Name: تزجيج أنسجة قشرة المبيض لتحقيق حالة زجاجية من التراكم (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 53 s
Description: تعلم تقنية التزجيج لأنسجة قشرة المبيض لحفظ الخصوبة في مرضى السرطان الشابات. تُحسّن هذه الطريقة من بقاء الجريبات وتزيد فرص الحمل لاحقاً مقارنة بالتجميد البطيء.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<meta charset="utf8"></head><body>تقييم صلاحية البصيلات في أنسجة قشرة المبيض البشري المزجج

<table><tbody><tr><td>1.8 مل قوارير</td><td>VWR International GmbH</td><td>479-6837</td><td></td></tr><tr><td>10 مل ماصة مصلية</td><td>Sarstedt</td><td>86.1254.001</td><td></td></tr><tr><td>4 ألواح آبار</td><td>Gynemed</td><td>GYOOPW-FW04</td><td></td></tr><tr><td>50 مل أنبوب</td><td>Sarstedt</td><td>62.559.001</td><td></td></tr><tr><td>6 ألواح آبار</td><td>Sarstedt</td><td>83.3920</td><td></td></tr><tr><td>Bacillol AF</td><td>Hartmann</td><td>973385</td><td></td></tr><tr><td>Calcein AM</td><td>Merck</td><td>17783</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase type 1A</td><td>Merck</td><td>C2674</td><td></td></tr><tr><td>Cryosure DMSO WAK</td><td>Chemie</td><td>WAK-DMSO-10</td><td></td></tr><tr><td>Custodiol</td><td>Dr. Franz K & ouml; hler Chemie</td><td>00867288</td><td></td></tr><tr><td>DPBS CTS</td><td>Gibco Life technologies</td><td>A12856-01</td><td></td></tr><tr><td>ErgoOne ماصة مساعدة</td><td>Starlab</td><td>S7166-0010</td><td></td></tr><tr><td>الإيثيلين جلايكول</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>102466</td><td></td></tr><tr><td>حاوية التعقيم Euronda</td><td>Euronda</td><td>282021</td><td></td></tr><tr><td>G-MOPS +</td> <td>Vitrolife</td><td>10130</td><td></td></tr><tr><td>Metal شبكات</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0770</td><td></td></tr><tr><td>مقص Metzenbaum</td><td>أدوات الدقة العالمية</td><td>501262102</td><td></td></tr><tr><td>N-Bath System</td><td>Nterilizer</td><td>N-Bath 3.0</td><td></td></tr><tr><td>Polyvinylpyrrolidone (PVP)</td><td>SAGE</td><td>ART-4005</td><td></td></tr><tr><td>مكمل بديل المصل (SSS)</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>99193</td><td></td></tr><tr><td>كوب</td> <td>معقمSarstedt</td><td>75.562.105</td><td></td></tr><tr><td>ملقط معقم</td><td>Carl Roth</td><td>KL05.1</td><td></td></tr><tr><td>السكروز</td><td>Merck</td><td>S0389</td><td></td></tr></tbody></table>

تزجيج أنسجة قشرة المبيض لتحقيق حالة زجاجية من التراكم

Vitrification of Ovarian Cortex Tissue to Achieve a Glassy State of Aggregation

يعرض هذا البروتوكول إجراءات تحضير وسائط التزجيج ، وأجهزة التحميل ، والتزجيج ، وإعداد وسائط الاحترار السريع ، والاحترار السريع ، وتحديد صلاحية البصيلات. تم التحقق من صحة مقارنة مباشرة بين قابلية البصيلات والعوامل الوعائية بين التجميد البطيء والتزجيج ونشرها31،32.
تم تقييم النجاح العام لبروتوكول التزجيج الموصوف من خلال مقارنة عدد البصيلات الحيوية قبل وبعد التزجيج / الاحترار السريع. يظهر الإعداد التجريبي في الشكل 1 ، ويتم عرض النتائج في الشكل 6. في 50 مريضا ، لوحظ متوسط عدد 77.98 بصيلات حيوية قبل التزجيج و 62.99 بعد التزجيج / الاحترار السريع ، مما يعكس معدل بقاء قدره 80.8٪. لم يكن هذا مختلفا بشكل كبير وفقا لاختبار ويلكوكسون33.
يتم تخصيص الشبكات المعدنية بشكل فردي بمقص حاد بحجم 25 مم × 8 مم ، والذي يتناسب مع أغطية 1.8 مل من التبريد ، كما هو موضح في الشكل 2 أ ، ج. بعد التعقيم باستخدام التعقيم بالبخار ، يتم تجميع الشبكات والأغطية المكونة من قوارير 1.8 مل تحت مقعد تدفق رقائقي ، كما هو موضح في الشكل 2 ب. يوفر هذا الإعداد ثباتا آمنا في الغطاء دون الحاجة إلى إجراءات إضافية ويوفر مساحة كافية للأنسجة ذات الأحجام المختلفة. عادة ما تكون قطع الأنسجة من 5 مم × 10 مم للزراعة وقطع قطرها 2 مم لتقييم عدد البصيلات الحيوية بعد الذوبان السريع مزججة. كلا الحجمين يتناسبان تماما مع الشبكات المعدنية.
يتم إجراء التوازن مع محاليل التزجيج (VS1 و VS2 و VS3) في صفيحة مكونة من 6 آبار على شاكر هزاز في درجة حرارة الغرفة تحت مقعد تدفق رقائقي ، كما هو موضح في الشكل 3. تضمن الأطر الزمنية في المخطط الامتصاص الفعال للإيثيلين جلايكول المجعد. يوصى باستخدام صفيحة مكونة من 6 آبار فوق أوعية مفردة لأنها تسهل الحركة السريعة للأنسجة بين المحاليل وتساعد على منع الاختلاط.
من أجل التزجيج الرأسي السريع في النيتروجين السائل ، يتم تقطيع أنسجة قشرة المبيض إلى قطع مناسبة (الشكل 4 أ). يتم وضع عينات قشرة المبيض على أجهزة التحميل (الشكل 4 ب ، ج) ويتم غمرها عموديا في النيتروجين السائل (الشكل 4 د) لتحقيق حالة زجاجية من التجميع من خلال التزجيج. تسمح الشبكات المعدنية المختارة بالتعامل الرأسي مع الأنسجة ، كما هو موضح في الشكل 4 د. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الشبكات المعدنية عالية التوصيل حراريا ، مما يضمن معدلات تبريد سريعة من 22 درجة مئوية إلى -196 درجة مئوية ، وهي خطوة مهمة للغاية في عملية التزجيج.
للاحترار السريع ، يتم تحضير RWS في كوب معقم عند 37 درجة مئوية ، ويتم تحضير ES و RS1 و RS2 في صفيحة من 6 آبار على شاكر هزاز في درجة حرارة الغرفة ، كما هو موضح في الشكل 5. يمنع الحجم الكبير من RWS الدافئ مسبقا المحلول من التبريد بشكل مفرط عند إضافة الأنسجة المزججة ويضمن بيئة دافئة باستمرار للأنسجة طوال عملية الاحترار السريع.
لتقييم وضمان معايير الجودة العالية ، يتم تلطيخ لكمات الخزعة 2 مم × 2 مم بالكالسين قبل التزجيج وبعد الاحترار السريع لتحديد صلاحية البصيلات باستخدام الفحص المجهري الفلوري34،35 (الشكل 6). تنبعث من بصيلات قابلة للحياة مضان أخضر عند 495 نانومتر بعد امتصاص الكالسين داخل الخلايا. بدلا من ذلك ، يمكن تقييم صلاحية البصيلات (الجدول 3) باستخدام أصباغ حمراء محايدة36.
باتباع الخطوات الموضحة في هذا البروتوكول ، يتم تحويل أنسجة المبيض إلى حالة زجاجية من التراكم ، مما يسهل معدلات البقاء على قيد الحياة المرتفعة بعد الاحترار السريع ، كما يؤكده الفحص المجهري الفلوري.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66801/66801fig01.jpg"> 
الشكل 1: تصميم الدراسة. تم فحص عينات قشرية المبيض من 50 مريضا قبل (طازجة) وبعد التزجيج والاحترار السريع لعدد البصيلات القابلة للحياة. لكل مجموعة ، تم زراعة قطعتين من الأنسجة بقطر 2 مم لمدة 24 ساعة قبل تقييم عدد البصيلات. تم هضم الأنسجة بالكولاجيناز وتلطيخها بالكالسين لتقييم الجدوى. تم تحديد عدد البصيلات القابلة للحياة باستخدام المجهر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66801/66801fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66801/66801fig02.jpg"> 
الشكل 2: تحضير أجهزة التحميل. تم قطع الشبكات المعدنية بحجم 8 مم × 25 مم (A). تم تعقيم الشبكات المعدنية المخصصة عن طريق التعقيم (ب). ثم تم إدخال الشبكات المعدنية المعقمة في أغطية من قوارير سعة 1.8 مل ، جاهزة للاستخدام (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66801/66801fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66801/66801fig03.jpg"> 
الشكل 3: تحضير محاليل التزجيج. تم تحضير محاليل التزجيج (VS) ونقلها إلى صفيحة من 6 آبار. تظهر الآبار حجم كل محلول وأوقات الحضانة الفردية المستخدمة في بروتوكول التزجيج. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66801/66801fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66801/66801fig04.jpg"> 
الشكل 4: معالجة قشرة المبيض وتزجيجها. تمت معالجة أنسجة قشرة المبيض للحفظ بالتبريد عن طريق إزالة النخاع وتقطيع الأنسجة إلى قطع 5 مم × 10 مم (A). بعد الحضانة في محاليل التزجيج الموضحة في الشكل 3 ، تم تحميل الأنسجة على جهاز تحميل التزجيج (B ، C). من أجل التزجيج الرأسي السريع لعينات قشرة المبيض ، تم إدخال الأغطية ذات الأنسجة المحملة بسرعة في النيتروجين السائل المعقم (D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66801/66801fig04large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66801/66801fig05.jpg"> 
الشكل 5: تحضير حلول الاحترار السريع. تم تحضير محلول الاحترار السريع (RWS) ومحلول التوازن (ES) ومحاليل الشطف (RS) 1 و 2 ونقلها إلى صفيحة مكونة من 6 آبار. تظهر الأوعية والآبار حجم كل محلول وأوقات الحضانة المقابلة. لاحظ أن RWS يتم الحفاظ عليه عند 37.2 درجة مئوية على لوحة التسخين. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66801/66801fig05large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66801/66801fig06.jpg"> 
الشكل 6: عدد الجدوى. لتقييم عدد البصيلات القابلة للحياة ، تم هضم قطع الأنسجة التي يبلغ قطرها 2 مم بالكولاجيناز وتلطيخها بالكالسين. تظهر الصور التمثيلية (أ) تلطيخ الكالسين ل 3 بصيلات مستردة قبل التزجيج. (ب) جريب قابل للحياة بعد التزجيج والاحترار السريع. (ج) جريب قابل للحياة تم استرداده قبل التجميد البطيء. (د) استعادة بصيلات قابلة للحياة بعد التجميد والذوبان البطيء. يشار إلى صلاحية البصيلات بواسطة الكالسيين ، وهي صبغة فلورية خضراء تنبعث منها مضان أخضر عند تحويلها إنزيميا بواسطة خلايا قابلة للحياة عند 495 نانومتر. شريط المقياس = 100 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66801/66801fig06large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>مقابل 1 (15 مل)</td>
			<td>جلايكول الإيثيلين</td>
			<td>10%</td>
			<td>1.5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>SSS</td>
			<td>10%</td>
			<td>1.5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>جي MOPS +</td>
			<td></td>
			<td>12 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VS 2 (15 مل)</td>
			<td>جلايكول الإيثيلين</td>
			<td>20%</td>
			<td>3 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>SSS</td>
			<td>10%</td>
			<td>1.5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>جي MOPS +</td>
			<td></td>
			<td>10.5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VS 3 (15 مل)</td>
			<td>جلايكول الإيثيلين</td>
			<td>35%</td>
			<td>5.25 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>SSS</td>
			<td>10%</td>
			<td>1.5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>سكروز</td>
			<td>0.5 مول / لتر</td>
			<td>2.57 جرام</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>لاعب ضد لاعب</td>
			<td>5 ٪ (وزن حجمي)</td>
			<td>0.75 جرام</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>جي MOPS +</td>
			<td></td>
			<td>إعلان 15 مل</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 1: تكوين محاليل التزجيج (VS).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>RWS (30 مل)</td>
			<td>سكروز</td>
			<td>0.8 مول / لتر</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>8.22 جرام</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>SSS</td>
			<td>10%</td>
			<td>3 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>جي MOPS +</td>
			<td></td>
			<td>إعلان 30 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ES (15 مل)</td>
			<td>سكروز</td>
			<td>0.4 مول / لتر</td>
			<td>2.05 جرام</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>SSS</td>
			<td>10%</td>
			<td>1.5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>جي MOPS +</td>
			<td></td>
			<td>إعلان 15 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RS 1 &amp; 2 (15 مل)</td>
			<td>SSS</td>
			<td>10%</td>
			<td>1.5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>جي MOPS +</td>
			<td></td>
			<td>إعلان 15 مل</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 2: تكوين محلول الاحترار السريع (RWS) ، ومحلول التوازن (ES) ، ومحاليل الشطف (RS). يوفر هذا الجدول مكونات وتركيزات محلول الاحترار السريع (RWS) ومحلول التوازن (ES) ومحاليل الشطف (RS) المستخدمة في معالجة ما بعد التزجيج.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>البارامتر</td>
			<td>طازج</td>
			<td>فترة</td>
			<td>تسخين سريع بعد التزجيج</td>
			<td>فترة</td>
			<td>n</td>
			<td>*قيمة P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[سد]</td>
			<td></td>
			<td>[سد]</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>عدد الجدوى الجرابية [ن]</td>
			<td>77.98</td>
			<td>0-386</td>
			<td>62.99</td>
			<td>0.5-349</td>
			<td>50</td>
			<td>0.130</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>77.95</td>
			<td></td>
			<td>80.02</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>* اختبار ويلكوكسون</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 3: النتائج التمثيلية للبقاء الجريبي. يعرض هذا الجدول نتائج تقييمات صلاحية البصيلات قبل الحفظ بالتبريد وبعد الاحترار السريع. تم استخدام قطعتين من الأنسجة بقطر 2 مم لكل مريض لحساب عدد البصيلات القابلة للحياة قبل وبعد التزجيج / الاحترار السريع. تم تحليل عينات الأنسجة المزدوجة من 50 مريضا باستخدام اختبار ويلكوكسون.

Ovarian tissue cryopreservation (OTC) is an important option for fertility preservation. For patients whose gonadotoxic treatments cannot be postponed or ...

vitrification-ovarian-cortex-tissue-to-achieve-glassy-state

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

نقدم هنا لتكيف من الوضوح السلبي وأسلوب إعادة البناء ثلاثي الأبعاد للتصور المفرج المبيض وجرابي الشعيرات الدموية في المبايض سليمة الماوس.

إعادة البناء ثلاثي الأبعاد بنية الأوعية الدموية المبيض الماوس مسح الوضوح السلبي

تصف هذه المخطوطة بروتوكولاً للحد الأدنى من الانبعاثات البويضية غير الناضجة من البويضات القطة مع وسائل الإعلام المختبرية الصنع على الدعامات التجارية. وهو يغطي كل خطوة من عزل البويضات من الزناد السابقين vivo إلى التزجيج والاحترار.

الحد الأدنى من حجم الحساسية من البويضات غير ناضجة القطط

في المختبر ثقافة قشرة المبيض البقري وتأثير الغذائية درج خطوة النظام الغذائي على البيئة الدقيقة المبيض هو تقديم. تم استزراع قطع قشرة المبيض لمدة سبعة أيام وتم تقييم المنشطات والسيتوكينات ومراحل الجريب. وكان العلاج النظام الغذائي درج الخطوة زيادة تولد الستيرويد مما أدى إلى تطور الجريب في الثقافة.

الأبقار المبيض القشرة الأنسجة الثقافة

يعترف العديد من الجمعيات العلمية الدولية بالتبريد البويضات كمعيار ذهبي للحفاظ على الخصوبة لدى النساء بعد الولادة. تضمن الاستراتيجيات السريرية والمختبرية المناسبة أقصى قدر من الفعالية والكفاءة والسلامة لعلاجات الحفاظ على الخصوبة.

الحفاظ على الخصوبة من خلال التزجيج Oocyte: المنظورات السريرية والمختبرية

ويهدف البروتوكول إلى توفير طريقة قياسية لتزجيج البويضات الأغنام البالغة والحدث. وهو يشمل جميع الخطوات من إعداد وسائل الإعلام النضج في المختبر لثقافة ما بعد الاحترار. يتم تزجيج البويضات في مرحلة MII باستخدام Cryotop لضمان الحد الأدنى من الحجم الأساسي.

التزجيج في البويضات الناضجة في المختبر التي تم جمعها من المبيضين الكبار وprepubertal في الأغنام

يمكن لفريق متخصص أن يقدم لمرضى Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser خيار إجراء تحفيز المبيض الخاضع للرقابة وحفظ البويضات بالتبريد في وقت رأب المهبل بالمنظار.

استرجاع البويضات بالمنظار والحفظ بالتبريد أثناء رأب المهبل لعلاج متلازمة ماير-روكيتانسكي-كوستر-هاوزر

يصف هذا البروتوكول نموذجا جديدا ثلاثي الأبعاد (3-D) يستخدم هيدروجيل هيالورونان مرتبط بالتيرامين لتغليف وزراعة بصيلات ما قبل الأنترال من مبيض الفأر. نقوم أيضا بتفصيل طريقتين لحفظ بصيلات المبيض بالتبريد عن طريق التزجيج.

تطبيق هيدروجيل هيالورونان جديد لزراعة البصيلات ثلاثية الأبعاد ومنهجية حفظ بصيلات المبيض بالتبريد في الفأر

وقد تم وضع التصوير وضع نظام ثنائي لعدم الاتصال تقييم أكسجة الأنسجة الجلدية وظيفة الأوعية الدموية.

وضع مزدوج تصوير الأنسجة الجلدية الأكسجة وظيفة الأوعية الدموية

هذه الورقة يوضح نهجا مبتكرا البصرية (أو صورة photovoice الاستنباط) لتحقيق عملية عادلة في مجال الرعاية السريرية للمرضى الذين يعيشون مع ظروف صحية مزمنة ، تضيء الثغرات في المعارف السريرية ، وإقامة علاقات أفضل العلاجية ، وتحديد الأهداف التي تركز على المريض وإمكانيات للشفاء .

باستخدام أساليب البصرية والسردية لتحقيق عملية عادلة في مجال الرعاية السريرية

الفحص تخليص الظهارية وصفها هنا يستفيد من خلايا fluorescently المسمى والوقت الفاصل بين الفحص المجهري لتصور فيديو وكميا قياس التفاعلات بين الأجسام الشبه الكروية سرطان المبيض المتعددة الخلايا الظهارية وmonolayers الخلية. طرازا هذا الفحص الخطوات في وقت مبكر من ورم خبيث سرطان المبيض.

في الفحص المختبري التخليص الظهارية النماذج أن الخطوات في وقت مبكر من الإنبثاث سرطان المبيض

تعلم تقنية التزجيج لأنسجة قشرة المبيض لحفظ الخصوبة في مرضى السرطان الشابات. تُحسّن هذه الطريقة من بقاء الجريبات وتزيد فرص الحمل لاحقاً مقارنة بالتجميد البطيء.

تزجيج أنسجة قشرة المبيض لتحقيق حالة زجاجية من التراكم

استكشف المزيد من الفيديوهات