نموذج فئران لانسداد / إعادة تروية الشريان الدماغي الأوسط دون الإضرار بالتركيب التشريحي للأوعية الدماغية

تطور هذه الدراسة نموذجا للفئران لانسداد الشريان الدماغي الأوسط أو إعادة التروية التي تحافظ على تكامل الأوعية الدماغية. يركز على إدخال طريقة جديدة لتحفيز نموذج السكتة الدماغية الإقفارية للفئران دون المساس بتشريح الأوعية الدموية الدماغية. يستخدم المشروع تقنيات الجراحة المجهرية ونقص التروية الناجم عن الفتيل.

يقدم طريقة للحث على نقص التروية دون الإضرار بالشريان السباتي المشترك أو نظام الشريان السباتي الخارجي. على عكس التقنيات التي قد تضعف تدفق الدم بشكل دائم أو تلحق الضرر بتشريح الأوعية الدموية الدماغية ، يحافظ هذا البروتوكول على العديد من السلامة التشريحية للأوعية. يوفر نهجا أكثر دقة وأقل ضررا لدراسة السكتة الدماغية الإقفارية.

للبدء ، ضع الجرذ المخدر على منصة تشغيل. بعد حلق الفراء حول الحلق ومنطقة الرقبة اليسرى ، قم بتطهير موقع الجراحة ثلاث مرات باستخدام البيتادين و 70٪ الإيثانول. قم بعمل شق خط الوسط بطول 1.5 سم على الجانب البطني من الرقبة وافتح اللفافة السطحية.

إجراء تشريح حاد لكشف الشريان السباتي الخارجي والشريان السباتي الداخلي والشريان السباتي المشترك. ضع ثلاث خيوط حريرية 4-0 حول الشريان السباتي المشترك وخياطة حريرية أخرى عبر الشريان السباتي الخارجي بالقرب من تشعب الشريان السباتي الداخلي. اربط عقدة انزلاقية قابلة للإطلاق على الشريان السباتي المشترك القريب.

شد الخيط على الشريان السباتي المشترك البعيد باستخدام الإرقاء لمنع تدفق الدم. اربط عقدة انزلاقية أخرى بشكل فضفاض حول الشريان السباتي المشترك أثناء الخياطة لضمان عدم انسداد الوعاء. الآن ، باستخدام المقص ، قم بعمل شق 0.5 ملم بين خياطة الحرير القريبة والخياطة الوسطى على الشريان السباتي المشترك.

أدخل خيوطا بطول ثلاثة سنتيمترات 4-0 في الشريان السباتي المشترك. شد خيوط الحرير حول الشريان السباتي المشترك لتأمين الفتيل داخل اللمعة ومنع النزيف. ثم قم بإزالة الخيط من الشريان السباتي المشترك البعيد.

استمر في إدخال الفتيل في تجويف الشريان الدماغي الأوسط الذي يتحكم في الغرز حول الشريان السباتي الخارجي. ابدأ مؤقتا وسجل الوقت الذي يبدأ فيه الانسداد. خياطة شق الرقبة ب 3-0 خيوط حريرية.

ضع بعناية في قفص الاسترداد. بعد النمذجة الإقفارية ، أعد فتح شق الرقبة من الجرذ المخدر. تحت مجهر تشريح ، اسحب خيوط الانسداد برفق مع وضع المشبك الصغير أفقيا بالقرب من عقدة الخياطة داخل اللمع.

استمر في الانسحاب حتى يظهر الطرف الأبيض بوضوح بالقرب من شق الشريان السباتي المشترك. ثم قم بإزالة الفتيل تماما وتحرير عقدة الخياطة المؤمنة داخل اللمع. ضع مشبك دقيق آخر بالقرب من جانب نهاية القلب من عقدة الشريان السباتي المشترك القريب.

بعد ذلك ، قم بإزالة عقدة الخياطة حول الشريان السباتي المشترك القريب. اشطف موقع الشق بالمحلول الملحي. جفف المنطقة بكرة قطنية معقمة لإزالة الدم وتحقيق مجال جراحي واضح.

الآن عند تكبير 4 أضعاف ، قم بخياطة شق الشريان السباتي المشترك باستخدام 11-0 خيوط جراحية مجهرية بنمط متقطع. بعد الخياطة ، قم بإزالة المشابك الدقيقة من طرفي الشريان السباتي المشترك لاستعادة تدفق الدم. اضغط بكرة قطنية معقمة على موقع خياطة الشريان السباتي المشترك لمدة 30 ثانية.

راقب الشريان السباتي المشترك لمدة دقيقتين لضمان عدم حدوث نزيف. خياطة شق الرقبة وضع الجرذ في صندوق رعاية 35 درجة مئوية لاستعادة التخدير. بعد ثلاثة أيام من إعادة تروية نقص التروية ، قم بإزالة الدماغ من الفئران القتل الرحيم.

قم بتجميد الدماغ عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر لمدة 20 دقيقة. بعد التجميد ، استخدم مشرطا لتقطيع الدماغ إلى أقسام إكليلية بسمك ملليمترين. احتضان أقسام الدماغ بنسبة 2٪ TTC لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

بعد الحضانة ، انقل أقسام الدماغ إلى طبق بتري صغير وتخلص من 2٪ TTC. ثم قم بإصلاح أقسام الدماغ باستخدام 10٪ فورمالين لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تخلص من الفورمالين واشطف أقسام الدماغ باستخدام PBS.

التقط صورا رقمية لشرائح متتالية. باستخدام برنامج ImageJ ، قم بقياس مناطق الاحتشاء كميا. بعد تلطيخ TTC ، لوحظت الاحتشاءات الناتجة عن نقص التروية الدماغي في كل من المخطط والقشرة.

بعد ثلاثة أيام من السكتة الدماغية الإقفارية ، تم قياس النسبة المئوية الإجمالية للاحتشاء بحوالي 30٪ من نصف الكرة الأرضية بمعدل وفيات يبلغ 16.7٪ بعد الجراحة.