشتقة من نخاع العظام لديهم.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- علم الأعصاب
- علم المناعة
- بيولوجيا الخلية
الخلفية
- فهم الاستجابات المناعية المبكرة للعدوى البكتيرية.
- التحديات في عزل نخاع العظام من الفئران المولودة حديثاً.
- البلاعم المشتقة من نخاع العظام المولودة حديثاً حساسة وتتأثر بالإجهاد.
- الحاجة إلى تقنيات قابلة للتكرار في أبحاث المواليد الجدد.
غرض الدراسة
- تطوير طريقة موثوق بها لعزل نخاع العظام من الفئران المولودة حديثاً.
- لتوليد البلاعم الوظيفية لدراسات الاستجابة المناعية.
- لتعزيز فهم الاستجابات المناعية للمواليد الجدد.
الطرق المستخدمة
- عزل نخاع العظام من الفئران المولودة حديثاً بعمر 7-9 أيام.
- تقنية غير إنزيمية لعزل الخلايا.
- استخدام مصل خلايا L929 كمصدر لـ M-CSF.
- تحليل المستضدات السطحية والكفاءة الوظيفية للبلاعم.
النتائج الرئيسية
- العزل الناجح للبلاعم المشتقة من نخاع العظام المولودة حديثاً.
- توصيف البلاعم باستخدام المستضدات السطحية F4/80، CD206، وCD11b.
- تأثير الكفاءة الوظيفية في البلاعم المتولدة.
- توثيق طريقة بسيطة وقابلة للتكرار.
الاستنتاجات
- يوفر البروتوكول طريقة موثوق بها لدراسة الاستجابات المناعية للمواليد الجدد.
- يمكن استخدام البلاعم المعزولة في المزيد من الأبحاث المناعية.
- قد تسهّل هذه التقنية تقدماً في دراسات صحة المواليد الجدد.
الأسئلة الشائعة
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
