Name: إجراءات الزراعة في المختبر لللولبية الشاحبة ، الزهري (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T12:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: تعلم زراعة Treponema pallidum في المختبر مع خلايا Sf1Ep الثديية لدراسة الزهري. تتيح هذه الطريقة إنتاج كميات كبيرة من البكتيريا اللولبية وإجراء الفحوصات الوراثية والمضادات الحيوية بكفاءة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>زراعة قابلة للتطوير في المختبر من T. pallidum باستخدام الزراعة المشتركة لخلايا الثدييات

<ol><li>Implementing the global health sector strategies on HIV, viral hepatitis and sexually transmitted infections, 2022-2030: Report on progress and gaps. World Health Organization. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925">https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925</a> 2022-2030 (2024).</li>
<li>Antal, G. M., Lukehart, S. A., Meheus, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endemic+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">The endemic treponematoses.</a> Microbes Infect. 4 (1), 83-94 (2002).</li>
<li>Norris, S. J., Paster, B. J., Smibert, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNorris%2C+SJ+%22Bergey%27s+Manual+of+Systematic+Bacteriology%22">Bergey's Manual of Systematic Bacteriology</a>. 4, Springer. New York, NY. (2010).</li>
<li>Lumeij, J. T., Mikalová, L., Šmajs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+difference+between+hare+syphilis+and+rabbit+syphilis%3F+Cross+infection+experiments+between+rabbits+and+hares%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Is there a difference between hare syphilis and rabbit syphilis? Cross infection experiments between rabbits and hares.</a> Vet Microbiol. 164 (1-2), 190-194 (2013).</li>
<li>Knauf, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+prevalence+and+genetic+diversity+of+Treponema+paraluisleporidarum+isolates+in+European+lagomorphs%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">High prevalence and genetic diversity of Treponema paraluisleporidarum isolates in European lagomorphs.</a> Microbiol Spectr. 12 (1), e0177423(2024).</li>
<li>Šmajs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+genome+sequence+of+Treponema+paraluiscuniculi%2C+strain+Cuniculi+A%3A+the+loss+of+infectivity+to+humans+is+associated+with+genome+decay%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Complete genome sequence of Treponema paraluiscuniculi, strain Cuniculi A: the loss of infectivity to humans is associated with genome decay.</a> PLoS One. 6 (5), e20415(2011).</li>
<li>Šmajs, D., Norris, S. J., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+diversity+in+Treponema+pallidum%3A+implications+for+pathogenesis%2C+evolution+and+molecular+diagnostics+of+syphilis+and+yaws%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetic diversity in Treponema pallidum: implications for pathogenesis, evolution and molecular diagnostics of syphilis and yaws.</a> Infect Genet Evol. 12 (2), 191-202 (2012).</li>
<li>Šmajs, D., Strouhal, M., Knauf, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+human+and+animal+uncultivable+treponemal+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetics of human and animal uncultivable treponemal pathogens.</a> Infect Genet Evol. 61, 92-107 (2018).</li>
<li>Norris, S. J., Cox, D. L., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+Treponema+pallidum%3A+correlation+of+functional+activities+with+genome+sequence+data%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biology of Treponema pallidum: correlation of functional activities with genome sequence data.</a> J Mol Microbiol Biotechnol. 3 (1), 37-62 (2001).</li>
<li>Radolf, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%3A+making+a+living+as+a+stealth+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum, the syphilis spirochete: making a living as a stealth pathogen.</a> Nat Rev Microbiol. 14 (12), 744-759 (2016).</li>
<li>Schaudinn, F. R., Hoffman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorl%C3%A4ufiger+bericht+%C3%BCber+das+Vorkommen+f%C3%BCr+Spirochaeten+in+syphilitischen+Krankheitsprodukten+und+bei+Papillomen%5BTitle%5D)+AND+%22Arb+Gesundh+Amt+Berlin%22%5BJournal%5D)">Vorläufiger bericht über das Vorkommen für Spirochaeten in syphilitischen Krankheitsprodukten und bei Papillomen.</a> Arb Gesundh Amt Berlin. 22, 528-534 (1905).</li>
<li>Schaudinn, F., Hoffmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%C3%9Cber+Spirochaetenbefunde+im+Lymphdr%C3%BCsensaft+Syphilitischer%5BTitle%5D)+AND+%22Deut+Med+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Über Spirochaetenbefunde im Lymphdrüsensaft Syphilitischer.</a> Deut Med Wochenschr. 31 (18), 711-714 (1905).</li>
<li>Turner, T. B., Hollander, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+the+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Biology of the treponematoses.</a> World Health Organization. , (1957).</li>
<li>Lukehart, S. A., Marra, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+laboratory+maintenance+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Isolation and laboratory maintenance of Treponema pallidum.</a> Curr Protoc Microbiol. , Chapter 12, Unit 12A.1 (2007).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Cox, D. L., Moeckli, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+virulent+Treponema+pallidum+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Cultivation of virulent Treponema pallidum in tissue culture.</a> Infect Immun. 32, 908-915 (1981).</li>
<li>Cox, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Culture of Treponema pallidum.</a> Meth Enzymol. 236, 390-405 (1994).</li>
<li>Edmondson, D. G., Hu, B., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vitro+culture+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Long-term in vitro culture of the syphilis spirochete Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> mBio. 9 (3), e01153-e01218 (2018).</li>
<li>Edmondson, D. G., DeLay, B. D., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+affecting+continuous+in+vitro+culture+of+Treponema+pallidum+strains%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Parameters affecting continuous in vitro culture of Treponema pallidum strains.</a> mBio. 12 (1), e03536-e03620 (2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cultivation+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro cultivation of the syphilis spirochete Treponema pallidum.</a> Curr Protoc. 1 (2), e44(2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Wormser, G. P., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+to+doxycycline%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vitro susceptibility of Treponema pallidum subsp. pallidum to doxycycline.</a> Antimicrob Agents Chemother. 64 (10), e00979-e01020 (2020).</li>
<li>Leimer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+selective+antibiotic+for+Lyme+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A selective antibiotic for Lyme disease.</a> Cell. 184 (21), 5405-5418 (2021).</li>
<li>Haynes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+linezolid+on+Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+agent%3A+A+preclinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of linezolid on Treponema pallidum, the syphilis agent: A preclinical study.</a> EBioMedicine. 65, 103281(2021).</li>
<li>Houston, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+characterization+of+peptides+with+antimicrobial+activity+From+the+syphilis+spirochete%2C+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification and functional characterization of peptides with antimicrobial activity From the syphilis spirochete, Treponema pallidum.</a> Front Microbiol. 13, 888525(2022).</li>
<li>Tantalo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subspecies+pallidum%3A+an+in-vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility of Treponema pallidum subspecies pallidum: an in-vitro study.</a> Lancet Microbe. 4 (12), e994-e1004 (2023).</li>
<li>Hayes, K. A., Dressler, J. M., Norris, S. J., Edmondson, D. G., Jutras, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+screen+identifies+beta-lactam+antibiotics+which+can+be+repurposed+to+target+the+syphilis+agent%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Antimicrob+Resist%22%5BJournal%5D)">A large screen identifies beta-lactam antibiotics which can be repurposed to target the syphilis agent.</a> NPJ Antimicrob Resist. 1 (1), 4(2023).</li>
<li>Tantalo, L. C., Molini, B. J., Bose, M., Klausner, J. D., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+isolation+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+from+fresh+and+frozen+needle+aspirates+of+primary+experimental+syphilis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">In vitro isolation of Treponema pallidum subsp. pallidum from fresh and frozen needle aspirates of primary experimental syphilis lesions.</a> Sex Transm Dis. 50 (3), 180-183 (2023).</li>
<li>Edmondson, D. G., De Lay, B. D., Hanson, B. M., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolates+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+Nichols+provide+evidence+for+the+occurrence+of+microevolution+during+experimental+rabbit+infection+and+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clonal isolates of Treponema pallidum subsp. pallidum Nichols provide evidence for the occurrence of microevolution during experimental rabbit infection and in vitro culture.</a> PLoS One. 18 (3), e0281187(2023).</li>
<li>Lin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+TprK+profiling+of+in+vivo+and+in+vitro-propagated+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+reveals+accumulation+of+antigenic+variants+in+absence+of+immune+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal TprK profiling of in vivo and in vitro-propagated Treponema pallidum subsp. pallidum reveals accumulation of antigenic variants in absence of immune pressure.</a> PLoS Negl Trop Dis. 15 (9), e0009753(2021).</li>
<li>De Lay, B. D., Cameron, T. A., De Lay, N. R., Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transcriptional+profiles+of+Treponema+pallidum+during+experimental+infection+of+rabbits+and+in+vitro+culture%3A+Highly+similar%2C+yet+different%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Comparison of transcriptional profiles of Treponema pallidum during experimental infection of rabbits and in vitro culture: Highly similar, yet different.</a> PLoS Pathog. 17 (9), e1009949(2021).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of Treponema pallidum subsp. pallidum, the syphilis spirochete.</a> PLoS Pathog. 17 (7), e1009612(2021).</li>
<li>Phan, A., Romeis, E., Tantalo, L., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+transformation+and+selection+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro transformation and selection of Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> Curr Protoc. 2 (8), e507(2022).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+with+an+artificially+impaired+TprK+antigenic+variation+system+is+attenuated+in+the+rabbit+model+of+syphilis%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum subsp. pallidum with an artificially impaired TprK antigenic variation system is attenuated in the rabbit model of syphilis.</a> bioRxiv. , 524629(2023).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Becker, F. A., Stout, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+virulent+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+cell-free+and+tissue+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of virulent Treponema pallidum (Nichols strain) in cell-free and tissue culture systems.</a> Infect Immun. 18, 173-182 (1977).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 6th Edition. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22U.S.+Department+of+Health+and+Human+Services%2C+Centers+for+Disease+Control+and+Prevention%2C+National+Institutes+of+Health%22">U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health</a>. , (2020).</li>
<li>Norris, S. J., Miller, J. N., Sykes, J. A., Fitzgerald, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+oxygen+tension%2C+sulfhydryl+compounds%2C+and+serum+on+the+motility+and+virulence+of+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+a+cell-+free+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Influence of oxygen tension, sulfhydryl compounds, and serum on the motility and virulence of Treponema pallidum (Nichols strain) in a cell- free system.</a> Infect Immun. 22 (3), 689-697 (1978).</li>
<li>Cox, C. D., Barber, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+uptake+by+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Oxygen uptake by Treponema pallidum.</a> Infect Immun. 10 (1), 123-127 (1974).</li>
<li>Magnuson, H. J., Eagle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minimal+infectious+inoculum+of+Spirochaeta+pallida+%28Nichols+strain%29%2C+and+a+consideration+of+its+rate+of+multiplication+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The minimal infectious inoculum of Spirochaeta pallida (Nichols strain), and a consideration of its rate of multiplication in vivo.</a> Am J Syph. 32, 1-18 (1948).</li>
<li>Cumberland, M. C., Turner, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rate+of+multiplication+of+Treponema+pallidum+in+normal+and+immune+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The rate of multiplication of Treponema pallidum in normal and immune rabbits.</a> Am J Syph. 33, 201-211 (1949).</li>
<li>Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+multiplication+and+subculture+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+in+a+tissue+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the multiplication and subculture of Treponema pallidum subsp. pallidum in a tissue culture system.</a> Infect Immun. 53, 534-539 (1987).</li>
<li>Baseman, J. B., Nichols, J. C., Rumpp, O., Hayes, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum+from+infected+rabbit+tissue%3A+resolution+into+two+treponemal+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum from infected rabbit tissue: resolution into two treponemal populations.</a> Infect Immun. 10, 1062-1067 (1974).</li>
<li>Hanff, P. A., Norris, S. J., Lovett, M. A., Miller, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum%2C+Nichols+strain%2C+by+Percoll+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum, Nichols strain, by Percoll density gradient centrifugation.</a> Sex Transm Dis. 11, 275-286 (1984).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 م EDTA ، درجة الحموضة 8.0</td><td>سيجما &nbsp ؛</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>10x إيرل s أملاح متوازنة ، بدون Mg 2 + ، Ca 2 + </td> <td>Gibco</td><td>14155063</td><td></td></tr><tr><td>15 و 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطي المعقمة التي يمكن التخلص منها &nbsp ؛</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>2 مل قوارير مبردة &nbsp ;</td><td>Corning</td><td>430659</td><td></td></tr><tr><td>لوحات زراعة الخلايا المكونة من 6 آبار لزراعة T. pallidum &nbsp;</td><td>الصقر</td><td>353046</td><td>يجب أن تحتوي الألواح على أغطية تبخر منخفضة.</td></tr><tr><td>70٪ إيثانول</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>75 سم 2 قوارير زراعة الأنسجة بأغطية تهوية</td><td>Corning</td><td>43061U</td><td></td></tr><tr><td>93.5٪ نيتروجين ، 5٪ CO2 ، و 1.5٪ أكسجين لوسط التوازن المسبق والثقافات</td><td>N / A</td> N <td>/</td><td></td></tr><tr><td>A 95٪ نيتروجين و 5٪ CO2 لوسط التوازن المسبق والثقافات</td><td>N / A N /</td> A N <td>/ A</td><td></td></tr><tr><td>96 بئر تبخر منخفض ، صفائح دقيقة شفافة ، مسطحة القاع معالجة بثقافة الأنسجة Corning</td><td>Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>ماصة قابلة للتعديل متعددة القنوات بسعة 200 ul &nbsp ؛</td><td>N / A</td><td>N /</td><td>A اختياري ، ولكنه مفيد جدا لاستنساخ</td></tr><tr><td>المياه من درجة ثقافة</td><td>الخلايا Sigma</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>CMRL 1066 بدون L-Glutamine أو Phenol Red</td><td>US Biological</td><td>C5900-03A</td><td></td></tr><tr><td>CO2 لحاضنات زراعة الغاز الثلاثي &nbsp ؛</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>خزان تخزين خلايا النيتروجين السائل المبردة</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>D-الجلوكوز</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>وحدات الترشيح القابل للتصرف ، 0.2 ومايكرو ؛ م ، > سعة 100 مل</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>الماصات التي يمكن التخلص منها: 25 مل ، 10 مل ، 5 مل ، شفط</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol &nbsp ؛</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>M1902</td><td></td></tr><tr><td>DMSO (درجة زراعة الخلايا المعقمة)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Eagle ' s MEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4655</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني ، معطل بالحرارة &nbsp ؛</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4135</td><td>نوصي بشدة بهذا المنتج. يجب إجراء فحص مسبق للتوافق مع ثقافة T. pallidum إذا كنت تستخدم علامة تجارية أو رقم كتالوج مختلف.</td></tr><tr><td>فريزر مع القدرة على الحفاظ على -70 درجة ؛ C أو -80 &deg; C</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>لتخزين T. الشاحب ؛ يمكن استخدام تخزين النيتروجين السائل بدلا من ذلك</td></tr><tr><td>وسط التجميد (Sf1Ep medium + 10٪ [v / v] DMSO)</td> <td>N / A</td> N <td>/</td> A <td></td></tr><tr><td>أسطوانات الغاز مع التركيبات المناسبة</td><td>N / A</td><td>GasPak</td><td></td></tr><tr><td>150 جرة لاهوائية ذات تهوية (جرة البيرة)</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>11-816</td><td></td></tr><tr><td>جلسرين</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>غرف عد هيلبر مع أحكام توما</td><td>معدات هوكسلي الطبية والمختبرية</td><td></td><td>لتقدير T. شاحب< / م ></td></tr> مقياس <tr><td>الدم</td><td>N / A</td><td>N / A</td> <td>& NBSP ؛ لكمية خلية Sf1Ep</td></tr><tr><td>حاضنة خزان التبديل</td><td>NuAire&nbsp;</td><td>NU-1550 TankGuard التلقائي CO2 حاضنة خزان التبديل</td><td>اختياري ، ولكنه مفيد جدا في الحفاظ على ظروف O2 المناسبة.</td></tr><tr><td>المجهر المقلوب مع بصريات تباين الطور</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>لعرض مزارع الخلايا Sf1Ep</td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>L-Histidine &nbsp ؛</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>MEM الأحماض الأمينية غير الأساسية</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>مجهر مع مكثف المجال المظلم</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>يجب أن يكون للمجهر هدف 40x و 15x عدسة.</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>محول متعدد القنوات للشفاطة &nbsp;</td><td>Integra</td><td>155520</td><td>اختياري ، ولكنه مفيد لاستنساخ</td></tr><tr><td>NaHCO3 (7.5٪)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>النيتروجين لحاضنة الغاز الثلاثي</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7017</td><td></td></tr><tr><td>Sf1Ep (NBL-11) الخلايا</td> مجموعة <td>الثقافة من النوع الأمريكي</td><td>CCL-68</td><td></td></tr><tr><td>بيروفات</td> <td>الصوديومSigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>PBS معقم (بدون كلوريد الكالسيوم وكلوريد المغنيسيوم) &nbsp;</td><td>خزانات كاشف معقمة Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>، حجم 50 أو 100 مل</td><td>N / A</td><td>N / A</td> </td></tr><tr><td>>T. الشاحف عينة ، مجمدة أو طازجة & nbsp ؛</td><td></td><td></td><td>من عدوى الأرانب أو في الثقافة المختبرية</td></tr><tr><td>حاضنة زراعة الأنسجة التي تم الحفاظ عليها عند 37 درجة ؛ C ، 5٪ CO2</td><td>N / A N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>حاضنة ثقافة الأنسجة ثلاثية الغازات التي تم الحفاظ عليها عند 34 درجة ؛ C ، 5٪ CO2 ، 1.5٪ O2</td><td>Thermofisher</td><td>Heracell & trade ؛ VIOS 160i حاضنة ثلاثي الغاز CO2</td><td>اختياري ؛ يمكن استخدام الجرار اللاهوائية بدلا من ذلك (انظر المرجع 17)</td></tr> <tr><td>محلول Trypsin-EDTA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td></td></tr><tr><td>مصدر فراغ (مثل فراغ المنزل) ، وأنابيب التفريغ ، ومقياس التفريغ ، والموصلات</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>ماء ، مناسب لزراعة الخلايا ، معقم بالترشيح ،</td><td>منقى Sigma-Aldrich</td><td>W3500</td><td>موصى به للتحضير المتوسط ؛ يقلل من تباين الثقافة</td></tr></tbody></table>

إجراءات الزراعة في المختبر لللولبية الشاحبة ، الزهري

Procedures for In Vitro Cultivation of Treponema pallidum, the Syphilis Spirochete

باستخدام الشروط الموصوفة ، يحتفظ T. pallidum عادة بحركة &gt;90٪ ويتكاثر لوغاريتميا مع وقت مضاعفة من 33 ساعة إلى 45 ساعة لمدة 7 أيام تقريبا قبل دخول المرحلة الثابتة (الشكل 3). على مدار أسبوع واحد ، تخضع اللولبيات لما يقرب من 4-5 مضاعفات (الشكل 4). ). بالإضافة إلى ذلك ، قد تنمو سلالات مختلفة من T. الشاحبة بمعدلات مختلفة. سلالات مجموعة SS14 من T. الشاحبة تميل إلى أن يكون لها أوقات مضاعفة أبطأ من تلك الموجودة في مجموعة نيكولز17.
قد تؤدي تغذية الثقافات إلى إطالة وقت الزراعة لعدة أيام ولكن غالبا ما تفشل طبقة خلية Sf1Ep بعد أسبوع من الزراعة. علاوة على ذلك ، تصل اللولبيات إلى الحد الأعلى للكائنات الحية حوالي 5 × 107 / مل. عادة ما تستمر الثقافات المنقولة على فترات 7 أيام في الضرب اللوغاريتمي مع مرحلة تأخر قليلة أو معدومة. غالبا ما يصعب تمرير الكائنات الحية في المرحلة الثابتة.
ترتبط معظم الشريطية الشاحبة بخلايا Sf1Ep. ومع ذلك ، يبقى ما يكفي من T. pallidum في المادة الطافية بحيث يمكن إزالة العينات المتوسطة بشكل دوري للتحقق من الجدوى والتكاثر. إذا كانت هناك حاجة إلى تقدير دقيق ، فيجب قياس حجم الوسط الذي تمت إزالته ، وعدد T. pallidum كميا ، وإضافة العدد الإجمالي للكائنات الحية التي تمت إزالتها إلى التعداد النهائي عند الحصاد.
في الدراسات السابقة ، كانت كفاءة الاستنساخ (عدد المزارع الإيجابية لكل كائن حي ملقح) 12.5٪ ل 2 T. pallidum الملقح لكل بئر و 6.7٪ ل 0.5 T. الشاحبة الملقحة لكل بئر27. وبالتالي ، فمن المحتمل أن يمثل أي بئر إيجابي نتاج كائن حي واحد في أي من هذه العينات. ومع ذلك ، يجب التحقق من استنساخ المجموعات السكانية الناتجة من خلال فحص الثقافة للتأكد من تجانسها في المواقع غير المتجانسة في الثقافة الأم. الطريقة الأكثر تحديدا لإثبات أن الثقافة متساوية المنشأ هي من خلال تسلسل الجينوم الكامل27.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig01.jpg"> الشكل 1: مخطط انسيابي لإجراء الزراعة في المختبر T. pallidumin . أعيد طبع هذا الرقم بإذن من إدموندسون ونوريس (2021) 19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig02.jpg"> الشكل 2: رسم تخطيطي للنظام لموازنة T. كاشف زراعة الشاحبة في بيئة منخفضة الأكسجين. يتم توصيل فتحة تهوية جرة البيرة عبر مفصل T بمصدر فراغ (مثل فراغ المنزل) وأسطوانات الغاز التي تحتوي على مخاليط غاز مخصصة (5٪ CO2 ، توازن النيتروجين و 1.5٪ O2 ، 5٪ CO2 ، توازن النيتروجين). يقيس مقياس التفريغ المضمن الفراغ المسحوب في البرطمان. يتم سحب الفراغ في الجرة إلى حوالي -58 كيلو باسكال. ثم يتم إعادة ملء البرطمان المفرغ ببطء بمخاليط الغاز. يتم إعادة تعبئة جرة Brewer ثلاث مرات بنسبة 5٪ CO2 ، وتوازن النيتروجين قبل الإخلاء النهائي ، وإعادة تعبئتها بنسبة 95٪ N2 ، و 5٪ CO2 ، و 1.5٪ O2. ثم تتم إزالة الثقافات أو الوسائط من البرطمان ونقلها بسرعة إلى الحاضنة منخفضة الأكسجين. بالتناوب ، يمكن تثبيت الأنبوب بين جرة Brewer والمفصل T الأول بإحكام ، وفصل الأنبوب عن المفصل T ، ويمكن نقل جرة Brewer بأكملها إلى حاضنة 34 درجة مئوية. أعيد طبع هذا الرقم بإذن من إدموندسون ونوريس (2021) 19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig03.jpg"> الشكل 3: منحنيات نمو T. pallidum المزروعة بخلايا Sf1Ep مع وسط TpCM-2. تم زرع الثقافات الثلاثية المتوازية مع T. pallidum. تم حصاد النسخ المتماثلة في كل نقطة زمنية. تمثل النتائج المتوسط + SEM لهذه الثقافات. (أ) تظهر التغييرات في المشعرية الشاحبة لكل مزرعة و (ب) النسبة المئوية للحركة. تم تكييف هذا الرقم بإذن من Edmondson et al.18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig04.jpg"> الشكل 4: مثال على مرور الثقافة المختبرية ل T. الشاحب، سلالة نيكولز. تم زرع الثقافات الثلاثية المتوازية مع T. الشاحبة وتم تمريرها أسبوعيا باستخدام تخفيف 1:20. تظهر مخطط سن المنشار أعداد T. pallidum لكل ثقافة والعدد المنقول إلى ثقافات جديدة في كل نقطة زمنية. تمثل النتائج متوسط ± SEM لثلاثة مكررات بيولوجية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig04large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
جدول 1: الحجم المتوسط ونسب البذر لأوعية الاستزراع. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%201.xlsx" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 2: وسائط زراعة T. pallidum . يجب تعقيم جميع الوسائط بعد التحضير. يمكن تخزين وسط Sf1Ep عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى شهرين. عادة ما يتم تصنيع TpCM-2 قبل يوم واحد من الاستخدام. يجب أن يكون وسط التفكك مقتبسا ومجمدا. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%202.xlsx" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>

For over a century, Treponema pallidum subsp. pallidum, the spiral-shaped bacterium that causes syphilis, could only be propagated by inoculation and ...

procedures-for-vitro-cultivation-treponema-pallidum-syphilis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

المصدر: Eggers، C.H. التلاعب الجيني بوساطة العاثية لمرض لايم Spirochete Borrelia burgdorferi. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو تحضير مزرعة بوريليا بورجدورفيري المعدلة وراثيا المصممة باستخدام الحمض النووي للعاثيات الخاملة التي تحمل جينا مقاوما للمضادات الحيوية. بعد اختيار المضادات الحيوية وحضانها ، يؤدي المحفز الكيميائي إلى تلف الحمض النووي ، مما يؤدي إلى استئصال وتكرار وتجميع فيريونات جديدة تحتوي على جين المقاومة. بعد الطرد المركزي الثاني وإعادة التعليق ، تكون الخلايا البكتيرية التي تحتوي...

تحضير وتحريض مزارع Borrelia burgdorferi لإنتاج الجسيمات الفيروسية

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

يعد القياس الكمي السريع والفعال لنمو المتفطرة السلية داخل الخلايا أمرا بالغ الأهمية لمتابعة العلاجات المحسنة ضد السل (TB). يصف هذا البروتوكول مقايسة الكشف اللوني القائمة على المرق باستخدام نظام زراعة سائل آلي لتحديد نمو MTB في الضامة المعالجة بالعلاجات الموجهة للمضيف المرشح.

نظام زراعة آلي للاستخدام في الاختبارات قبل السريرية للعلاجات الموجهة للمضيف لمرض السل

نظرا لعتامة التربة ، لا يمكن بسهولة تصور التفاعلات بين الميكروبات المكونة لها بدقة خلوية. هنا ، يتم تقديم أداتين للسوائل الدقيقة ، والتي توفر فرصا جديدة للتحقيق في التفاعلات الفطرية الميكروبية. الأجهزة متعددة الاستخدامات وسهلة الاستخدام ، مما يتيح التحكم الزماني المكاني العالي والتصوير عالي الدقة على المستوى الخلوي.

أدوات الموائع الدقيقة للتحقيق في التفاعلات الفطرية الميكروبية على المستوى الخلوي

إن قدرة البكتيريا على نقل الحمض النووي بين الخلايا البكتيرية تجعلها أدوات فعالة للتلاعب الجيني بمضيفيها البكتيريين. تظهر هنا منهجية لتحريض واستعادة واستخدام φBB-1 ، وهي بكتيريا من Borrelia burgdorferi ، لتحويل الحمض النووي غير المتجانس بين سلالات مختلفة من مرض لايم spirochete.

التلاعب الجيني بوساطة العاثيات لمرض لايم Spirochete Borrelia burgdorferi

الثقافة في المختبر هي طريقة للكشف المباشر عن وجود البكتيريا الحية. يصف هذا البروتوكول طرق استزراع اللولبيات البوريليا المتنوعة، بما في ذلك تلك الخاصة بمجمع بوريليا بورغدورفيري بالمعنى الواسع للكلمة، وأنواع بوريليا الحمى  الانتكاسية، وبوريليا مياموتوي. هذه الأنواع سريعة وبطيئة النمو ولكن يمكن استزراعها.

طرق زراعة اللولبيات من مجمع بوريليا بورغدورفيري سينسو لاتو وحمى الانتكاس بوريليا

التثقيب الكهربائي هو طريقة سريعة ومعتمدة على نطاق واسع لإدخال الحمض النووي الخارجي في جنس Rickettsia. يوفر هذا البروتوكول طريقة تثقيب كهربائي مفيدة لتحويل البكتيريا داخل الخلايا الملزمة في جنس Rickettsia.

طريقة التثقيب الكهربائي لتحويل الريكتسيا spp. باستخدام ناقل مكوك يعبر عن البروتين الفلوري في خطوط خلايا القراد

تظهر هذه الدراسة بروتوكولا مفصلا لإجراء الفحص المجهري لتمدد البنية الفوقية في ثلاث مراحل في دورة حياة المثقبية الكروزية ، العامل الممرض المسؤول عن مرض شاغاس. نقوم بتضمين التقنية المحسنة لبروتينات الهيكل الخلوي ووضع العلامات على البروتينات.

الفحص المجهري للتمدد فوق الهيكلي في ثلاث مراحل من دورة حياة المثقبية الكروزية في المختبر

توضح هذه المقالة إجراءات لتشكيل والتصور لبيوفيلم البكتيريا نما داخل الشريحة الغرفة 8...

تشكيل بيوفيلم في المختبر في غرفة الشرائح 8 جيد

بالمذنبات والتحول في المختبر زراعة البلهارسيا المنسونية Schistosomules

تعلم زراعة Treponema pallidum في المختبر مع خلايا Sf1Ep الثديية لدراسة الزهري. تتيح هذه الطريقة إنتاج كميات كبيرة من البكتيريا اللولبية وإجراء الفحوصات الوراثية والمضادات الحيوية بكفاءة عالية.

إجراءات الزراعة في المختبر لللولبية الشاحبة ، الزهري

استكشف المزيد من الفيديوهات