August 16th, 2024
هنا ، نقدم التحضير خطوة بخطوة للتضخيم متساوي الحرارة القائم على إعادة التركيب والتعقيم بالتجميد والتفاعلات القائمة على التكرارات المتجانسة القصيرة المتباعدة بانتظام (CRISPR) ، والتي يمكن استخدامها للكشف عن المؤشرات الحيوية للحمض النووي لمسببات الأمراض المعدية أو العلامات الجينية الأخرى ذات الأهمية.
نقوم بتطوير اختبار نقطة الرعاية للكشف عن هذه المواد من الأمراض المعدية. يستخدم هذا الاختبار تضخيم الحمض النووي متساوي الحرارة والكشف المستند إلى كريسبر. مع دقة تناضحية عالية مشابهة ل PCR ، يمكنهم اكتشاف اختلافات التسلسل الصغيرة بما في ذلك تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة ويمكن أن تكون متعددة.
كريسبر ، تحتوي التفاعلات الاسموزية على مكونات وخطوات متعددة ويصعب إجراؤها في نقطة الرعاية. نظرا لأن التناضح يعتمد على كريسبر ، فإن التناضح حساس للغاية ، وهناك خطر التلوث المرحل الذي يمكن أن يؤدي إلى نتائج خاطئة. لحسن الحظ ، يمكن التخفيف من هذه المشكلة إذا قمنا بتبسيط إجراءات التفاعلات.
نحن نقدم طريقة سهلة الاستخدام للكشف عن مسببات الأمراض وعلامات علم الوراثة باستخدام تضخيم متساوي الحرارة لإعادة الإدماج والكواشف القائمة على كريسبر. هذه الكواشف سهلة التخزين والاستخدام. نقدم أيضا نصائح لإصلاح المشكلات الشائعة عند استخدام هذه الطرق والكواشف ، مما يسهل على الأشخاص استخدامها.
يستخدم البروتوكول هنا كواشف كريسبر ، والتي تسهل النقل والتخزين. يمكن بسهولة إعادة ترطيب الكواشف المجففة بالتجميد في نقاط الاستخدام والاحتفاظ بكفاءة عالية في التضخيم والكشف. نأمل في تطبيق تقنيات تشخيص كريسبر للكشف عن الأمراض المعدية المتوطنة والناشئة.
إذا كان من الممكن إجراء هذا الاختبار بشكل روتيني وصحيح في نقطة الرعاية ، فقد يؤدي ذلك إلى إبلاغ خيارات العلاج المضاد للفيروسات والمضادات الحيوية ، وربما إنقاذ الأرواح ، وتقليل الإفراط في استخدام الأدوية ، وتطوير المقاومة.
تقدم هذه المقالة طريقة لتطوير اختبارات نقطة الرعاية التي تستخدم تضخيم الحمض النووي المتساوي الحرارة والكشف المستند إلى CRISPR لتحديد المواد الوراثية للأمراض المعدية. يهدف هذا النهج إلى تعزيز الحساسية والدقة مع معالجة التحديات مثل مخاطر التلوث.
Premixed and freeze-dried CRISPR-based diagnostic reagents enable rapid, accurate detection of infectious disease genetic markers at the point of care, addressing operational bottlenecks in decentralized testing. This approach reduces manual handling complexity and contamination risk, supporting scalable deployment in resource-limited and field settings. The method enhances predictive confidence for early intervention and informs therapeutic decision-making in real time.
This method integrates from early discovery through translational research, supporting workflows from target identification to preclinical validation of diagnostic platforms.