إنشاء نموذج فئران طفيف التوغل للانسداد الرئوي باستخدام جلطات الدم الذاتية

يتمثل نطاق بحثنا في تحسين موثوقية وقابلية استنساخ نماذج القوارض للانسداد الرئوي الذي يحاكي الفيزيولوجيا المرضية البشرية. نهدف إلى الإجابة على كيفية استخدام التقنيات طفيفة التوغل لتحفيز نماذج PE ، على أمل أن تسهل تطوير استراتيجيات علاجية جديدة. تولد بروتوكولاتنا جلطات دموية ذاتية المنشأ بطريقة قياسية ونماذج PE للقوارض الجراحية المستحثة بأقل قدر من التوغل ، وبالتالي تحسين موثوقية وقابلية التكاثر لتجارب PE. لقد كشفنا أن حل الجلطة سريع في القوارض. وهذا ما يفسر سبب صعوبة إنشاء نموذج ارتفاع ضغط الدم الرئوي الانصمام الخثاري المزمن. ستوجه تقنيات تصور الجلطة هنا تطوير نموذج حيواني موثوق به CTAP. نحن مختبر مشترك لكل من الهندسة الطبية الحيوية وفرق القلب والأوعية الدموية السريرية. مع هذا النموذج ، سيركز مختبرنا على تطوير استراتيجيات جديدة للانسداد الخثاري والمضاعفات للوقاية من البولي إيثيلين بناء على حلول المواد الحيوية المتقدمة.

[الراوي] للبدء ، ضع المخدر على منصة التشغيل في وضع ضعيف. مد كلا الأطراف الأربعة أفقيا من الجسم وقم بتمديد الأطراف الخلفية لكشف منطقة الفخذ بشكل مناسب. باستخدام شريط طبي ، قم بتأمين في هذا الموقف. استخدم ماكينة حلاقة كهربائية لحلاقة الشعر حول القص والفخذ. ثم قم بتلطيخ كريم إزالة الشعر على الشعر المتبقي ، وتطهير البشرة ثلاث مرات باستخدام اليود البوفيدوني. أدخل إبرة قياس 27 متصلة بحقنة سعة ملليلتر واحد عموديا على عمق ثمانية ملليمترات لثقب الوريد الأجوف القحفي الأيسر أو الأيمن. ثم أمسك المحقنة واسحب المكبس برفق للخلف لخلق ضغط سلبي داخل البرميل. اسحب الإبرة تدريجيا حتى يتدفق الدم. ثم حافظ على هذا الوضع حتى يتم جمع 0.3 مل من الدم. لتحضير جلطة دموية ، ادفع الدم الذي تم جمعه إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر. ثم اسحب الدم إلى أنبوب السيليكون الخاص بمولد الخثرة عصامي الصنع حتى يبلغ طول عمود الدم 10 سم. انتظر 30 دقيقة للسماح للدم بالتخثر. ثم اغسل عمود الدم في طبق بتري يحتوي على محلول ملحي عادي. بعد ذلك باستخدام مقص ناعم ، قم بقطع عمود الجلطة إلى جلطات دموية موحدة ، يبلغ طول كل منها أربعة ملليمترات. ارسم 15 إلى 25 جلطة في الحاقن عصامي الصنع المملوء مسبقا بملليلترين من المحلول الملحي العادي. بعد تطهير المنطقة الجراحية للفأر المخدر ، قم بعمل شق جلدي بطول خمسة ملليمترات فوق أصل الأوعية الشرسوفية السطحية في منطقة الفخذ. باستخدام مجهر استريو مكبر 10x ، افصل طبقة رقيقة من الدهون تحت الجلد لفضح الأوعية الشرسوفية السطحية. اعزل الوريد الشرسوفي السطحي بعناية عن الشريان والأعصاب والأنسجة الدهنية. ثم تحكم في الجانب البعيد ب 8-0 خياطة معقمة وتثبيت الخيط بمشبك صغير. تحكم في الجانب القريب ب 8-0 حلقة خياطة معقمة متصلة بمشبك صغير آخر. اربط الحلقة البعيدة واعبر الوريد باستخدام الكي. بعد ذلك ، قم بعمل شق عرضي صغير في الجانب البعيد من الوريد المعزول وقم بغسل الدم المتبقي في تجويف الوريد باستخدام محلول ملحي طبيعي. بمجرد أن يصبح الوريد صافيا ، استخدم ملاقط صغيرة لتكبير الشق الوريدي. للانصمام ، أدخل برفق إبرة الحاقن عصامي الصنع في الوريد من خلال شق الوريد. قم بتأمين الإبرة بمشبك ثالث لمنعها من الانزلاق من الوريد. ثم ادفع المكبس ببطء لإعطاء كمية صغيرة من المحلول الملحي العادي. استمر في دفع المكبس لإعطاء الجلطات في الوريد الفخذي من خلال الوصول إلى الوريد الشرسوفي السطحي. اربط الوريد بالخياطة القريبة. أخيرا ، قم بخياطة الشق. بعد القتل الرحيم للفأر بجرعة زائدة من الأيزوفلوران ، قم بقطع الأضلاع بمقص كبير وافتح الصدر لتجنب تلف الرئتين والأوعية الكبيرة. الآن أدخل إبرة جهاز التسريب في البطين الأيسر. افتح صمام جهاز التسريب للسماح بالتسريب الملحي الهيباريني. باستخدام المقص ، قم بقص الوريد الأجوف السفلي والزائدة اليسرى للسماح بالصرف. التحكم في سرعة التروية بمعدل 50 مل في الدقيقة. بعد التروية ، باستخدام حقنة سعة 10 ملليلتر مملوءة بمحلول بارافورمالدهايد بنسبة أربعة بالمائة ، قم بثقب جذع الشريان الرئوي من خلال البطين الأيمن. قم بإصلاح أنسجة الرئة عن طريق إجراء وفرة بارافورمالدهيد بنسبة أربعة بالمائة عبر الرئتين بحجم إجمالي يبلغ 30 ملليلترا. لتصور شجرة الشرايين الرئوية ، أضف كمية متساوية من المخفف إلى مركب صب السيليكون. بعد مزج الخليط ، أضيفي عامل المعالجة بنسبة خمسة بالمائة واخلطي الخليط مرة أخرى. ثم ارسم ملليلترا واحدا من الخليط في حقنة سعة مليلتر واحد. استنفد الهواء وأدخل الإبرة في جذع الشريان الرئوي من خلال البطين الأيمن. اضغط برفق على المكبس للسماح لخليط صب السيليكون بملء شجرة الشرايين الرئوية. ضع الكتلة بأكملها في طبق بتري قبل تخزينها في ثلاجة أربع درجات مئوية طوال الليل للسماح لخليط الصب بالتبلور. اغمر الرئتين بالتتابع في محاليل الكحول الإيثيلي بنسبة 25٪ و 50٪ و 75٪ و 95٪ و 100٪ لكل منها لمدة 24 ساعة. اغمر الرئتين المجففات في ميثيل الساليسيلات لمدة 24 ساعة. مباشرة بعد الانصمام ، أظهرت الرئتان المستخرجة جلطات دموية ذاتية ومناطق مصابة باحتشاء الرئة. أدى ارتفاع الحمل من الصمات إلى مساحة أكبر من احتشاء الرئة. بالمقارنة مع عينات الرئة المأخوذة مباشرة بعد الانصمام ، أظهرت عينات الرئة التي تم جمعها بعد 24 ساعة من الانصمام تناقص بشكل ملحوظ في المناطق المحتشية مما يشير إلى إمكانية قوية لتحلل الفيبرين في الفئران. يوضح هذا الشكل شجرة الشريان الرئوي بعد الصب وتطهير الأنسجة للرئتين الطبيعية وللرئتين من الانسداد الرئوي.